• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권2호
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• pp.133-137
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• 1986

원생동물인 Tetrahymena thermophila의 17S-rDNA구조 및 hygromycin 내성 기구에 대한 연구의 일부로서 hygromycin 내성변이주 hmr3의 17S-rDNA를 대장균의 vector pBR 322에 cloning하였다. 우선 rDNA는 hot phenol-cresol 용액으로 추출하여 제한효소 Hind III 처리로서 약 2.2kbp의 17S-rDNA를 agarose 전기영동상에서 분리하였다. 이를 pBR 322에 cloning하여 wild type의 17S-rDNA probe와 colony hybridization시켜 선별하였다. 그중 5-19 균주의 recombinant plasmid로부터 17S-rDNA 의 전사 orientation위치가 pBR322의 tetracyline내성 유전자 쪽으로 삽입되어 있는 것을 확인하였다.

• 미생물학회지
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• 제21권4호
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• pp.229-237
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• 1983

Aspergillus nidulans의 tRNA 유전자의 구성과 발현기착을 연구하기 위하여 우선 Aspergillus의 총 tRNA 유전자를 cloning 하였다. Aspergillus의 핵 DNA롱 포자로 부터 분리해 내고 본질 형성에서 분리한 BamHI과 T4 DNA ligase를 사용하여 pBR322플라스미드에 재조합시켜서 cloning하였다. 15벤의 transformation을 하여 30,000개 의 transformants 얻었고, 이 중 Aspergillus DNA를 가지고 있는 colony는 5,300켜개였다. In vivo에 서 S2p로 표지 된 total tRNA를 probe로 하여 colony hybridization 실험 결과, 105개의 total tRNA유전자 clone을 얻었다. 위의 결과와 cohybridization 실험 결과를 분석해 보면, Asprgillus의 tRNA 유전자는 yeast의 그것보다는 좀 더 밀집되어 존재한다고 생각된다.

• 미생물학회지
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• 제32권4호
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• pp.258-263
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• 1994

보리수나무(Elaeagnus umbellata) 뿌리혹엣 분리한 공생균주인 Frankia 균주 EuIK1 게놈에 대해 K. pneumoniae의 nifH,D를 탐침으로 Southern hybridization을 수행한 결과, 3.2 Kb와 5.5 Kb BamHI 절편과 15 Kb PstI 절편이 강한 혼성화 반응을 보여 이들 절편에 nifH,D 유전자가 존재함을 확인하였다. 동일 탐침을 사용한 colony hybridization을 통해 pWE15 cosmid vector 에 작성되 게놈 library로부터 하나의 nif-클론 (pEuNIF)을 선별하였다. 이 클론을 BamHI으로 절단한 후 동일한 탐침으로 혼성화 반응을 수행한 결과, 3.2 Kb와 5.5 Kb가 강한 혼성화 반응을 보였으며, 이 결과는 게놈 혼성화 반응 결과와 일치하였다. 그러나 Frankia FaC1의 nifH 만을 탐침으로 이용한 결과 3.2Kb BamHI 절편만이 혼성화 반응을 나타내었다. 또한 3.2 Kb의 3‘ 말단과 5.5 Kb의 5’ 말단의 염기서열로부터 추론한 아미노산 서열을 ArI3의 nifD와 비교한 결과 182번부터 240번까지, 241번부터 282번까지의 아미노산 서열과 각각 매우 높은 유사성을 보였다. 이러한 결과로부터 3.2Kb 절편에는 nifH와 일부의 nifD 서열이 존재하고, 이 절편에 연속된 5.5Kb 절편에는 나머지 nifD서열이 존재함을 알 수 있었다.

