Most baculoviruses have an ecdysteroid UDP-glucosyltransferase (egt) gene, whose product inactivates ecdysteroid within the infected host. Bomhyx mori larvae infected with BmEGTZ, a mutant B. mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) in which the egt gene has been inactivated, die more rapidly compared to larvae infected with wild-type BmNPV. In this study, the profile of hemolymph proteins, and progression of virus infection in BmEGTZ- and BmNPV-infected B. mori larvae, was analyzed by SDS-PAGE and histochemically. These analyses showed that virus-encoded and virus-induced proteins were expressed quicker in BmEGTZ-infected larvae than in BmNPV-infected larvae. This suggests that the decrease in time to death, following BmEGTZ infection, results from the stimulation of virus-specific protein expression. In order to examine the effect of ecdysteroid on virus transmission, the profile of hemolymph proteins, and progression of virus infection, were analyzed following an ecdysteroid injection of BmEGTZ- or BmNPV-infected larvae. In the BmNPV-infected larvae, ecdysteroid treatment had no apparent effect on hemolymph protein expression. This suggests that the injected ecdysteroid was inactivated by the BmNPV-expressed ecdysteroid UDP-glucosyltransferase. An Ecdysteroid injection into BmEGTZ-infected larvae increased the speed of virus-specific protein expression and virus transmission. These results suggest that ecdysteroid stimulates protein expression, which in tum results in the stimulation of virus transmission.
Lee, Kwang Sik;Li, Jianhong;Je, Yeon Ho;Woo, Soo Dong;Sohn, Hung Dae;Jin, Byung Rae
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.9
no.2
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pp.217-223
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2004
A cathepsin L-like cysteine protease, v-cath, encoded by the baculovirus has been shown to playa role in host liquefaction. We have identified a v-cath gene in the silkworm virus, Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) K1 strain. The 969 bp v-cath has an open reading frame of 323 amino acids. A putative cleavage site and catalytic sites were conserved in BmNPV-K1 v-cath. The predicted three-dimensional structure of BmNPV-K1 v-cath revealed that the overall fold of BmNPV-K1 v-cath is similar to that of other proteases of the papain family. The deduced amino acid sequence of BmNPV-K1 v-cath showed 98% and 97% protein sequence identity to BmNPV T3 strain and to Autographa californica nuclear polyhedrosis virus, respectively. The BmNPV-K1 v-cath differed at 4 amino acid positions from BmNPV T3. The v-cath gene in BmNPV-K1 genome is located on the EcoRV 6 kb and XhoI 9 kb fragments. Northern hybridization analysis of BmNPV K1 v-cath gene revealed that it is expressed late in infection.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.16
no.2
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pp.87-92
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2008
Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) orf47 gene was characterized for the first time. The coding sequence of Bm47 was amplified and subcloned into the prokaryotic expression vector pET-30a(+) in order to produce His-tagged fusion protein in the BL21 (DE3) cells. The His-Bm47 fusion protein was expressed efficiently after induction with IPTG. The purified fusion protein was used to immunize New Zealand white rabbits to prepare polyclonal antibody. As the genome of BmNPV is available in GenBank and the EST database of BmNPV is expanding, identification of novel genes of BmNPV was conceivable by data-mining techniques and bioinformatics tools. Structural bioinformatics approach to analyze the properties of Bm47 encodes protein.
Du, Meng-Fang;Yin, Xin-Ming;Guo, Zhong-Jian;Zhu, Liang-Jun
BMB Reports
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v.39
no.6
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pp.737-742
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2006
Open reading frame 60 of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (Bm60) is located between 56,673 and 57,479 bp in the BmNPV genome which encodes 268 amino acid residues with predicted molecular weight of 31.0 kDa. Bm60 and its homologues have been identified in 11 completely sequenced lepidopteran NPVs. The transcript of Bm60 was detected by RT-PCR at 18-72 h post-infection (p.i.), while the corresponding protein could be detected at 24-72 h p.i. in BmNPV-infected BmN cells by Western blot analysis using a polyclonal antibody against Bm60. The expression of Bm60 was inhibited in the presence of Ara-c, an inhibitor of viral DNA synthesis. These results together indicated that Bm60 was a late gene. The size of Bm60 product was found to be a 31 kDa in BmNPV-infected BmN cells, consistent with predicted molecular weight. Immuno-fluoresence analysis showed that the Bm60 product was first detected in the cytoplasm at 24 h p.i and also located in nucleus during later infection. In conclusion, the available data suggest that Bm60 is a functional ORF of BmNPV and encodes a 31kDa protein expressed in the later stage of infection cycle.
