This study was carried out to establish a reproducible culture system for callus formation and adventitious shoot development from young stem segments of Vigna radinta, and histological work for orgin of callus tissue and adventitious shoot. Induction of callus from young stem explants of Vigna radiata was very effective on MS inorganic salts supplemented with 0.5 mg/L 2,4-D and 1.0 mg/L kinetin. For the adventitious shoot regeneration from the callus tissues, the hormone combination of 0.75 mg/L NAA, 1.5 mg/L kinetin and MS salts resulted in about 21% efficiency. Histological examination showed that callus tissues originated from out-growths by callus cambium rings with do novo meristematic activities, which were localized at the outside of the vascular cambium. Adventitious shoots were developed from shoot apical meristem originated from the surface of callus masses. The shoot apical meristem produced leaf primordium, which then became leaf.
Homeostatic regulation of meristematic stem cells accomplished by maintaining a balance between stem cell self-renewal and differentiation is critical for proper plant growth and development. The quiescent center (QC) regulates root apical meristem homeostasis by maintaining stem cell fate during plant root development. Cell cycle checkpoints, such as anaphase promoting complex/cyclosome/cell cycle switch 52 A2 (APC/CCCS52A2), strictly control the low proliferation rate of QC cells. Although APC/CCCS52A2 plays a critical role in maintaining QC cell division, the molecular mechanism that regulates its activity remains largely unknown. Here, we identified SCFFBS1, a ubiquitin E3 ligase, as a key regulator of QC cell division through the direct proteolysis of CCS52A2. FBS1 activity is positively associated with QC cell division and CCS52A2 proteolysis. FBS1 overexpression or ccs52a2-1 knockout consistently resulted in abnormal root development, characterized by root growth inhibition and low mitotic activity in the meristematic zone. Loss-of-function mutation of FBS1, on the other hand, resulted in low QC cell division, extremely low WOX5 expression, and rapid root growth. The 26S proteasome-mediated degradation of CCS52A2 was facilitated by its direct interaction with FBS1. The FBS1 genetically interacted with APC/CCCS52A2-ERF115-PSKR1 signaling module for QC division. Thus, our findings establish SCFFBS1-mediated CCS52A2 proteolysis as the molecular mechanism for controlling QC cell division in plants.
Shoot apical meristem dome explants from cassava plants (Ghanaian local variety) produced somatic embryos at a frequency of 32% when cultured on MS medium supplemented with 2 mg/L 2,4-D. Somatic embryo segments formed secondary embryos at frequencies of up to 93% when cultured on medium containing 1 mg/L 2,4-D for 2 to 3 weeks. Since the somatic embryos were not capable of converting into plantlets, adventitious shoot were induced from the sliced embryo segments by culturing them on medium containing 0.1 to 5 mg/L BA. After 8 weeks of culture, numerous shoots formed on the segments at frequencies up to 100%. The shoots were rooted and successfully transplanted to potting soil.
Chaudhuri, Rituparna Kundu;Pal, Amita;Jha, Timir Baran
Plant Biotechnology Reports
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v.2
no.3
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pp.213-218
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2008
Swertia chirata is an endangered gentian species that prefers to grow at higher altitudes. This ethnomedicinal herb is known primarily for its bitter taste caused by the presence of important phytochemicals that are directly associated with human health benefits. Due to a continuous loss of habitat and inherent problems of seed viability and seed germination, alternative strategies for propagation and conservation are urgently required to prevent the possible extinction of this species. We have formulated a reproducible protocol for the rapid propagation and conservation of this plant using leaves taken from in vitro shoot cultures. Direct induction of more than seven shoot buds per explant was achieved for the first time when the explants were placed on MS medium supplemented with $2.22{\mu}M$ N-6-benzyladenine, $11.6{\mu}M$ kinetin, and $0.5{\mu}M$${\alpha}-naphthalene$ acetic acid. Direct organogenesis was noted exclusively from the adaxial surface of the basal segments of leaves. Leaves closer to the apical meristem were more responsive than those farther away from the meristem. Plants raised through direct organogenesis were evaluated for their clonal fidelity by chromosomal analysis and DNA fingerprinting. Complete plants were successfully transferred to the field condition and produced viable seeds. Given the enormous potential of this age-old medicinal plant in terms of potential health-benefitting drugs, this protocol can be used for commercial propagation purposes and to initiate future genetic improvement studies.
