해양 미세조류인 Isochrysis galbana Parke의 성장에 미치는 여러 환경요인과 배지요인의 영향을 조사하고 최적 배양조건을 구하였다. 그 결과를 요약하 면 다음과 같다. 1. 인공바닷물은 자연바닷물보다 다소 낮은 비성 장속도와 최종 균체농도를 나타내었다. 2.. 자연바닷물이 기초배지로 사용되었을 때 2mM 이상의 충분한 질산염 농도가 필요하였다. 그러나 미량원소와 비타민의 영향은 관찰되지 않았다. 3. 완충용액요로 Tris를 첨가한 경우 pH는 일정 하게 유지가 가능하나 비성장속도와 최종 균체농도 가 감소하였다. 4. 최적 초기 pH와 온도는 각각 pH 8, $20^{\circ}C$ 였다. 5. 벚세기를 400-21001ux의 범위에셔 변화시켰을 때 비성장속도는 18501ux까지 증가하였고 그 이 후로는 일정하였다. 6. 10mL에서 70mL로 Working volume을 증가 시켰을 때 초기 성장속도는 비슷하였으나 최종 균체 농도가 감소하는 경향을 보였다. 7. Working volume이 30mL일 때 최적 교반속 도는 100rpm정도이고, 더 높은 교반속도에서는 최 종 균체농도의 감소가 관찰되었다. 8. 플라스크배양의 최적조건에서 최대 비성장속도 와 최종 균체농도는 각각 $O.021hr^{-1}$과 1.1g/L로 얻어졌다.
버들송이의 액체종균 제조를 위한 배양조건과 종균으로 사용시의 접종량을 검토하기 위한 시험 결과 배지 종류로는 감자추출배지(PSB)가 가장 좋았으며 온도는 $25^{\circ}C$, pH는 7.0에서 좋았다. 접종량별로는 $10{\sim}15ml$ 접종한 것이 우수하였다. 버들송이의 액체종균은 13l들이의 간이배양 장치를 제작하여 감자추출배지 10l에 10일간 배양후 균체건조량 21.8 g을 얻었다. 이를 병재배용 850 ml PP병의 톱밥배지에 10m1(균체량 21.8mg상당)씩 접종한 결과 배지 배양기간은 30일로써 톱밥종균을 사용할 때 보다 5일이 단축되었다. 또한 버섯발생병은 톱밥종균을 사용할 때의 75%에 비하여 92%로 높아졌고 자실체 수량도 122g으로 톱밥종균보다 10% 증수되었다. 따라서 본 액체종균 배양기술은 버섯 병재배 시설을 활용한 버들송이의 연중 재배에 도입하므로써 안정된 버섯생산으로 농가소득 증대에 기여할 것으로 본다.
유칼리나무 펠리타(Eucalyptus pellita) 선발목(5년생)의 기내 대량증식을 위해 1L 규모로 1) 고체배양(대조구), 2) 액체정치배양, 3) 개방형 액체배양 등 3가지 배양법이 시도 되었고, 그 결과를 토대로 배양규모를 10L로 확대하여 대량배양 가능성을 조사하였다. 1L 배양용기에서 4주간 배양한 결과, 공기가 공급 된 개방형 액체배양에서 가장 좋은 생장 결과를 얻었다. 이는 액체배지에 의한 원활한 염류 공급과 배양용기내 공기의 환기에 의해 얻어진 결과로 생각된다. 배양 규모를 10L로 확대하여 액체대량배양을 실시한 결과, 식물체의 생장은 대조구인 고체배양에 비교하여 마디 수에 있어서 370%, 엽 면적 3.6배, 그리고 신초 길이 3.3배 신장하는 결과를 보였다. 이는 개방형 액체대량배양 시스템이 유칼리나무 클론증식시 생산성을 향상시키는데 적합한 시스템임을 보여주는 결과라고 하겠다.
Ovarian follicular fluid contains both stimulatory and inhibitory agents that influence the growth and maturation of oocyte. In the present study, an attempt was made to isolate and study the biological properties of ovarian follicular fluid peptide(s) in buffaloes. Bubaline ovarian follicular was made steroid- and cell-free. A protein fraction was obtained by saturation (30-35% level) of the follicular fluid with ammonium sulfate. The protein fraction was purified with Sephadex-G 50 gel filtration chromatography and a single peak was obtained in the eluant volume, which was lyophilized. SDS-PAGE of the lyophilized fraction revealed a single band and the molecular weight of the peptide was 26.6 kDa. The peptide stimulated the cumulus cell expansion and in vitro maturation rate of oocytes in buffaloes in a dose dependent manner when it was incorporated at different dose levels (0, 10, 25, 50, 100 and 1,000 ng $ml^{-1}$ of maturation medium). The basic culture medium consisted of TCM 199 with Bovine serum albumin (0.3%). The in vitro maturation rates were comparable to those obtained with a positive control medium (TCM 199+20 ng EGF $ml^{-1}$+steer serum (20%)). Further purification and biological assays may throw more light on the nature and functions of this peptide.
