Histological observation of micropore-originated haploid rice callus was reported previously. Present study was attempted to clarify the growth or development of the calli when they were transferred to differentiation media prepared exclusively for differentiation of plantlets. When the callus was transferred to differentiation medium, the cells and tissues became radially elongated. Meristematic tissues were present but few in number, and their structures were quite different from those grown in the propagaton medium. Differentiation of tracheid, chloroplast, and epidermis-like cell layer, and formation of gap in the callus tissue were more conspicuous in differentiation media. Approximately ten days after transfer of callus to differentiation medium, plantlet was formed.
Strong anti-inflammatory saponins Phytolacca americana (Phytolaccaceae) wereobtained from callus mass derived from the stems and also from that derived from the roots of cultivated Phytolacca americana (which were designated as PAS and PAR, respectively). The callus were grown on Linsmair and Skoog's agar medium supplemented with 1ppm OF 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid. Phytol accoside B and D were obtained from PAS and phytolaccoside A and B from PAR. The thin layer chromatograms of the crude saponins from PAS and PAR were similar to those of original plants. PAS contained phytolaccoside B as a major component while phytolaccoside E was a major saponin in original plants.
접목 과정에서 형성되는 새로운 2차목부의 특징을 광학현미경 및 전자현미경적 차원에서 조사하고자 해송(Pinus thunbergii)을 사용하여 자가접목(autograft)을 실시하였다. 조직학적으로 접목은 괴사층의 형성, 치유조직(callus)의 형성 및 발달, 새로운 형성층의 분화 및 새로운 2차조직의 형성 등 4단계를 거치는 것으로 나타났다. 접목 초기에 형성된 괴사층은 펙틴과 리그닌 성분으로 구성되어 있었으며, 점진적으로 분해되어 대목과 접수가 결합하는 시점에 소멸되었다. 접목 초기에 축적되었던 전분 입자와 지질은 접목이 진행될수록 점진적으로 감소하였으며 세포질 내 소기관, 핵 및 원형질연락사의 변화는 관찰되지 않았다. 유세포로 구성된 치유조직으로부터 접목 15일후부터 새로운 형성층(neocambium)이 발달하였으며, 이곳에서 새로운 2차조직이 형성되기 시작했다. 새로운 2차목부는 형성층에서 기원하는 정상적인 2차목부와는 다른 분화 및 형태를 나타냈다. 새로운 2차목부는 망상 또는 벽공상의 비후에 의한 2차벽을 갖는 가도관 요소에서 기원하였으며, 2차벽의 형성은 비후된 세포벽 사이를 충전시키는 형태로써 진행되었다. 2차벽의 형성은 불균일하고 간헐적이었으며 형성된 2차벽의 두께는 불균일하였다. 새로운 2차목부의 가도관은 S자 또는 소용돌이 모양을 지니는 것으로 수평 방향으로 배열되었다.
인삼 callus의 기내배양에 의해서 항암물질을 대량생산하기 위한 연구의 일환으로 인삼 우수계통으로부터 기내에서 callus를 유기하여 polyacetylene 고함유 세포주를 선발하고, 인삼 callus의 polyacetylene 생산에 미치는 식물호르몬 및 배지의 영향을 조사하였다. 식물호르몬 CPA가 첨가된 MS배지에서 유도된 인삼 우수계통 callus에서는 polyacetylene 중에서 panaxynol은 TLC와 GC에 의해서 전혀 검출할 수 없었으나, callus에 따라서는 panaxydol이 형성됨을 확인할 수 있었다. 특히, 강력한 항암효과를 가지고 있는 panaxydol은 우수계통 callus 18종 중에서 5종이 형성하였으며, 30201계통 callus에서 가장 많이 검출되었다. 또한 인삼 10301계통 callus는 CPA가 단독으로 첨가된 배지에서 panaxydol을 생성하지 못하였으나, CPA 2 mg/L와 BA 0.05 mg/L 첨가구에서는 callus의 생장도 양호하였으며, panaxydol도 생성하였다. 인삼 callus의 생장과 panaxydol의 합성에는 MS배지보다 SH 배지가 더 양호하였으며, NAA와 sucrose는 전혀 영향을 미치지 않았다.
