Bifidobacterium과 기타 장내 세균을 두유에 배양하여 배양특성을 살펴보았다. 균주들은 다음과 같이 Bifidobacterium longum, Lactobacillus acidophilus, Bacteroides fragilis, Eubacterium limosum, Clostridium perfringens, E. coli.를 사용하였다. 이들중 B. longum만이 높은 활성의 ${\alpha}-galactosidase$를 생산해 두유의 주요 당인 raffinose와 stachyose를 이용하였고 가장 높은 산 생성을 보여주었다. 16시간 배양후에 B. longum은 $1.5{\times}10^{8}\;CFU$에 이르렀다. 또한 B. longum은 ${\alpha}-galactosidase$이외에 ${\alpha}-galactosidase$와 ${\beta}-galactosidase$의 활성도 다른 균주에 비하여 가장 높았다.
The effects of Bifidobacterium longum HY8001 supplement intake on the fecal microflora and fecal bacterial enzyme activity were studied in ten healthy human volunteers, before, during and after intake (respectively for 3 weeks). During intake of B. longum HY8001 supplement, fecal, $\beta$-glucuronidase and nitroreductase activities significantly decreased 44.6%(p<0.005) and 32.3%(p<0.01), respectively. Although numbers of major bacterial groups of fecal microflora were not affected by B. longum HY8001 intake for 3 weeks, the number of Bifidobacterium was significantly increased (p<0.05). This result indicates that intake of B. longum HY8001 might be potentially beneficial for the prevention and inhibition of colon cancer and improvement of human intestinal microflora composition.
유아 분변으로부터 분리한 52 균주는 그람 양성균인 Listeria monocytogenes KCCM 40307$^T$에 대하여 항균활성이 있었고 그 중에서도 선별 균주 A24의 항균활성이 45% 이상으로 가장 높았다. Bifidobacterium longum A24의 생육 및 항균 물질 생산을 검토하였을 때 균체의 생육은 28시간 배양 시 최고에 도달하였고 항균 활성은 36시 간 배양 시 최고를 나타내었다. 선별균주 A24는 16S rRNA-based molecular typing 결과Bifidobacterium 속 균주임을 확인할 수 있었고 형태학적 ${\cdot}$ 생화학적인 방법으로 검토하여 보았을 때 Bifidobacterium longum으로 판단되었으며, 16s rDNA sequencing 결과 최종적으로 Bifidobacterium longum로 동정 되었으며 이것을 Bifidobacterium longum A24로 명명하였다. Bifidobacterium longum A24의 항균 활성 물질은 균체의 생육이 가장 좋은 28시간 배양에서가 아니라 그보다 늦은 36시간 배양에서 최고를 나타내었고 그 이후로는 활성이 감소하는 경향을 보였다. 이것은 Bifidobacterium longum A24이 생성하는 항균 활성 물질이 bacteriocin과 같은 2차 대사 산물임을 암시하는 결과로 해석된다.
Transglycosylation from sucrose to phenolic compounds by the recombinant sucrose phosphorylase from Bifidobacterium longum was studied. HPLC analysis revealed that the enzyme transferred glucosyl residue of sucrose to 1,2-dihydroxybenzene, 1,4-dihydroxybenzene, 1,2,3-trihydroxybenzene, and 2-hydroxybenzyl alcohol. The enzyme could transfer the glucosyl moiety of sucrose to phenolic compounds which have phenolic OH or alcoholic (hydroxymethyl) OH group.
B.longum TK-100 및 L.acidophilus TK-2070으로 혼합배양한 culture로 제조한 요쿠르트는 냉장상태에서도 산생성이 되었느데 이는 B.longum TK-100에 의한 것보다는 대수기의 L.acidophilus TK-2070에 의하여 거의 생성되었다. B.longum TK-100은 편성 혐기조건 뿐만아니라 통성혐기조건에서도 생육이 좋은 것으로 나타냈다. 또한, B.longum과 L.acidophilus는 냉장보존 중인 요쿠르트 내에서도 생존도가 양호하므로 발효유의 제조, 개발에 혼합 starter로서의 이용이 가능하다고 하겠다. 한편 aniline bule 0.1가 함유된 RCAM plate상에 나타난 B.longum TK-100의 colony는 직경이 약 2mm의 광택있는 회배색의 중심에 청색을 나타내었고, L.acidophilus TK-2070의 coiny는 직경이 약 1mm 의 회배색을 나타내어 쉽게 분별할 수 있다.
Bifidobacterium longum을 고농도 배양하기 위하여 최적 생육 조건을 조사하고 cross-flow filtration으로 생육 저해 대사산물인 lactic acid와 acetic acid를 제거하면서 균체 순환 배양을 사용하였다. 회분 배양에서는 탄소원으로 glucose를 50 g/l 농도로 사용하고 초기 pH 6.5인 경우 생육이 가장 높았다. B. longum을 cross-flow filtration으로 12시간 배양한 결과, 희석속도 $0.31h^{-1}$에서 최대 균체농도에 도달하여 16.4g/l의 건조균체량을 얻었으며 이로써 회분 배양시 보다 약 4배 높은 균체를 생산하였다.
