The aim of this study was to examine the possibility of periodontal ligament regeneration when autotransplantation was used by the periodontal ligament fibroblasts cultured on the acellular dermal matrix in teeth without a periodontal ligament. One minipig was used in this study. The mandibular and maxillary permanent incisors were ex-tracted for the culture of the periodontal ligament cells. The roots of the unextracted teeth were classified into a positive control group, in which the normal periodontal ligament was preserved. The roots of the extracted teeth were divided into the following two groups: The negative control group, in which the periodontal ligament had been removed and the acellular dermal matrix was not applied; and an experimental group, in which the periodontal ligament had been removed and periodontal ligament fibroblast cultured on an acellular dermal matrix was applied. The prepared teeth were transplanted, and completely submerged using physical barrier membranes. The animal was sacrificed 4 weeks after the autotransplant. The transplanted teeth were examined histologically. In this study, the periodontal ligament was normal in the positive control group, and ankylosis was discovered on the denuded root surface in the negative control group. Periodontal ligament-like connective tissue was found adjacent to the denuded root and the new cementum-like layer of hard tissue was formed in the experimental group. These results suggest that the periodontal ligament fibroblasts cultured on the acellular dermal matrix may play a role in regenerating the periodontal ligament-like tissue with new cememtum-like tissue formation.
The wound healing process in fetus is quite different form that of adult. Regeneration plays an important role and scarless wound healing is possible in early gestational fetal period. Recently, the various effects of the hypoxia and reoxygenation in the wound healing process have been investigated by many researchers. The hypoxic state is known to alter protein synthesis and gene expression of TGF-${\beta}$, VEGF. The authors hypothesize there may be differences between fetal and adult fibroblast and this difference may play a possible role in the mechanism of scarless fetal wound healing. In this study, we investigated the growth of fibroblast, the amount of collagen deposition, the amount of protein synthesis and gene expression in TGF-${\beta}$(transforming growth factor-${\beta}$), VEGF(vascular endothelial growth factor) under the various hypoxic and reoxygenation conditions. Through these processes, we tried to determine the relationships between scarless fetal wound healing and hypoxic condition. In control group, fetal and adult fibroblasts were cultured under normoxic condition. The experimental groups were allocated into four different groups. The differences in TGF-beta, VEGF under 24, 48, 72 hours were statistically investigated. Compared to adult fibroblast group, there was a statistically significant increase (p<0.01) in the rates of protein synthesis in TGF-beta and VEGF of fetal fibroblast. In this study, these results may reflect the possibility that fetal fibroblast are more susceptible to change in oxygen and has a superior rate of angiogenesis through increased VEGF expression. The possible superiority of angiogenesis in fetal fibroblast may play an important role in scarless wound healing.
Purpose: Large skin defect by various causes, should be covered by autologous skin graft. But, the donor site of autologous skin graft is limited and leaves permanent donor scar and contracture. There have been our trial to engineer artificial skin using allogenic dermis (AlloDerm) with basement membrane. Methods: Dermal and epidermal layer were separated by immersing in dipase solution for 30 minutes, and the separated layers were treated with 0.05% trypsin for 10 minutes. And then each layer was cultivated to fibroblasts and keratinocytes on a culture medium. Fibroblasts were first penetrated into basement membrane of allogenic dermis facing down, then allogenic dermis was flipped over to face up and keratinocytes were transplanted to allogenic dermis. Results: Observing artificial skin fabricated in vitro, we found following: 1) The artificial skin opened in air for 5 days formed epidermal layer. In dermal layer, fibroblast was distributed evenly among all. 2) The artificial skin opened in air for 30 days formed thicker and thicker, and it formed basement membrane, spinous and granular layers. PAS stain to confirm existence of basement membrane showed positive reaction. 3) Cytokeratin 10 stain to confirm the formation of epidermal layer showed positive reaction. 4) The formation of thick keratin, lamellar body and desmosome similar to human skin were observed in result of an electron micrograph. Conclusion: As a result of research, the structure seen in normal skin such as rete ridge, is found in reproduced artificial skin. This type of artificial skin can be used as a useful model for investigating skin disease and for clinical application also.