• 약학회지
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• 제38권3호
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• pp.293-299
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• 1994

Forty nine clinical isolates of S. aureus showing resistance to erythromycin(EM) were selected from 83 strains isolated recently in Korea. Fourteen strains of S. aureus showing inducible resistance to MLS antibiotics were selected by disc agar diffusion method. Colony hydridization was executed using two MLS inducible resistance genes, ermA and ermC, identified previously from S. aureus as probes. S. aureus 375 and S. aureus 507 whose genes were not homologous to those probes were finally selected. It was confirmed that the resistance genes of S. aureus 375 and S. aureus 507 had no homology with those probes in southern hybridization test using ermA, ermC and ermAM as probes. It was determined that S. aureus 375 had a plasmid whose size was about 35 kb. To know if the plasmid may have the genes related to inducible resistance to MLS antibiotics, it was attempted to transform Bacillus subtillis BR151 and S. aureus RN4220 with the plasmid isolated from S. aureus 375. It was shown that the gene related to inducible resistance to MLS antibiotics did not exist in this plasmid. These results indicate that two clinical isolates of S. aureus showing inducible resistance to MLS antibiotics have novel genes that have no homology with MLS resistance genes identified so far. It is assumed that these genes may exist in chromosomal DNA.

• 한국식품영양학회지
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• 제9권4호
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• pp.459-465
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• 1996

지금까지 많은 연구가 되어 있지 않던 Bacillus thuringiensis serovar. darmstadiensis의 내독소를 Renografin-76 단계적 기울기 원심분리로 분리하여 전자 현미경으로 관찰하여 이중피라미드 구조를 가진 독소 단백질을 확인하였으며 B. thuringiensis serovar. kurstaki HD1의 독소 생성유전자와 B. thuringiensis serovar. darmstadiensis의 유전자가 유사성이 있다는 보고를 근거로 하여 B. thuringiensis serovar. HD1의 독소 생성유전자를 가진 프로브(pUYBT 9044)로 이용하여 colony hybridization 및 Southern hybridization 한 결과 2.6Kb EcoRI 단편 및 3.6Kb Hind III 단편을 선발할 수 있었다. 이들 단편들은 B. thuringiensis serovar. kurstaki HD1 독소 유전자와 hybridization시 유사성이 있었다. 특히 3.5Kb HindIII 단편은 2.6Kb EcoR I 단편에 클로닝되어 있는 1.8Kb의 HD1 독소 유전자와 유사성이 있는 부분을 공유하고 있었으며 1.0Kb 정도의 EcoR I-HindIII 부분이 더 삽입한 것을 알 수 있었다.

• 한국환경과학회지
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• 제10권3호
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• pp.239-245
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• 2001

This research was performed to investigate the dynamics of microbial community by RBC (Rotating Biological Contactor) using Rhodococcus sp. EL-GT and activated sludge. Cell counts revealed by DAPI were compared with culturable bacterial counts from nutrient agar. Colony counts on nutrient agar gave values 20~25% and 1~15% of cell counts (DAPI). The cell counts for the dynamics of bacterial community were determined by combination of in situ hybridization with fluorescently-labelled oligonyucleotide probes and epifluorescence microscopy. Around 90~80% of total cells visualized DAPI were also detected by the bacteria probe EUB 338. For both reactors proteobacteria belonging to the gamma subclass were dominant in the first stage (1 and 2 stage) and proteobacteria belonging to the gamma subclass were dominant in the last stage (3 and 4 stage).

• Journal of Ginseng Research
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• 제19권1호
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• pp.51-55
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• 1995

The DNA fragment containing ginseng ribulose-1,5-bisphosphate carboxytase/oxygenase large subunit(rbcL) gene was cloned from the ginseng chloroplast EcoRl library by colony lift hybridization with tobacco rbcL gene probe. From the screened clone, the DNA fragment containing ginseng rbcL gene was digested with several restriction enzyme and analyzed by Southern blot hybridization for the construction of restriction map. The ginseng rbcL gene fragment was subcloned in pBluescript II SK + vector and sequence analysis was performed. The nucleotide sequence of ginseng rbcL gene was compared with those of petunia, tobacco, alfalfa, rice and barley, which showed a homology of 93.1%, 95.2%, 90.5%, 85.5% and 84.3%, respectively.

