Isolation and Identification of the Antilisterial Bifidobacterium Isolates from the Infants Fecal Samples

유아의 분변으로부터 항리스테리아 활성의 Bifidobacterium 속 균주의 분리 및 동정

This study was conducted to isolate antilisterial strains of the Bifidobacterium isolates from the infant feces. The bifidobacteria were isolated anaerobically on BL agar and screened for their inhibitory activity on the MRS-cysteine medium against three foodborne pathogens: Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, and Staphylococcus aureus. Among the 52 bifidobacterial isolates, 5 strains(A24, Bl, B6, B10, and Bl2) were finally selected based on their stronger antilisterial activity against Listeria monocytogenes than other isolates tested. Morphologically, all the isolates were typically shown Y-and V-shaped under electron microscopic examination. Each isolate was primarily subjected to identification by a polymerase chain reaction(PCR) using a genus-specific primer designed for targeting the 16S rRNA gene sequence, and confirmed the primary identification data using an API-kit(Biomeriuex, France), commercially available product for identification based on biochemical and physiological traits. Of the isolates with antilisterial activity, strain A24 was finally confirmed as the Bifidobacterium longum A24.

유아 분변으로부터 분리한 52 균주는 그람 양성균인 Listeria monocytogenes KCCM 40307$^T$에 대하여 항균활성이 있었고 그 중에서도 선별 균주 A24의 항균활성이 45% 이상으로 가장 높았다. Bifidobacterium longum A24의 생육 및 항균 물질 생산을 검토하였을 때 균체의 생육은 28시간 배양 시 최고에 도달하였고 항균 활성은 36시 간 배양 시 최고를 나타내었다. 선별균주 A24는 16S rRNA-based molecular typing 결과Bifidobacterium 속 균주임을 확인할 수 있었고 형태학적 ${\cdot}$ 생화학적인 방법으로 검토하여 보았을 때 Bifidobacterium longum으로 판단되었으며, 16s rDNA sequencing 결과 최종적으로 Bifidobacterium longum로 동정 되었으며 이것을 Bifidobacterium longum A24로 명명하였다. Bifidobacterium longum A24의 항균 활성 물질은 균체의 생육이 가장 좋은 28시간 배양에서가 아니라 그보다 늦은 36시간 배양에서 최고를 나타내었고 그 이후로는 활성이 감소하는 경향을 보였다. 이것은 Bifidobacterium longum A24이 생성하는 항균 활성 물질이 bacteriocin과 같은 2차 대사 산물임을 암시하는 결과로 해석된다.