Fine structure of dormant and swollen conidiospore from Trichoderma koningii and the mechanism of protoplasting from the conidiospore were studied by scanning and transmission electron microscopy. The cell wall of dormant conidiospore was two-layered structure which consisted of electron dense outer layer and electron transparent inner layer. After 8.5 hrs incubation. the conidiospore was swollen and the outer layer of cell wall shown unequal thickness and partial breakage. Protoplast was released through the pore which has been formed by the breakage of outer layer and dissolution of newly synthesized cell wall for germ-tube formation. Swollen conidiospore and protoplast in releasing process contained various cell organelles and vacuoles with electron dense materials. The protoplast contained looser cytoplasm and had no cell wall materials outside of plasmamembrane.
Direct PCR from intact fungal cells is not readily suitable to all fungi mainly because of difficulties in rupturing the cell walls. Microwave irradiation has been proven to be useful in fungal DNA extraction protocol. Here we describe a fast template preparation method for PCR amplification from Aspefillus nidulans conidiospores using microwave irradiation. We optimized the duration far microwave irradiation, and the amount of template DNA for PCR. Amplification from samples prepared in this manner was so efficient that we could get PCR products with size enough to identify transformants. We believe that this is a time-saving procedure for screening true transformants of A. nidulans.
Improved methods for the isolation and purification of conidial protoplast were investigated and conidial proplast from auxotrophic mutants were fused. The reaction time for isolation of protoplasts from the swollen condiospores preincubated in liquid minimal medium supplimented with 2-deoxy-D-glucose was shorten by reaction with mixture of 2% driselase and 2% ${\beta}-glucuronidase$ (1:1). The conidial protoplast could be highly purified by using 5% Ficoll 400 as a centrifugation medium. Nucleus of the conidial protoplast was stained with Giemsa stain and the conidial protoplast had one nucleus. It was also confirmed that the conidial protoplast was true protoplast with no cell wall remnant at the outside of plasma menbrane. Fusion frequencies of the conidial protoplast from auxotrophic mutants ranged from $3.4{\times}10^{-1}\;to\;4.9{\times}10^{-1}$. These values were higher than those of mycelial protoplast by a factor of 5 to 28.
Neurospora crassa accumulated cadmium. iron, manganese and lead in the mycelium. The growth of N. crassa was inhibited in the presence of cadmium but not in the presence of iron or manganese. In the presence of lead. the growth of N. crassa was accelerated. In the presence of cadmium. mycelium became thick and a conidiospore grew into a mycelial ball instead of normal threadlike gro~1h. Each metal wa'i accumulated in different subcellular organelles bound to protein and induced different proteins.
Conditions for isolation of protoplasts from conidiospores of Trichoderma koningii ATCC 26113 were tested. Maximum production of conidial protoplasts was obtained by preincubation of conidiospores on liquid minimal medium for 8 1/2 hrs. and by reaction with cell wall lytic enzyme for 3 hrs. Among effective cell wall lytic enzymes (Driselase, p-Glucuronidase, Novozyme and Zymolyase), Driselase was the most effective one on the production of conidial protoplasts. The production of conidial protoplasts was also enhanced by addition of 2-Deoxy-D-Glucose $(25{\mu}g/ml)$ into liquid minimal medium. Over 70% of the initial swollen conidia, preincubated in liquid minimal medium supplemented with 2-Deoxy-D-Glucose $(25{\mu}g/ml)$, were converted to protoplasts by incubation with 2% (w/v) commercial lytic enzyme Driselase at $28^{\circ}C$ for 3 hrs. The reversion frequency of the conidial protoplasts was about 30 times (25-50%) higher than that of mycelial protoplasts (0.6-1.3%).
Formation of conidium, an asexual organ on the hyphae, was examined from ten species of Pleurotus. Conidiospores of them were distinguished into two types of spores; an elliptical and a globose spores. Dikaryotic hyphae of ten species and monokaryotic hyphae of three species were observed to produce conidiospore. Conidia were observed on the hyphae grown on mushroom complete agar medium but were not on mushroom minimal agar medium. Two aconidial mutants were obtained by the ultraviolet irradiation.