A simple and low-cost medium was developed for the growth of Bifidobacterium longum KFRI 977. Of three bifidobacterial strains, B. longum KFRI 977 (ATCC 15707) showed the best growth in MRSC broth containing 0.3% oxgall, grew well in partially anaerobic condition, exhibited highest $\beta$-galactosidase activity, and was inhibitory against Clostridium perfringens KFRI 434. Of three developed media, the population of B. longum KFRI 977 was highest (1.9$\times$$10^9$/ml) in ISP based medium. The composition of ISP based medium is ISP (5%), glucose (1%), L-cysteine HCI (0.05%), Trypticase peptone (0.5%), yeast extract (0.5%), $MgSO_4$ (0.05%), Tween-80 (0.1%), and phosphate buffer (pH 7.0). Hydrolysis of ISP by Protease A was unnecessary, and the use of phosphate buffer (pH 7.0) prevented the formation of protein precipitate. Associative culture of B. longum KFRI 977 with Lactobacillus acidophilus KFRI 233 was proven to be deleterous to the growth of B. longum KFRI 977.
This study was performed to investigate the possibility of using three commercial bifidobacteria as a starter for soybean paste fermentation. In order to determine susceptibility to inhibition by high concentrations of salt in soybean paste, cell growth of three strains in sterilized soybean paste was analyzed. Bifidobacterium breve KCTC 5081 was the most resistant to salt, whereas Bifidobacterium bifidum KCTC 5082 showed low cell viability. Conversion efficiencies from glycoside isoflavone to aglycon isoflavone in soybean paste ranged from 11.3~28.6%, with Bifidobacterium longum KCTC 5734 the best strain. Therefore, B. longum KCTC 5734 may be used as a starter for Cheonggukjang fermentation, which is low-salt fermented soybean paste.
Members of the genus Bifidobacterium are prevalent in the human colon and represent up to 90% of all bacteria in fecal samples of breast-fed infants, and 3~5% of adult fecal microbiota. Bifidobacteria produce organic acids, thus reducing the colon pH to a level inhibitory for pathogenic bacteria. They can also detoxify a number of toxic compounds and adhere to the colon mucosa, thus preventing the adherence of pathogens and induction of colon cancer. Recently, we identified a novel Bifidobacterium longum subsp. longum strain, KACC 91563, in a fecal sample of a Korean neonate, and demonstrated its functional properties. We showed that B. longum KACC 91563 alleviates food allergy through mast cell suppression and produces antioxidative and antihypertensive peptides by casein hydrolysis. Dairy products are considered as an ideal food system for the delivery of probiotic cultures to the human gastrointestinal tract. Cheese affords protection to probiotic microbes during gastric transit due to its relatively high pH, more solid consistency, higher fat content, and higher buffering capacity. Incorporation of B. longum KACC 91563 into cheese making is currently under study.
Bifidobacterium의 효과적인 산업적 이용을 위해서는 산소에 내성이 강한 균주를 선발하는 연구뿐만 아니라, 산소 존재하에서 비피도박테리아의 내성기작을 규명하는 기초적인 연구도 필요하다. 산소에 민감한 B. adolescentis 균주와 산소내성 B. longum JI-1균주의 용존산소 제거능을 비교한 결과산소 민감성 균주는 총존산소를 전혀 제거하지 못하였으나 산소내성 균주는 10분 이내에 3%이상의 용존산소를 제거하여 총존산소 제거능과 Bifidobacterium의 산소내성과는 밀접한 관계가 있음을 알 수 있었다. 이 B. longum JI-1 균주를 미호기성 조건에서 배양하여 내산소성 돌연변이 균주인 B. longum ADJ-1 균주를 분리하였다. B. longum ADJ-1과 모균주의 특성을 당자화능, NADH 산화효소 및 세포지방산등으로 비교하였을 때 차이점을 발견하지 못했으며, 균생육은 B. longum ADJ-1이 모균주의 80% 정도를 보여 주었다. 그러나 B. longum ADJ-1는 매우 두꺼운 slime layer를 형성하였는데 confocal scanning laser microscopy에 의한 분석 결과 돌연변이 균주는직경이 약 6 $\mu\textrm{m}$에 이르는 층을 형성한 반면 모균주는 약 3 $\mu\textrm{m}$인 층을 형성하였다. 그리고 돌연변이 균주는 산소에 24시간 이상 노출되었을 경우 모균주에 비하여 더 큰 산소내성을 보여주었다. 그러므로 돌연변이 균주의 산소내성의 증가는 slime layer 차이에서 유래된 것으로 생각되며 이는 Bifidobacterium의 내산소성 기작중의 하나인 것으로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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