국내에서 생산되는 아열대 마의 저장성을 향상 시키고자 저장기간 동안 발생되는 주요 병원균을 분리동정하여 병원성을 확인하고, 큐어링 처리 조건별로 부패억제 효과를 조사하였다. 아열대 마 저장중 부패를 일으키는 주요 병원균은 Penicillium sclerotigenum와 Penicillium polonicum으로 확인되었고 P. sclerotigenum이 좀더 병원성이 강하였다. 수확도중 절단된 부위는 큐어링 하기전 반드시 매끈하게 잘라야만 정상적인 유상조직층이 형성되었다. 괴근 절단면을 상대습도 95%에서 3일간 $23^{\circ}C$, $28^{\circ}C$ 그리고 $33^{\circ}C$로 큐어링 처리하여 유상조직층을 관찰한 결과, $23^{\circ}C$ 처리구는 괴근육과 표피층의 색농도가 비슷하여 확인이 어려운 반면, $28^{\circ}C$ 이상 처리구는 뚜렷하게 관찰되었다. 0.5 mm 이상의 유상조직 형성율도 $28^{\circ}C$ 처리에서 93%, $33^{\circ}C$ 처리에서 96%로 양호하였으나 $23^{\circ}C$처리구에서는 52%로 낮게 나타났다. 상온에서 바람이나 햇볕을 이용하는 관행적인 큐어링 처리구는 유상조직층 형성이 미미하였다. 저장고안의 상대습도에 따른 병원균의 감염은 습도가 40%와 60%로 유지되었을 경우 감염비율이 낮았고 큐어링 처리간에도 차이가 없었다. 저장고내 습도가 80%인 경우 모든 처리구에서 균이 급격히 증식하였다. 저장온도 $16^{\circ}C$에서 상대습도 60%를 유지하여 180일 후 처리별로 부패율을 조사한 결과, 절단된 괴근을 햇볕이나 바람에 의해 큐어링된 관행적인 처리구는 43%였으나, $28^{\circ}C$ 이상에서 큐어링하여 유상조직층이 형성된 괴근은 18% 이하로 나타났다. 건전한 괴근도 관행처리구에서 25%의 부패율을 보인 반면 $28^{\circ}C$ 이상에서 큐어링된 괴근은 10% 이하로 나타났다. 중량감소율도 관행처리구에 비하여 강제 처리구가 중량이 1~6%정도 덜 감소하였다.
한국식물학회 1987년도 식물생명공학 심포지움 논문집 Proceedings of Symposia on Plant Biotechnology
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pp.213-237
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1987
In vitro flowering system may minimize the confounded influence of non-floral meristem parts of plants in studying the relationship of a given treatment and flowering responses. We have induced flower buds from plantlets regenerated from zygotic embryo-derived somatic embryos of ginseng, which circumvented the normal 2-year juvenile period before flowering. The result suggests that the adulthood of ginseng root explants in the experiment previously conducted by Chang and Hsing (1980; Nature 284: 341-342) is not prerequired to flowering of plantlets regenerated through somatic embryogenesis. We have also induced flower buds from elongated axillary brandches from cotyledonary nodes by culturing ginseng zygotic embryos, seedlings, and excised cotyledonary nodes. It was found that 6-benzyladenine (BA) supplemented to the medium was essential for flowering, whereas abscisic acid (ABA) was inhibitory. Gibberellic acid(GA3) was also required for flowering when ABA was present with BA in the medium. The results suggest that cytokinins, gibberellins, and inhibitors play primary, permissive, and preventive roles, respective-ly, in the induction of flowering of ginseng. Tran Thanh Van (1980; Int. Rev. Cytol., Suppl. IIA: 175-194) has developed the "thin cell layer system" in which the induction of shoots, roots, or flower buds from epidermal layer explants were controlled by culture conditions and exogenous growth regulators in the medium, Utilizing the thin cell layer system, Meeks-Wagner et al. (1989; The Plant Cell 1: 25-35) have cloned genes specifically expressed during floral evocation. However, the system is too tedious for obtaining a sufficient amount of plant materials for biochmical and molecular biological studies of flowering. We have developed a garlic callus culture system and one obvious advantaging over the thin cell layer system is that an abundant cells committed to develope into flower buds proliferate. When the above cells were compared by two-dimensional gel electrophoresis with those which have just lost the competence for developing into flower buds, a few putative proteins specific to floral evocation were detected. The garlic callus culture system can be further explored for elucidation of the molecular biological mechanism of floral evocation and morphogenesis.hogenesis.