Forniation ancl ~regcncration oi' conitlial pro1oplast of Pc, ti~i.rlli~in~~~ c~rr~~culo.hryupmel.- - czllulolytic Ihngus. were examined. By using Novozyme 134(1'!/0 w/c) as a cell wall lytic enzyme. the highest yield of protopl;~sts exceeding 501%, war obtained from the qwollen conidiosporcs preincubatrd in the minimal medium containing 2-tleoxy-D-glucose(2-UC;. 75 pglml) for 10-11 11. No protoplast were obtained horn dormant spores. The regeneration frequency of the protoplasts was 49.2'!11. which was higher than that of mycclium originated protoplast (4.6-17.X1X, . in 0.6 M MgS04. pH 5.6). 'l'lie best osmotic stahilizcr ror the isoaltion and regcueration of thc protoplast was 0.6 M iimmonium sulfatc and 0.6 M magnesiuni sulfhte. respectively. 'I'lie process of the protoplast isolaiton l'ro~n swollen cnnirliospore ancl regeneration ha\, ing two pattcrns from protoplast were obsen'etl through light microscope.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.24
no.6
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pp.964-969
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1995
For the effective utilization of cellulosic biomass, conidial protoplast fusion between Aspergillus niger MAN-831(${\beta}-glucosidase$) and A. wentii MAW-538(CMCase and avicelase), which produced potently cellulolytic enzymes was carried out. Optimal conditions for formation and regeneration of protoplast were conidiospore age-5 dyuas. $2-DG-30\mu\textrm{g}/ml$, preincubation time-4 hours, osmotic stabilizer-0.7M KCl, novozyme(7mg/ml)+driselase(2.5mg/ml) and reaction time of enzyme-5 hours. Optimal conditions for protoplast fusion were obtained by treatment of protoplasts with 15mM CaCl2 and 25% polyethylene glycol 4000(pH 6~7) as fusogenic agent at $36^{\circ}C$ for 25~30 minutes. The frequency was then $7.94{\times}10^{-4}$. CMCase, avicelase and ${\beta}-glucosidase$ activity of fusant F-208 strain was 1.5, 1.3, 1.2 times higher than those of parental strains, respectively.
This experiment was carried out to find the method for mass production by artifical cultivition and to analyze the components of Paecilomyces japonica according to several media. Time of inoculation of the Paecilomyces japonica using silkworm was on first day of five molting and infection rate was 72.0%. Optium medium for mass production of the Paecilomyces japonica was known effective for increasing dry weight and fruitbody at brown rice 80g plus pupa powder 20g. Dry weight of Paecilomyces japonica using fungus of silkworm was 1.2g including pupa and length of fruitbody was appeared 3.0cm to 3.5cm. Content of $\beta$ - glucan was very high as 40.5% at inoculation on the first day of the five molting while 16.4% at brown rice, 20.7% at pupa, 23.1% at brown rice plus pupa powder, and 28.7% at pine sawdust plus wheat bran. Mycelium was poor and pinkly conidiospore was formed on media of centipede, maggot and powder of silkworm.
Park, Jong-Myong;Park, Sung-Jin;Kim, Wha-Jung;Ghim, Sa-Youl
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.22
no.7
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pp.1015-1020
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2012
Antifungal cement mortar or microbiological calcium carbonate precipitation on cement surface has been investigated as functional concrete research. However, these research concepts have never been fused with each other. In this study, we introduced the antifungal calcite-forming bacteria (CFB) Bacillus aryabhattai KNUC205, isolated from an urban tunnel (Daegu, South Korea). The major fungal deteriogens in urban tunnel, Cladosporium sphaerospermum KNUC253, was used as a sensitive fungal strain. B. aryabhattai KNUC205 showed $CaCO_3$ precipitation on B4 medium. Cracked cement mortar pastes were made and neutralized by modified methods. Subsequently, the mixture of B. aryabhattai KNUC205, conidiospore of C. sphaerospermum KNUC253, and B4 agar was applied to cement cracks and incubated at $18^{\circ}C$ for 16 days. B. aryabhattai KNUC205 showed fungal growth inhibition against C. sphaerospermum. Furthermore, B. aryabhattai KNUC205 showed crack remediation ability and water permeability reduction of cement mortar pastes. Taken together, these results suggest that the $CaCO_3$ precipitation and antifungal properties of B. aryabhattai KNUC205 could be used as an effective sealing or coating material that can also prevent deteriorative fungal growth. This study is the first application and evaluation research that incorporates calcite formation with antifungal capabilities of microorganisms for an environment-friendly and more effective protection of cement materials. In this research, the conception of microbial construction materials was expanded.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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