This experiment was carried out to examine the effects of culture medium on cell growth of the viola (Viola patrinii DC.) suspension culture. The results are as follows: The greatest cell growth rates were found with MS medium suggesting that this medium could be recommendable for the viola suspension cell culture. When the nitrogen sources (NH$_4$NO$_3$ and KNO$_3$) of MS salts were diluted at half concentrations, the cell growth rates were slightly increased, but when the combined concentration rations of NH$_4$+ and NO$_3$ions were 25 to 75 the greatest cell growth rates were obtained. This result imply that the nitrogen ion sources had slight influence on the rates. Another feature was obtained. This result implys that the nitrogen ion sources had slight influence on the rates. Another feature was that as the concentration of NH$_4$+ ion lowered, the callus color changed to pale yellow with some red spots. The addition of casein hydrolysate (5 g/L) was more effective for the cell growth. On the basis of microscopic observation, the highest cell growth rates were detected during 2-4 weeks culture and after 6 weeks of the culture, some elongated and vacuolated cells were determined.
Callus from scale segments of Lilium longiflorum 'Gelia' was effectively induced and maintained from unorganized tissue on the semi-solid medium by 0.42% Bacto agar with MS basal salts and vitamins of SH medium supplemented with 0.5 mg/L 2, 4-D, 1.0 mg/L NAA, 0.3 mg/L BA, and 3% sucrose. More than 5% of high sucrose level had inhibiting effect on regeneration capacity of formed callus and decreased callus growth. Various combinations of nitrogen did not effective to proliferate the ELC (Embryogenic-like callus), but friability of callus was increased in the medium containing only nitrate as nitrogen source. 5 mL conditioned medium into 30 mL fresh medium was good for cell growth. However friable cell aggregates during suspension culture had to form hard callus which hindered to establish suspention culture system. Addition of 2 g/L casein hydrolysate increased callus growth and friability of the hard callus. As a result of anatomical observation of callus, organogenesis such as shoots, roots and bulblets was independently induced from callus tissue. Somatic embryogenesis from callus tissue could be observed with low frequency.
Kim, Jin-Soo;Kim, Min Ji;Kim, Ki Hyun;Kang, Sang In;Park, Sung Hwan;Lee, Hyun Ji;Heu, Min Soo
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.47
no.2
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pp.135-143
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2014
Exopeptidase active fractions from the hepatopancreas of the Argentina shortfin squid Illex argentinus, were obtained with acetone (AC 30-40%), ammonium sulfate (AS 60-70% saturation), anion exchange chromatography (AE-II, 0.2 M NaCl) and gel filtration chromatography (GF-I, 30-50 kDa) fractionation methods. A bitter peptide solution that has a bitterness equivalent to that of 2% glycylphenylalanine and prepared by tryptic hydrolysis of milk casein, was treated with the exopeptidase active fractions. The GF-I fraction was the best based on aminopeptidase activity (35.3 U/mg), percentage of recovery (30.7%) and a sensory evaluation (1.7). The amount of released amino acids increased as incubation time increased, and the bitterness of the enzyme reaction mixtures decreased. Incubation with the GF-I fraction for 24 h resulted in the hydrolysis of several peptides as revealed by the reverse-phase high performance liguid chromatography profile, with three peaks (3, 5 and 6) decreasing in area (%) and three peaks (1, 2 and 4) increasing in area (%). Therefore, the GF-I fraction appeared to be ideally suited to reduce bitterness in protein hydrolysates by catalyzing the hydrolysis of bitter peptides.
