Monoclonal antibodies(MAbs) against field isolates of the bovine rotavirus A strain(G6), V strain(G10) and reference I-801 strain(G8) were produced and characterized. Six MAbs(4C2, 4D9, 5E1, 5E7, 5D5, 3E4) against A strain had neutralizing activity and reacted only with the G6 bovine rotaviruses determined by fluorescence focus neutralization (FFN) test. Otherwise, five neutralizing MAbs(1G2, 2G6, 5E2, 5E12, 5H7) against I-801 strain neutralized the G6 and G8 bovine rotaviruses. Five non-neutralizing MAbs(5F12, 7F12, 5E11, 2A11, 2B12) were VP6-specific and cross-reacted with all bovine and porcine rotaviruses examined by fluorescence antibody(FA) test. None of the MAbs reacted with bovie viral diarrhea virus(BVDV) and bovine coronavirus(BCV) determined by FA and FFN test.
Characterizations of the VP4 (P type) and VP7 (G type) genes of Korean isolates of bovine rotavirus were performed using RT-PCR/RFLP and nucleotide sequencing analysis. After RT-PCR amplification of partial length (1094bp) of the VP4 and full length (1062bp) of the VP7 genes, amplified PCR products were digested with restriction endonucleases and digestion patterns were compared with those of reference rotaviruses. With the VP4 genes, four RFLP (A-D) profiles were observed; three (A, Band C) were the same as those of bovine rotavirus NCDV (P[1]), IND (P[5]) and B223 (P[11]), respectively. Profile D was the same as that of porcine rotavirus OSU (P[7]). With the VP7 genes, five RFLP profiles (I-V) were observed; three of them (I, II and III) were the same as those of bovine rotavirus NCDV (G6), Cody 1-801 (G8), and B223 (G10), respectively. Profile IV and V were atypical to those of reference bovine rotaviruses used in this study. These two profiles were identified as G6 and G5, respectively, after analyzing and comparing the nucleotide sequences. The G typing analysis revealed that 61.9% (26/42) were G6, which included G6 subtype; 28.6% (12/42) were G5; 7.1% (3/42) were G10; 2.4% (1/42) were G8. The P typing analysis revealed that 54.8% (23/42) were P[5]; 28.6% (12/42) were P[7]; 11.8% (5/42) were [11]; 4.8% (2/42) were P[1]. Our results showed that G6/P[5] were the most prevalent rotaviruses in diarrheic calves in Korea. Also, this is the first report that G5/P[7] rotaviruses were identified from cattle with diarrhea.
Bovine rotaviruses(A, 288, 55086 strains) isolated from fecal samples in Korea were propagated onto MA104 cells and were confirmed tentatively as G6, G8, and G10, respectively, by RFLP analysis. Full-length VP7 gene of these isolates was amplified by reverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR) using VP7 specific primers and cloned into TA vector. Nucleotide and deduced amino acid sequences of VP7 genes of the isolates were determined and compared with those of bovine rotavirus reference strains(NCDV; G6, UK; G6, Cody I-801; G8 and B223; G10). A, 288 and 55086 isolates showed high degree of nucleotide sequence homology with NCDV and UK(93% and 94%), Cody I-801(86%) and B223(97%), respectively, However, they showed 71~74% of nucleotide sequence homlogy with bovine rotavirus reference strains which belong to different serotypes. From the results of deduced amino acid sequence homology analysis, three isolates showed 94~96% of homology with the same serotype reference strains but 80~84% of homology with the different serotype reference strains. Three bovine rotavirus isolates, A, 288 and 55086 strains, were confirmed as G6, G8, and G10, respectively, by nucleotide and deduced amino acid sequence analysis.
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed to detect rotavirus antigen in fecal samples using VP6-specific monoclonal antibody(2B12). The ELISA for rotavirus antigen detection found to have specificity to all bovine and porcine rotaviruses tested but not to bovine viral diarrhea virus and bovine coronavirus. The ELISA appeared to have similar sensitivity and specificity compared to fluorescence antibody assay(FA) and electropherotyping (PAGE).
This study was carried out to investigate the toxicity of exopolysaccharides (EPS) from kefir toward MA104 cells and evaluate the inhibitory effects of kefir EPS on rotavirus infection. The results obtained are summarized as follows: Lactic acid bacteria (Lactobacillus fermentum, L. acidophilus, L. brevis) and yeasts (Candida kefyr, Cryptococcus albidus, Pichia ohmeri) were isolated and identified from kefir grain and culture. At 1% EPS, the inhibitory effects of EPS on the infection of MA-104 cells using the MTT assay were $72.52{\pm}6.48%$ for human rotavirus (KU), $36.06{\pm}7.63%$ for bovine rotavirus (NCDV), and $81.66{\pm}1.11%$ for porcine rotavirus (OSU). At 1/128% EPS, the effects were $24.98{\pm}4.58%$ for human rotavirus (KU), $4.71{\pm}6.16%$ for bovine rotavirus (NCDV), and $4.05{\pm}14.90%$ forporcine rotavirus (OSU). EPS isolated from kefir have inhibitory effects on rotaviruses of various serotypes and rotaviruses from different animals.
Nucleotide sequence homology between bovine, simian, and porcine rotavirus was determined by the RNA:RNA hybridization technique. Single stranded RNA, prepared in vitro with EDTA activated endogeneous viral RNA polymerase, was hhbridized with tritium labeled bovine rotavirus genomic RNA. The heteroduplex RNA was treated with single stranded RNA specific ribonucleases and the RNase resistant hybrid RNA was precipitated, and collected by filtration on a filter paper. Seventy four percent RNA sequence homology between bovine and simian rotavirus and 8 percent RNA sequence homology between bovine and porcine rotavirus was confirmed by hybridization between tritium labeled single stranded RNA and viral genomic RNA.