수경재배에서는 근권내 양분의 집적 정도는 급액의 양과 밀접한 관계를 가지기 때문에 급액의 양(횟수)이 토마토의 생육과 수량에 미치는 영향이 크다. 따라서 본 시험에서는 코이어를 이용한 토마토 장기 수경재배에 급액량이 근권의 무기이온에 미치는 영향을 구명하고자 하였다. 적산일사량을 기준으로 급액량을 조절하였으며 생육시기별로 적산일사량 설정치를 변경하며 급액량을 4수준으로 처리하였다. 처리별 매일의 급액량과 배액량을 조사하였고 배액율을 계산하였다. 급액량이 많을수록 토마토의 수분 흡수량은 증가하는 경향이었다. 그러나 High 처리구는 2월과 3월에 Medium high 처리구에 비하여 수분 흡수가 감소하였다. 월별 평균 급액량과 배액율을 계산하여 배액율이 20-30%되는 급액 구간으로 1월은 $120-140J/cm^2$, 2월은 $100-120J/cm^2$, 3월은 $80-100J/cm^2$, 4월은 $70-90J/cm^2$, 5월은 $60-75J/cm^2$로 적정한 범위를 정할 수 있었다. 급액량이 많을수록 이온들의 농도가 낮아서 근권의 양분집적을 상당 부분 방지할 수 있었는데 양분을 흡착하는 코이어 배지의 특성 때문에 배액율이 20-30%인 경우 근권의 무기이온의 농도는 상당히 높았다. 그런데 P와 K는 처리에 관계없이 배액에서 급액농도 보다 낮아지는 경우가 발생하였으며, 급액량이 많은 처리에서도 Mg와 S가 가장 잘 집적되는 이온이었다. 일사량이 적은 시기에는 급액량에 따른 배액내 무기이온의 농도는 큰 차이를 나타내지 않았으나, 일사량이 많은 시기에는 급액량이 적을수록 배액의 무기이온의 농도가 높았다. 특히, 3월 이후에는 급액량 조정만으로는 배액의 이온농도 상승을 방지하기 어려워 우선적으로 급액 EC를 낮춰 근권에 양분이 집적되는 것을 막을 필요가 있었다.
Objectives: The objective of this in vitro study was to evaluate and compare the cytotoxicity of four different root canal sealers i.e. Apexit Plus (Ivoclar Vivadent), Endomethasone N (Septodont), AH-26 (Dentsply) and Pulpdent Root Canal Sealer (Pulpdent), on a mouse fibroblast cell line (L929). Materials and Methods: Thirty two discs for each sealer (5 mm in diameter and 2 mm in height) were fabricated in Teflon mould. The sealer extraction was made in cell culture medium (Dulbecco's Modified Eagle's Medium, DMEM) using the ratio 1.25 $cm^2/mL$ between the surface of the sealer samples and the volume of medium in a shaker incubator. Extraction of each sealer was obtained at 24 hr, 7th day, 14th day, and one month of interval. These extracts were incubated with L929 cell line and 3-(4,5-dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay was done. Two-way ANOVA for interaction effects between sealer and time and Post-hoc multiple comparison using Tukey's test across all the 16 different groups were used for statistical analysis. Results: Apexit Plus root canal sealer was significantly less toxic than other sealers (p < 0.05) and showed higher cellular growth than control. Endomethasone N showed mild cytotoxicity. AH-26 showed severe toxicity which became mild after one month while Pulpdent Root Canal Sealer showed severe to moderate toxicity. Conclusions: Apexit Plus was relatively biocompatible sealer as compared to other three sealers which were cytotoxic at their initial stages, however, they became biocompatible with time.