Kim, Mi Young;Cho, Kang Hee;Chun, Jae An;Park, Seo Jun;Kim, Se Hee;Lee, Han Chan
Journal of Plant Biotechnology
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v.44
no.4
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pp.401-408
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2017
Herein, we report the meristem-tip culture from dormant buds of grape 'Kyoho' single-infected with Grapevine fleck virus (GFkV), which is phloem-limited and transmitted by graft inoculation. We produced GFkV-free shoots without thermo- or chemotherapy using meristem-tip explants approximately 0.3 mm (73 explants) and 0.8 mm long (five explants) including shoot apical meristem, 2-5 leaf primordia, and 1-4 uncommitted primordia from dormant buds of the infected woody cuttings (stored at $4^{\circ}C$). Explants were cultured on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 3% sucrose, 3.0 mg/L benzyladenine (BA) and 0.1 mg/L indole-3-butyric acid (IBA). After 16 weeks of culture, shoot (10-mm long) regeneration frequency achieved from 0.3-mm explants was 4.1% and that obtained from 0.8-mm explants was 40.0%. Virus-free efficiency (expressed as the percentage of RT-PCR negative shoots regenerated) from 0.3- and 0.8-mm explants was 100% and 50%, respectively. Following in vitro multiplication, RT-PCR assays revealed identical results to assays of the first regenerated shoots. Our new methodological approach could be applied for eliminating other viruses in grapevines, as well as for producing virus-free plants in many other deciduous tree species, including fruit trees.
Glyphosate(N-[phosphonomethyl]glycine) applied to the assimilate-exporting leaves or sprayed to the whole plants of tomato(Lycopersicon esculentum Mil var. Moneymaker). Glyphosate induced the rapid accumulation of shikimic acid within 24 h. The accumulation of shikimic acid companied with chlorophyll loss in meristematic leaves, i.e. apical leaves. The chlorosis was acropetal in apical region of young growing leaf. The degradation of chlorophyll seems to be a secondary or tertiary effect of glyphosate. However, the level of shikimic acid accumulated was reduced except for roots and apical leaves from 5 days after treatment. The accumulating levels are considerably differed through the applicated regions. The level of shikimic acid is highest at the apical meristem 4 days after the application to 3rd old leaf.
The plant Empetrum nigrum, valued in the traditional system of medicine, is well known for its antibacterial, antifungal, and antioxidant properties. In the present work, the effect of removal of shoot apical meristem (SAM) on shoot proliferation was studied. It was observed that removal of SAM promoted shoot proliferation whereas intact tip resulted in higher survival percentage. Further, the effect of different concentrations of BA on above was also studied. During root formation the effect of light quality after treatment with IBA was investigated. For rooting, continuous red light without IBA resulted in maximum rooting percentage. The above factors when taken into consideration during micropropagation of this endangered plant can result in healthier plantlets. The results show that the species could be successfully conserved by in vitro propagation system.
Evolutionary studies conducted on NAC (NAM, ATAF1&2, and CUC2) genes for all major groups of land plants, indicate the presence of the NAC subfamilies, even in the early land plants. The varied roles played by NAC proteins in plant growth and development range from the formation of shoot apical meristem, floral organ development, reproduction, lateral shoot development, and defense responses to biotic and abiotic stresses. Considering the value and importance of solanaceous crops, the study of NAC proteins in these plants needs to be intensified. This will help to identify and functionally characterize their promoters, which will subsequently aid in engineering plants with improved performance under stressful conditions. In this review, the functionally characterized NAC transcription factors specific to tomato, potato, tobacco, chili pepper and eggplant (aubergine) are summarized, clearly indicating their biological functions in the defense mechanism of the plants, against biotic and abiotic stresses.
Young haploid leaf derived from the anthers of tobacco plant was cultuerd and plantlets of various ploidies were obtained. When the leaf was put on the medium supplemented with kinetin as growth regulator, plantlets developed directly from the leaf, and the plants coming out in early stage of culture were all haploid. Plants developing in later stage were mostly haploids with some exception of diploid and aneuploid. Leaves were also cultured on the callus-inducing media supplemented with 2,4-D and kinetiion, and the calluses were sub-cultured for six months. Plants developed from these calluses were mostly aneuploids of various chromosome numbers. In view of the fact that the plants directly developed from the leaf were all haploid, the tissue of the original leaf explant was assumed to be uniform as far as chromosome number was concerned. On the other hand, it seemed that the occurrence of various ploidies in the plants derived from the calluses of same origin was the result of the influence of in vitro culture. Apical meristem tissues and various multicellular bodies were formed in the epidermal and inner mesophyll tissues as well as in the sub-epidermal cells.
Two potato (Solanum tuberosum L.) cultivars were transformed by Agrobacterium tumefaciens harboring cauliflower mosaic virus (CaMV) 35S promoter and $\beta$-glucuronidase (GUS) gene. Expression patterns of the CaMV 35S promoter according to tissue types and developmental stages, and genetic stability of GUS gene were investigated in the clonal progenies of transgenic potatoes. Kanamycin-resistant shoot emerged from tuber disc after 4 weeks of culture, and root was induced 6 weeks after culture on the selection medium. Shooting frequency of cvs. Superior and Dejima were 43% and 27%, respectively. Mature transformants and their clonal progenies showed no phenotypical abnormality. GUS activity was expressed primarily at parenchymatous cells of phloem tissue around the vascular cambium in the stem and root, and higher activity was found at the apical meristem of shoot, root and adventious shoot bud. GUS activity was higher at tubers of young explants than at stored tubers. These facts indicate that expression level of the CaMV 35S promoter differed according to tissue types and developmental stages of the organs. The GUS gene was stably inherited to each clonal progeny and normally expressed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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