The location of the polyhedrin gene of Bmbyx mori nuclear polyhedrosis virus(BmNPV) was determined by using a cloned polyhedrin gene from the Autographa californica nuclear polyhedrosis virus(AcNPV) as a hybridization probe. The 7.4 Kb PstⅠ fragment DNA of Bm-NPV was cloned to plasmid pUC19 vector. A fragment containing this gene was mapped and sequenced in its entire polyhedrin reading frame. Nucleotide sequences comparison of the polyhedrin of the BmNPV to that of previously reported by Ⅰatrou(1985) revealed that the sequence varied in 10 base, Comparison of the amino acid sequence of the two structured gene revealed that coding sequence varied 74 valine to isoleucine, 76 aspargine to serine and 155 methionine to valine.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.3
no.1
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pp.75-81
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2001
We have constructed a novel recombinant Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) producing the green fluorescent polyhedra. For the production of the fluorescent polyhedra, partial polyhedrin gene containing KRKK as nuclear localization site from the BmNPV polyhedrin gene and the green fluorescent protein (gfp) gene were introduced under the control of p10 promoter of BmNPV. The recombinant BmNPV was stably produced fluorescent polyhedra in the infected Bm5 cells and the morphology of the fluorescent polyhedra was similar to that of wild-type BmNPV. The fluorescent polyhedra had 32 kDa native polyhedrin and 41 kDa fusion protein. From these data, we have further developed a novel BmNPV p10-based transfer vector producing recombinant polyhedra with foreign gene Product. The novel BmNPV P10-based transfer vector is composed of partial polyhedrin gene, factor Xa, and multiple cloning sites.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.9
no.2
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pp.225-228
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2004
Superoxide dismutase (SOD) is an important enzyme which catalyzes superoxide radicals to hydrogen peroxide. A Cu, Zn sod-like gene was found in Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus encoding 151 amino acids. To demonstrate its function, a recombinant virus named dsBmNPV with deleted sod gene was constructed. It was discovered that the sod gene was not essential for viral replication. Studies on growth of budded virus in BmN cells and superoxide dismutase and catalase activities in vivo after dsBmNPV infection showed that the titer of dsBmNPV decreased obviously comparing to wild type BmNPV, the sod gene was effective on genomic DNA replication of baculovirus, the peak of SOD activity of silkworm infected with wt-BmNPV appeared between 36 and 48 hrs post infection, and with dsBmNPV, it did not appear. And the changes of CAT activity after infection were similar to SOD activity.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.7
no.1
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pp.87-91
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2003
BmNPV (Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus) causes nuclear polyhedrosis in silkworms. The tolerance of silkworms to BmNPV is controlled by polygenes. This paper reports on the relative tolerance of silkworm breeds among the germplasm maintained at Andhra Pradesh State Sericultural Research & Development Institute (APSSRDI), Hindupur, India. The silkworm larvae out of second moult were per orally inoculated with BmNPV polyhedra $(l{\times}l0^{th}//ml)$ and reared upto spinning. The response to BmNPV had been categorized into apparent tolerance, real tolerance and susceptibility. Among the 145 silkworm breeds screened, 18 bivoltines and 16 polyvoltines were found to have real tolerance to BmNPV.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.3
no.1
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pp.13-18
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2001
The role of polyhedrin in the polyhedra production in baculovirus Autograha californica Nucelopolyhedro-sisvirus (AcNPV) was studied by over-expression of AcNPV polyhedrin or heterologous polyhedrin from Bombyx mori (Bm) NPV or Spodoptera exigua (Se) NPV. The transfer vectors containing additional polyhedrin from AcNPV, BmNPV, or SeNPV were constructed and cotransfected with bacmid bApGOZA into Sf9 cells. The resulting recombinants, designated as vApAcPol, vApBmPol, and vApSePol were tonstructed, and the polyhedra production of the recombinant was characterized. All of the recombinants produced polyhedra in the nucleus, and the polyhedrin was over-expressed. Among three recombinants, vApAcPol and vApBmPol were discriminated by their larger polyhedra size than that of wild type AcNPV, and vApSePol also produced larger polyhedra than wild type SeNPV polyhedra.
To develope the novel baculovirus transfer vector, the p10 gene was cloned from the Bombyx mori nuclear polygedrosis virus (BmNPV) vB2 strain isolated from the B. mori larvae of sericultural farms. The novel transfer vector was constructed by using the p10 gene of BmNPV vB2 strain was 210 bp. The TAAG sequence at the -71 bp of upstream from translation initiator ATG and two polyadenylation signal site at the downstream from terminator TAA were also detected in the p10 gene. The 5' and 3' flanking region of the p10 gene amplified by PCR was cloned into pBluescriptII SK(+) and then transfer vector pBm10 was construceted. The 7.9 kb pBm10 was analysed by restriction enzymes and the map was confirmed. In order to determine the expression of foreign gene of pBm10, $\beta$-galactosidase gene was inserted in the SmaI site of foreign gene cloning site of pBm10. The pBm10 containing $\beta$-galactosidase gene was cotranfected wth genomic DNA of BmNPV vB2 into BmN-4 cells. The recombinant baculovirus expressing $\beta$-galactosidase was also produced polygedra in the infected cells. The results indicated that pBm10 is functional, suggesting that in the baculovirus expression vector system, the recombinant virus produced by pBm10 was effective by oral infection for the producing recombinant proteins in in vivo expression.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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