This study was carried out to identify the ACE (Angiotensin converting enzyme) inhibitory activity of casein hydrolysates for development of anti-hypertensive hydrolysates. Sodium caseinate was treated with six kinds of commercial proteases such as Flavourzyme, Protamex, Neutrase 1.5, Alcalase, Protease M, and Protease S for 8 h individually, and was then treated with the enzyme combination for 4 h at $45^{\circ}C$. The hydrolysate which had the highest ACE inhibitory effect was then hydrolysed successively with three digestive enzymes: pepsin, trypsin, and ${\alpha}$-chymotrypsin, at $37^{\circ}C$ for 4 h under conditions mimicking those of the gastrointestinal tract. UF (ultra filtration) treatment was applied to one of the secondary hydrolysates to determine ACE inhibitory activity. When sodium caseinate was hydrolysed by commercial proteases, the degree of hydrolysis (DH) showed 2.54 to 4.25% and after secondary hydrolysis, DH showed 4.30 to 5.22%. ACE inhibitory activity and $IC_{50}$ values decreased, and inhibition rates increased during hydrolysis. Protamex treatment showed the lowest $IC_{50}$ value ($516{\mu}g/mL$) and Flavourzyme hydrolysate showed the highest $IC_{50}$value ($866{\mu}g/mL$). As the first hydrolysate was treated with Flavourzyme, the ACE inhibitory activity increased. Neutrase hydrolysate had the highest activity with an $IC_{50}$ value ($282{\mu}g/mL$). When Neutrase plus Flavourzyme treatment was hydrolyzed by digestive enzymes, the $IC_{50}$ value ($597{\mu}g/mL$) was decreased statistically (p<0.05). As Neutrase plus Flavourzyme hydrolysate is treated by UF with MW cut-off 10,000, permeate showed $273{\mu}g/mL$ of $IC_{50}$ value, showed no difference, but retentate which has over MW 10,000 showed statistically different $IC_{50}$ value, $635{\mu}g/mL$ (p<0.05).
An efficient in vitro plant regeneration system was developed through shoot proliferation from axillary buds of Tectona grandis (L.f), APNBV-1 (Andhra Pradesh North Badrachalam Venkatapuram-1) clone. Multiple shoots of high quality were produced in vitro from axillary bud explants. An average of 4.39 shoots/explant were obtained on Murashige and Skoog's (MS) medium supplemented with plant growth regulators (PGRs) benzyl amino purine (BA), kinetin (KN), indole acetic acid (IAA), gibberillic acid ($GA_3$), growth adjuvants casein hydrolysate (CH), adenine sulphate (Ads) and antioxidants ascorbic acid, polyvinyl pyrrollidine (PVP). Eighty five percent of rooting was observed in ex vitro rooting media containing IBA and vermiculite. In ex vitro rooting, single shoots with 2 to 3 nodes were subjected to IBA of different concentrations at different periods of time intervals. Direct rooting in vermiculite at 500 ppm concentration of IBA resulted in 4.3 number of roots with 2 cm length. Minimum response of rooting and length of roots were recorded at 100 ppm concentration of IBA. Planlets were transferred to plastic bags for short acclimatization stage in green house where they survived at 95%.
The nutritional requirements for Prevotella sp. 4PCCNB2 isolated from the rumen of a native goat in Korea and those of the ATCC 19189 strain isolated from the bovine rumen were investigated. The two strains grew well with ammonium sulfate as the sole added nitrogen source. However, neither a complex of amino acids nor casein hydrolysate effectively replaced ammonium sulfate. Biotin, p-aminobenzoic acid, and vitamin $B_12$ were essential to culture the ATCC 19189 strain. Unlike the ATCC 19189 strain, however, $B_12$ was only stimulatory for the growth of the 4PCCNB2 strain. The 4PCCNB2 strain grew well in the basal medium without an individual acid such as acetic acid or valeric acid. In contrast, either acetic or valeric acid was absolutely required for the growth of the ATCC 19189 strain.