• 한국동물학회지
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• 제27권2호
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• pp.103-116
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• 1984

유전자 구조 및 유전정보 흐름의 차이로 인하여 고등생물의 유전자를 미생물에 직접 cloning하면 원하는 유전자 산물을 얻지 못하는 경우가 많다. 이것을 극복하기 위해서는 화학적인 방법으로 유전자를 합성하든지, 또는 역제효소를 사용하여 고등생물의 mRNA로부터 유전자를 합성하여 cloning하는 방법을 사용한다. 본 연구에서는 oligo(dT)-cellulose column 방법으로 순수분리한 plasmid pBR322의 Pst I site에 cloning하였다. 우선 AMV reverse transcriptase로 primary cDNA를 합성하고, 알칼리를 처리하여 주형 RNA를 제거했다. 이번에는 이 primary cDNA를 주형으로 Klenow enzyme과 reverse transcriptase를 차례로 처리하여 double stranded DNA를 합성하고, 이 때 5' end 근처에 형성되는 hairpin loop을 Sl nuclease로 제거했다. Terminal deoxynucleotidyl transferase를 사용하여, 합성된 dsDNA에는 poly(dC) track을, Pst I endonuclease를 처리한 plasmid DNA에서는 poly(dG) track을 각각 붙인다음 이들을 서로 annealing시키고 E. coli에 transformation시켜서 크기가 큰 plasmid를 갖는 clone을 cracking 방법으로 일처 선별하였다. 이렇게 선별된 clone을 in 냐셔 hybridization 방법으로 조사하여 globin DNA가 들어간 colony를 이차 선별하고 여러 restriction enzyme으로 잘라보아 globin DNA가 cloning된 것을 확인하였다. 토끼 hemoglobin으로 immunize한 rat (Wistar)에서 뽑은 제일차 혈청과 염소에서 뽑은 제이차 혈청의 antibody를 사용한 radioimmunoassay방법으로, cloning된 globin gene이 대장균내에서 발현되는 지의 여부를 살펴 보았는데, 박테리아의 $\\beta$-lactamase와 토끼의 globin이 결합된 chimeric protein이 대장균 내에서 다량 합성되며, 이 단백질은 토끼 hemoglobin의 antigenic determinant를 가지고 있음을 알 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권3호
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• pp.280-288
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• 1992

Serratia marcescens ATCC 21074 균주가 세포밖으로 분비하는 metalloprotease 유전자를 대장균으로 클로닝하고 그 발현을 살펴보았다 Serratia marcescens ATCC 21074 균주의 염색체 DNA를 제한효소 HindIII로 절단하고 아가로스 전기영동 후 32P로 표지된 합성 oligonucleotide를 사용하여 southern hybridization한 결과 4.0Kb의 DNA 절편에 metalloprotease가 존재함을 알 수 있었다. 4.0Kb 염색체 DNA 절ㅊ편을 분리하여 pUC19에 연결한 후 대장균으로 transformation하였다.

• 한국어병학회지
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• 제6권2호
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• pp.103-110
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• 1993

Sau3AI으로 부분절단한 Serratia marcescens genomic DNA(5Kb 이상)을 pUC19의 BamHI site에 삽입하여 total genomic library를 준비하였다. Swollen colloidal chitin media에서 halo를 형성하는 2개의 E.coli 형질전환주를 선별하였다. 이들 colony가 chitinase 유전자를 갖음을 재확인하기 위하여 4-methylumbelliferyl N-acetyl-$\beta$-D-glucosaminide(4-MuFGlcNAc)를 이용하였다. 4-MuFGlcNAc는 chitinase에 대한 기질특이성을 나타내며 형광을 나타내는 기질로서 positive clone들은 360nm의 자외선을 조사하였을 경우 밝은 형광을 나타낸다. pUC19으로 부터 유래된 2 종류의 다른 chitinase clone, pCH1(11.0Kb) 및 pCH2(7.5Kb)를 genomic DNA library로 부터 분리하였으며, 이들의 제한효소지도를 작성한 결과 서로 다른 제한효소지도를 나타내었다. pCH1EA 및 pCH2로 부터 각각의 EcoRI-Xbal fragment를 subcloning함으로써 두개의 다른 chitinase 유전자의 위치를 결정하였다. pCH1EA 및 pCH2를 cross hybridization 한 결과 hybridization signal을 나타내지 않아 서로 유사성이 없는 것으로 사료된다.