생강의 개화특성과 화기구조를 관찰하고 약배양에 의한 캘러스 형성과 식물체 재분화에 미치는 배지내 생장조절물질의 효과에 대하여 검토한 결과는 다음과 같다. 1 화병의 형성은 국내종은 서산종, 도입종은 태국종에서만 출현되었으며 화뢰당 소화형성은 서산종 8개, 태국종이 10개 형성되었으나 종자정성은 이루어지지 않았다. 2. 개화기는 8월 18일에서 8월 25일 사이에 불규칙적으로 나타났고 1일중 개화시각은 오후 4시-5시 사이에 대부분 개화하였다. 3. 꽃은 장주화로서 주두상단에는 섬모가 나 있으며 수술은 연착약, 배낭내 태좌는 증축태좌 형태를 나타냈다. 화분은 원형과 타원형이 혼재되어 있으나 원형이 많았으며, 화분막은 2중 구조였다. 4. 약 유래 캘러스 형성에는 CM배지가 좋았고, 캘러스로부터 기관분화는 MS배지에 BA 2mg/l 를 첨가한 재생배지에 이식 후 40일경부터 부정근이 먼저 출현되고 배양 60일 후에는 줄기와 뿌리가 완전 분화된 정상적인 식물체를 얻을 수 있었다.
Antibiotics used for suppressing Agrobacterium in plant transformation procedure might have negligible effects on plant tissues and regeneration. The effects of antibiotics on growth suppression of Agrobacterium and plant regeneration were investigated for enhancing Agrobacterium-mediated transformation using wheat mature embryos. Antibiotics tested, except carbenicillin, were able to suppress that embryos were coated with a layer of Agrobacterium cells in callus induction medium. Agrobacterium growth was suppressed minimally at 50 mg/l of timentin, while cefotaxime and clavamox were completely suppressed at relative high concentration of 250 mg/l. In the treatment of carbenicillin, initiation of growth suppression of Agrobacterium occurred at 750 mg/l of concentration because Agrobacterium KYRT1 contains the carbenicillin resistant gene. In Agrobacterium inoculation, effects of antibiotics were significantly different on the rate of callus induction and shoot formation. Almost embryos were induced calli at 50 mg/l of timentin whereas callus induction rate was achieved above 90% at 100 mg/l and 250 mg/l of cefotaxime and clavamox, respectively. Shoot formation rate was higher in the treatment of timentin than that of cefotaxime and clavamox at 500 mg/l of concentration, respectively. Timentin can be used as a good antibiotics in Agrobacterium-mediated wheat transformation.
Herbicide tolerant rice (Oryza sativa L. cv. Ilpumbyeo) cell lines were selected from $\gamma$-ray-irradiated anther-derived cell cultures. The anther-derived cell clusters were small (300 to 400 ${\mu}{\textrm}{m}$ in diameter) and uniform ones that were screened by miracloth filtering. The cell suspensions were very efficient to plate one layer onto agar medium and to screen target cell lines. Herbicide tolerant cell lines were selected by 5 mg/L cyhalofop butyl (CHB) treatment by using the small cell suspensions on agar N6 medium containing 1 mg/L 2,4-D and 0.2 mg/L kinetin. Of the cell lines, one line (CHB-1) showed stable tolerance at 10 mg/L concentration after 6-month culture without herbicide suspension. Growth stability of CHB-1 was similar to that of control cell line on 10 mg/L CHB containing medium. In this experiment we established herbicide tolerant cell line selection system by using anther-derived uniform-cell suspensions with $\gamma$-ray-irradiation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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