Formation and Regeneration of Conidial Protoplast from Penicilliun verruculosum

Penicillium verruculosum 으로부터 분생자 원형질체의 생성과 재생

Forniation ancl ~regcncration oi' conitlial pro1oplast of Pc, ti~i.rlli~in~~~ c~rr~~culo.hryupmel.- - czllulolytic Ihngus. were examined. By using Novozyme 134(1'!/0 w/c) as a cell wall lytic enzyme. the highest yield of protopl;~sts exceeding 501%, war obtained from the qwollen conidiosporcs preincubatrd in the minimal medium containing 2-tleoxy-D-glucose(2-UC;. 75 pglml) for 10-11 11. No protoplast were obtained horn dormant spores. The regeneration frequency of the protoplasts was 49.2'!11. which was higher than that of mycclium originated protoplast (4.6-17.X1X, . in 0.6 M MgS04. pH 5.6). 'l'lie best osmotic stahilizcr ror the isoaltion and regcueration of thc protoplast was 0.6 M iimmonium sulfatc and 0.6 M magnesiuni sulfhte. respectively. 'I'lie process of the protoplast isolaiton l'ro~n swollen cnnirliospore ancl regeneration ha\, ing two pattcrns from protoplast were obsen'etl through light microscope.

섬유소 분해능이 우수한 P. verruculosum 의 분생포자로부터 원형질체의 생성 및 재생에 대하여 조사하였다. 균의 원형질체 생성을 위한여 2-deoxy-D-glucose(2-DG) 가 첨가된 최소배지에서 분생포자를 10-12 시간 전배양 시킨후 시판 세포벽분해효소들을 작용시켜 본 결과 그중 Novozyme 234 (1%, w/v) 에서 50% 이상의 가장 좋은 원형질체 생성 수율을 보였다. 전배양 되지 않은 포자로부터는 원형질체 생성이 이루어지지 않았으며 원형질체 생성율을 향상시키기 위한 첨가테로서 2-DG 의 효과가 무첨가에 비해 2배 이상의 수율을 증가시켰다. 포자 원형질체의 재생율은 49.2% 로 동 균주의 균사체 원형질체의 재생율4.6-27.8%(삼투압 조절체로서 0.6 M magnesium sulfate) 보다 높았다. 원형질체 생성 및 재생을 위한 상투압 안정제로서는 0.6M ammonium sulfate 와0.6 M magnesium sulfate가 가장 적절하였다. 광학 형미경을 통하여 부풀린 포자로부터 원형질체의 생성과정과 두 가지 각기 다른 양상의 재생과정이 관찰되었다.