Rotaviruses are the world-wide leading causative agents of severe dehydrating gastroenteritis in young children and animals. The outer capsid glycoprotein VP7 and inner capsid glycoprotein VP6 of rotaviruses are highly antigenic and immunogenic. An SFV-based expression system has recently emerged as a useful tool for heterologous protein production in mammalian cells, exhibiting a much more efficient performance compared to other gene expression systems. Accordingly, the current study adopted an SFV-based expression system to express the VP7 of a group A human rotavirus from a Korean isolate, and the VP6 of a group B bovine rotavirus from a Korean isolate, in mammalian cells. The genes of the VP6 and VP7 were inserted into the SFV expression vector pSFV-1. The RNA was transcribed in vitro from pSFV-VP6 and pSFV-VP7 using SP6 polymerase. Each RNA was then electroporated into BHK-21 cells along with pSFV-helper RNA containing the structural protein gene without the packaging signal. The expression of VP6 and VP7 in the cytoplasm was then detected by immunocytochemistry. The recombinant virus was harvested by ultracentrifugation and examined under electron microscopy. After infecting BHK-21 cells with the defective viruses, the expressed proteins were separated by SDS-PAGE and analyzed by a Western blot. The results indicate that an SFV-based expression system fur the VP6 and VP7 of rotaviruses is an efficient tool for developing a diagnostic kit and/or preventive vaccine.
A consecutive Jiao Chio acupuncture therapy was performed for 3 days in the 45-90 days old 11 calves of which have been shown severe watery diarrhea. The discharge of the infected calves was yellowish brown in color. Two calves of these patients were infected wi pulmonary disease as well as diarrhea. Thus, Su Qi and Fei Yu acupuncture therapy was carried out additionally after dosing with antibiotics twice for The two infected calves. Blood chemical values and serum neutralizing antibody titers were checked, and total blood cell count was also carried out to know the therapeutic effect before and after(21 days) acupuncture therapeutics. The results are as follows ; 1, The diarrhea has ceased one day after begining of the acupuncture therapy in 5 calves, and the cessation of the diarrhea in remaining calves occurred in 1 calf each on 3rd and 4th day, and 2 calves on 6th day, respectively. Two calves infected with pulmonary disease as well diarrhea were cured 8 days after the begining of the therapcutics. 2. Rotaviruses wire detected in the feces of 2 calves, and bovine diarrhea viruses were detected in the 8 calves by the test for serum neutralizing antibody titers, and bovine coronaviruses were also detected in 5 calves. Four calves of the 5 bovine coronavirus infected calves were also infected with bovine diarrhea viruses. 3. Total leucocyte number, total amount of serum protein, and amount of fibringen were slightly increased, while total erythrocyte number, and erythrocyte packed cell volume were slightly decreased. These valucs were statistically not significant. Electrolytes of Na/sup +/, K/sup +/ and Cl/sup -/ were slightly decreased but these values also were not significant. These results indicate that the acupuncture therapeutics arc significantly effective to remove the viral diarrhea in the young calves.
Importance: Neonatal calf diarrhea is a major cause of mortality in newborn calves worldwide, posing a significant challenge in bovine herds. Group A Bovine Rotaviruses (BRVA) are the primary contributors to severe gastroenteritis in calves under two months old. Objectives: This study examined the prevalence and molecular characterization of BRVA in neonatal calves in Gujarat, India. Methods: Sixty-nine diarrheic fecal samples were collected and subjected to various molecular methods of BRVA detection, isolation, and characterization. Results: The latex agglutination test (LAT), electropherotyping (RNA-PAGE), and reverse transcription polymerase chain reaction revealed positivity rates of 39.13%, 20.30%, and 37.70%, respectively. RNA-PAGE identified 11 bands with a 4:2:3:2 migration pattern, indicative of the segmented genome of BRVA. BRVA was successfully isolated from LATpositive samples, with 26 samples exhibiting clear cytopathic effects upon passage in MA-104 cell lines. Genotyping identified G10 as the predominant G genotype, with P[11] genotypes comprising 76.92% of the isolates. The most common G/P combination was G10P[11], highlighting its zoonotic potential. Conclusions and Relevance: These findings underscore the importance of molecular detection and genotyping for effective vaccine development. This study provides crucial insights into the prevalent G and P genotypes of BRVA in Gujarat, India, aiding in the development of targeted control measures.
Rotavirus infection is the leading cause of severe diarrhea disease in infants and young children worldwide. Rotavirus infects every child at least once by her/his $5^{th}$ birthday. It has been known that single episode of rotavirus infection can protect or alleviate subsequent illness caused by both homotypic and heterotypic rotaviruses. There are two currently licensed rotavirus vaccines. One is human-bovine rotavirus reassortant pentavalent vaccine ($RotaTeq^{TM}$), which contains five reassortant rotavirus (expressing protein G1, G2, G3, G4 and P[8]) and was licensed in Korea for use among infants in 2007. Another is live-attenuated human rotavirus vaccine ($Rotarix^{TM}$) derived from 89-12 strain which represents the most common of the human rotavirus VP7(G1) and VP4(P[8]) antigens. $Rotarix^{TM}$ was licensed in Korea in 2008. Both live oral rotavirus vaccines are efficacious in preventing severe rotavirus gastroenteritis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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