Ultraviolet B (UVB) exposure is a risk factor for skin damage resulting in oxidative stress, inflammation, and cell death. The purpose of this study was to investigate the physicochemical properties of Platycodon grandiflorum (PG) to improve its biological activities using a three-step steaming process. We investigated the protective effects of PG and steamed PG extracts on human dermal fibroblasts (HDFs) against UVB radiation-induced oxidative stress and inflammation as well as the underlying mechanisms. The antioxidant potential of the PG extracts was evaluated by measuring the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) and 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) scavenging activity. ABTS and DPPH were shown by the 0, 30, and 70% ethanol extracts of 2S-PG and 3S-PG ($IC_{50}$, 28~45 and $27{\sim}30{\mu}g/mL$, respectively). Treatment of UVB-irradiated cells with steamed PG ($25{\sim}400{\mu}g/mL$) did not affect their viability. The streamed PG extract suppressed UVB-induced generation of reactive oxygen species (ROS). In addition, streamed PG extract reduced cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) protein expression in UVB-irradiated HDF, regulating nuclear factor $(NF)-{\kappa}B$ expression. These findings suggest that steamed PG extract may be potentially effective against inflammation associated with UVB-induced oxidation stress.
In this study, we prepared CheonJeongKiBo-Dan(7 oriental medicinal plants, 7OMP: Astragalus Membranaceus root, Panax Ginseng root, Glycyrrhiza Glabra (licorice) root, Schizandra Chinensis fruit, Polygonatum Odoratum, Rehmannia Glutinosa root, Paeonia Albiflora root) by extracting them in one reactor and studied its efficacies on skin. UV irradiation has been suggested as a major cause of photoaging in skin. In order to investigate protective effects against UV-B induced cellular damage, 7OMP was extracted with 70% ethanol and dissolved in DMSO. The protective effect was detected by MTT assay, reactive oxygen species (ROS) generation, phosphorylation of ATR and p53 in human dermal fibroblast cell system after UV-B irradiation. 7OMP reduced UV-B-induced cellular damage in HDFs cells, and inhibited ROS generation. UV-B-induced toxicity accompanying ROS production and the resultant DNA damage are responsible for activation of ATR, p53 and Bad. In this study, 7OMP hampered phosphorylations of ATR and p53 in human dermal fibroblasts. Therefore, 7OMP may be protective against UV-induced skin photoaging.
잎새버섯(Grifola frondosa HB0071)이 생산하는 세포외 다당체인 GF-glucan이 사람섬유아세포에서 자외선(UVA)조사 시 증가되는 MMP-1 발현에 미치는 영향을 조사하였다. 자외선으로부터 조사된 섬유아세포에 GF-glucan을 처리한 농도에 따라 MMP-1 발현이 억제되었으며, RT-PCR를 이용해 세포내 MMP-1 mRNA 발현 또한 감소하는 것으로 나타났다 즉, 최대 GF-glucan $0.5\%$를 처리했을 때 $54.4\%$의 MMP-1 발현을 억제하였다. 결과적으로, 잎새버섯 HB0071로부터 생산된 GF-glucan은 피부노화와 관련된 extracellular matrix (ECM) 조직에 손상을 주는 MMP-1의 활성을 억제하여 자외선으로부터 손상된 피부의 광노화로부터 보호해주는 것으로 밝혀졌다.