Partial desiccation of embryogenic calli cultures or somatic embryos leads to different physiological changes and maturation of somatic embryos, leading to improved plant regeneration. Embryogenic calli was induced from immature inflorescence segments and young leaf rolls of sugarcane (Saccharum officinarum hybrids CoC-671) on Murashige and Skoog's basal medium enriched with different concentrations of 2,4-D ($1-4\;\cal{mg/l}$), L-glutamine ($100\cal{mg/l}$), malt extract ($100\cal{mg/l}$), casein hydrolysate ($1000\;\cal{mg/l}$) and coconut milk ($5\%$) and solidified with $0.2\%$ gel rite. The embryogenic calli were subjected to desiccation for 1-8 h. Desiccation of the calli for 6-7 h resulted in enhancement of plant regeneration frequency ($83-96\%$) as compared to control ($12\%$). Plantlets exhibited vigorous growth to maturity in the greenhouse. Partial desiccation of embryogenic calli offers as a simple method for improving plant regeneration frequency in sugarcane.
Plant regeneration was accomplished from protoplast culture of rice (Oryza sativa L. cv. Taebaeg). Embryogenic callus was induced from mature seed on MS medium containing 5 mM proline, 2.5 mg/L 2,4-D, 30 g/L sucrose in the dark at 28$^{\circ}C$ and used to establish embryogenic cell suspension culture. Suspension cells were subcultured every one week in N6 medium supplemented with 5 mM proline, 200 mg/L casein hydrolysate, 2.5 mg/L 2,4-D and amino acids of AA medium. Suspension cultures were composed of cells that were densely cytoplasmic, potentially embryogenic and were at least maintained for more than 6 months in liquid medium. Protoplasts were isolated from fast-growing suspension culture cells and cultured in a slightly modified KpR medium by mixed nurse culture. Isolated protoplasts began to divide within 5~7 days and thereafter, protoplast-derived calli were sequentially transferred to callus proliferating medium that soft agar MS medium contained 2 mg/L 2,4-D and produced distinct embryogenic cells. Microcolonies were then transferred to solid medium which consisted of MS medium containing 5 mg/L kinetin, 1 mg/L NAA, 1 mg/L ABA, 30 g/L sucrose and 10 g/L sorbitol under fluorescent light. Mulitple shoots of 4~5 per callus emerged and were transferred to hormone-free MS medium for root initiation. Thereafter, The plantlets were transferred to pots of soil to mature in the culture room.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.29
no.2
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pp.280-287
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2000
Generally, buckwheat has been regarded as a crop of secondary importance in many countries. In vitro functionalities of buckwheats as a food were evaluated in this study. Five of buckwheat cultivars were extracted with methanol, and the extractant were dried and lyophilized, separately. Or water soluble buckwheat components were digested with the commercial enzymes and the obtained protein hydrolysate was again fractionated by acid precipitation. The antioxidant capacity of the methanol extracts determined using Fe2+-ascorbic acid system was dependent ont the cultivars: The extract of Suwon 4 showed 3.3 times stronger activity than ascorbic acid in terms of IC50. Also, the extracts of buckwheats inhibited efficiently the activities of $\alpha$-amylase and lens aldose reductase. Buckwheat soluble protein or rutin suppressed the in vitro activities of angiotensin-converting enzyme, and the inhibitory degree depended largely on the cultivars. Buckwheat proteins exerted higher hydrophobicity being related to the sterol binding capacity than casein. The results suggested that buckwheat seeds may be desirable and functional food resources in human living in current society.
Angiotensin-I-converting enzyme (ACE) inhibitory peptides have functional and potential properties of casein hydrolysates that are used in the development of food ingredients and anti-hypertensive hydrolysates derived from sodium caseinate enzymatic hydrolysates. Sodium caseinate could be treated by various kinds of commercial proteases, and then could be treated with the enzyme combination. Ultrafiltration treatment can be used to generate hydrolysates that can be used to determine ACE inhibitory activity. In general, hydrolysate quality can be evaluated by changes in hydrolysis characteristics, ACE inhibitory activity, as well as functional properties such as solubility, foam capacity, cytotoxicity, free radical-scavenging effects, and sensory evaluation. In this review, we present an overview of the ACE inhibitory peptides obtained by performing enzymatic hydrolysis on various sources to identify food ingredients and functional foods that reduce hypertension.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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