In this work, mass production of Bacillus licheniformis SCD121067 through medium optimization by statistical experimental method was studied. First, galactose, yeast extract and potassium phosphate dibasic were selected as carbon, nitrogen and phosphate sources for mass production of B. licheniformis SCD121067 by using one factor at a time method. Second, according to the result of Plackett-Burman experimental design, key factors was yeast extract and $K_2HPO$. Finally, the response surface methodology was performed to obtain the optimum concentrations of two selected variables. The optimized medium composition consisted of 20 g/L galactose, 36 g/L yeast extract, 0.41 g/L $K_2HPO4$, 0.25 g/L $Na_2CO_3$, 0.4g/L $MgSO_4$ and 0.01g/L $CaCl_2$. Dry cell weight (15.4 g/L) by optimum production medium were increased 10 times, as compared to that determined with basic production medium (1.5 g/L). Fermentation conditions were examined for the mass production of B. licheniformis. The effect of temperature, agitation speed, pH and aeration rate on the mass production of B. licheniformis were also studied in a batch fermenter which was carried out in a 2.5 L bioreactor with a working volume of 1.5 L containing optimized production medium. As a result, dry cell weight of batch culture was 30.7 g/L at $42^{\circ}C$, 300 rpm, pH 8.0 and 2 vvm.
송이(Tricholoma matsutake)균을 고체배양과 액체배양에서 균사 생장의 적합한 조건을 구명함으로 앞으로 송이균을 대량 배양하여 접종함으로 송이를 생산할 수 있는 가능성을 얻기 위하여 본 연구를 실시하였다. 송이균은 고체배지의 경우 HA, TMM 배지에서 생장이 양호하였으며, 액체배지의 경우 PDB, TMM 배지에서 균사의 생장이 우수하게 나타났다. 온도에서는 $25^{\circ}C$에서 균사의 생장이 가장 효과적이었다. 송이균이 잘 생장하는 탄소원은 다당류인 Dextrin이고 질소원은 Yeast extract와 Peptone이고 $Fe_{2}(SO_{4})_{3}{\cdot}H_{2}O$와 KCl이었다. 액체배양에서는 균사의 생장은 플라스크 배양에서 진탕배양에서 정치배양보다 $2{\sim}7$배 정도의 균사의 생장이 좋았으며, 100 ml 가장 양호하였다. 균사의 절편을 삼각플라스크에 $6{\sim}7$개 넣어서 배양하는 것이 양호하였으며 배양기간은 접종 후 4주에서부터 균사의 생장과 펠릿의 분화가 나타나기 시작하여 9주까지 활발하게 생장하였다. 대량배양에서 균사생장이 양호한 배지로는 감자추출배지이었으며 8리터 병에 200 ml 접종량을 넣고 8주간 배양하면 송이의 균사체량이 가장 많이 얻을 수 있었다.
To study the regulation of porcine follicular cell apostosis by gonadotropin, steroid, and nitric oxide, we analyzed DNA fragmentation, the hallmark of apoptosis, and nitrite production of porcine granulosa cells. Dissected indiidual follicles from ovary were separated in size (small, 2-3 mm; medium, 5-6 mm; large, 7-8 mm) and isolated granulosa cells were classified morpholocally as atretic or nonatretic. Nitrite concentration was measured by mixing follicular fluids with an equal volume of Griess reagent. Follicular nitric oxide (NO) concentration of healthy follicles was higher than that of atretic follicles. Apoptotic DNA fragmentation was suppressed in non-apoptotic granulosa cells. Follicular apoptosis was induced by androgen but prevented by gonadotropin in vitro. Apoptosis was confined to the granulosa cells. But it was not clear whether apoptosis of granulosa cells were isolated, incubated with or without gonadotropin, androgen and sodium nitroprusside (SNP), respectively at $37^{\circ}C$ for 24 hrs. Cultured granulosa cells were used to extract genomic DNA and culture media was asssayed for nitrite concentration. Nitrite production of culture media was increased, while apoptotic DNA fragmentation was suppressed in PMSG, hCG, testosterone+SNP and SNP treated groups. Nitrite concentration in culture media was decreased, but apoptotic DNA fragmentation was induced in testosterone treated group. These data suggest that NO production and apoptosis may be involved of granulosa cell apoptosis induced by testosterone.
This Research was the standardization of nutrient sources by reviewing the possibility of cultivation and analysis of imported nutrient sources used in Pleurotus ostreatus culture. As a first result, the concentration of heavy metals was not detected or trace, and the total nitrogen content of cotton seed pomace was 6.22% in Australia, which was higher than that of Chinese or USA. As a second result of physical properties of nutrient sources, the water holding capacity of beet pulp from Egypt was higher with increasing pressure. The volume water content of US was highest at 400hpa and 500hpa in case of cottonseed meal. Third, the content of total nitrogen was the highest at pH 5.51 and the total nitrogen content was the highest at 2.45, and the C/N ratio was the highest at 28.18. Last result shows that first germination day, yield and biological effciency of all treatments were not significant differnet except T2. These results shows that australian cootton was inappropriate to Pleurotus ostreatus culture. Nevertheless, the safety and standardization of the Pleurotus ostreatus culture medium should be assured by reviewing the media low material importing season, mushroom yield and nutrient sources.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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