Purpose: Standards of alloy for porcelain fused to metal crown be classified by metallic factor and biological factor. Metallic factors consist of stability of alloy composition and mechanical strength and surface characteristics for chemical bond. Biological factors be considered properties of metallic elements and problems originated by toxicity and hypersensitive reaction. Alloys considered such controversial points are the most suitable alloy for dental instrument. Method: Alloys added Be and Nb using Ni-Cr alloy which has been widely used for dental instrument be selected and classified experimental group. Non-addition Be and Nb to Ni-Cr alloy classify control group and addition Be alloy is Be-experimental group, addition Nb alloy is Nb-experimental group. Specimens for cytotoxicity analysis gave effect to washing and sterilization. and then made an experiment on elution with cell medium after disinfection. It conducted specimens within cell medium with 24hours, 48hours, 72hours, respectively. It cultured human dermal fibroblast(HDF) using cell medium for cytotoxicity test and then investigated elution rate through spectroscopic analysis by MTT-assay. Result: As results of cytotoxicity test by MTT-assay, cultured cell rate of VII measured more low numerical value within elution medium for 24hours focused on control group. Also, cultured cell rate of K3 alloys observed low value for 48hours, 72hours than value of control group. Conclusion: According to final result that synthesize above results, Ni-Cr alloy added Be and Ni has little difference in Cytotoxicity by MTT-assay.
이 논문의 목적은 미강추출물 및 탈지미강추출물의 항산화력과 피부에 대한 안전성을 살펴보는데 목적이 있다. 미강과 탈지미강은 물과 에탄올로 추출하여 사용하였다. 미강추출물의 항산화능을 보기위해 DPPH로 유도된 free radical의 소거능에 의한 항산화 활성, 리보플라빈에 의해 유도된 Superoxide 생성 억제 활성, Xanthine Oxidase 저해활성을 측정하였으며 피부에 대한 안전성을 보기위해 인간 섬유아세포의 세포독성을 MTS방법을 통하여 살펴보았다. 본 연구결과는 미강추출물과 탈지미강추출물 중에서 특히 에탄올추출물은 탁월한 항산화력을 보였으며 인간 섬유아세포에서 세포독성 없이 안전하였다. 이상의 결과로 미강 및 탈지미강 추출물 중 에탄올 추출물은 화장품과 같은 미용산업 분야에서 기능성 소재로 활용과 스킨케어분야에 융복합 할 수 있을 것으로 사료된다.
${\beta}ig$-h3, is a TGF-${\beta}$-induced gene product, extracellular matrix protein with 68 kDa MW(683 amino acids) and has been known for its possible roles in cell adhesion, spreading, migration and proliferation. To minimize a proteolytic degradation of ${\beta}ig$-h3, ${\beta}ig$-h3 incorporated chitosan sponge was prepared and its effects on fibroblast adhesion and migration were investigated. And its wound healing efficacy was evaluated in deep 2nd degree burn rabbit ear wound model. ${\beta}ig$-h3 enhanced fibroblast adhesion and proliferation. In histological observation, a significant over-proliferation of epidermal regeneration was observed in ${\beta}ig$-h3/chitosan dressing applied wound while epidermal regeneration was not proceeded yet in chitosan only treated wound. ${\beta}ig$-h3/sponge dressing could enhance epidermal regeneration.
Purpose: In order to overcome the limitations of the conventional cryopreserved fibroblast or keratinocyte allograft method used in the treatment of diabetic foot ulcers, we reported a pilot study in 2004 demonstrating promising results of a fresh fibroblast allograft method in eight patients. However, the number of cases was insufficient for full evaluation and the follow-up duration was not long enough to determine the efficacy and safety of the method. This encouraged us to conduct this follow-up study to fully evaluate the use of noncryopreserved fresh human fibroblast allografts in treating diabetic foot ulcers. Methods: Thirty-seven patients with diabetic foot ulcers were treated using fresh fibroblast allografts. Human dermal fibroblasts from healthy teenagers were cultured in DMEM/F-12 medium supplemented with 10% serum. The cultured cells were applied on the wounds immediately following debridement, with fibrin being used as a cell carrier. In eight weeks, percentages of complete healing, mean healing time, and patient satisfactions were assessed, with follow-up time ranging from 6 to 40 months. Results: Our study showed that 83.8% of the treated patients were complete healed. The time required for complete healing was $30.9{\pm}10.1$ days. Patient satisfaction scores for the experimental treatment were higher than those for the conventional method(mean scores of $8.1{\pm}1.1$ and $4.8{\pm}1.4$, respectively). No adverse events related to the study treatment occurred. Conclusion: The use of fresh human fibroblast allografts was found to be a safe and effective treatment for diabetic foot ulcers.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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