• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제34권4호
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• pp.255-258
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• 1996

닭에 있어서 닭와포자충의 재감염에 대한 방어기전을 이해하기 위하여 장기간에 걸쳐 혈청IgG항체가를 경시적으로 조사하였다. 2일령의 SPF 병아리(Dekalb-Warren, Sex-Sal-Link)에 $5{\;}{\times}{\;}10^5$개 그리고 IgG가가 정상으로 복귀한 다음 10일인 340일령에 $1{\;}{\times}{\;}10^7$개의 닭와포자충의 오오시스트를 경구투여하고 나서 채혈하여 간점형광항체법을 이용하여 혈청IgG 항체가를 측정하였다. IgG 가는 감염후 3일부터 38일까지는 대조군과 차이가 없었으나 45일부터 1:21.33으로 상승하기 시작하여 120일에 1:512로 최고치에 이른다음 점점 떨어져 330일에 1:4로 정상치에 이르렀다. 도전 감염후 7, 14, 28일에 각각 1:16, 1:512, 1:1.024로서 점점 높아져 정점에 이른다음 급격히 떨어져 63일에 정상으로 복귀하였다. 한편, 대조군의 항체가는 모두 1:2~1:4의 범위에 있었으며 이 원충의 도전감염전 및 후에 있어서 분변으로부터 집충시켜 제작한 Kinyoun 항산염색표본에서도 오오시스트를 전혀 검출할 수 없었다. 분변내의 오오시스트의 소실 시기와 최초 감염에 있어서 IgG가의 피이크는 일치하지 않았다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제37권2호
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• pp.105-109
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• 2009

단백질 인산화를 통한 세포내 신호전달기구 중 serine/threonine kinase에 속하는 Akt/PKB는 세포 생존과 사멸, 당대사 등을 조절하는 것으로 알려져 있다. 이러한 이유로, Akt/PKB 단백질은 천연물질들로부터 항암제를 탐색하기 위한 한 가지 target으로 사용되어 왔다. 본 연구에서는 Akt/PKB 단백질을 대량으로 생산하기 위하여 대장균의 단백질 발현 시스템을 이용하여 human Akt/PKB 단백질을 발현시켰다. 대장균에서 대량 발현된 Akt는 일반적인 조건에서는 inclusion body를 형성하였다. 배양온도 $27^{\circ}C$에서 0.01-0.09 mM IPTG로 발현 유도 시 발현된 human Akt/PKB 단백질 상당 부분이 가용화 되었다. 발현된 Akt kinase를 $Ni^{2+}$-NTA agarose column으로 정제하고, anti-Akt antibody를 이용하여 정제된 단백질이 Akt kinase 임을 확인하였다. 정제된 human Akt/PKB 단백질은 세포추출물에 존재하는 인산화 단백질을 이용하여 in vitro에서 인산화 되었으며, 인산화된 활성형 human Akt/PKB protein kinase는 human Akt/PKB protein kinase 특이 형광 peptide를 특이적으로 인산화하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제33권3호
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• pp.189-193
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• 2005

RBL-2H3 cell lysates에 anti-protein phosphatase(PP) 1, 2A, 2B 항체를 첨가한 후 immunoprecipitation을 실시한 결과 PP2B를 가해준 샘플에서만 HRF를 확인하였다. 역으로 monoclonal anti-HRF 항체를 가한 후 immunoprecipitation을 실시한 결과 PP1, 2A는 검출되지 않았으나 PP2B의 경우는 regulatory subunit(19 kDa), catalyic subunit(60 kDa) 모두 확인할 수 있었다. Affinity chromatography를 통해서도 PP2B가 HRF의 탈인산화에 관여함을 확인하였다 즉 19kDa의 PP2B regulatory subunit과 60kDa의 catalytic subunit 모두가 확인되었으며 외부 $Ca^{2+}$이온 첨가 여부에 따른 차이는 관찰할 수 없었다. 결론적으로 RBL-2H3 cell에서 PP2B는 PP1이나 PP2A에 비해 상대적으로 그 존재량은 적으나 HRF와 상호작용하는 phosphatase로서 검출된 반면 PP1이나 PP2A는 검출되지 않았다.

• 동의생리병리학회지
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• 제16권3호
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• pp.577-583
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• 2002

Experimental studies were done to research the Clinical effects of Insambakhab-tang on the Anti-allergic effect and pulmonary function of O₃ intoxicated Mice. Anti-allergic effect experiment consisted of vascular permeability responses to intradermal histamine and serotonin, 48hrs homologous passive cutaneous anaphylaxis provoked by the IgE-like antibody against egg white albumin, and delayed type hypersensitivity responses to Picryl Chloride and SRBC. Pulmonary function of O₃ intoxicated Mice experimental consisted of pulmonary thromboembolism (Sodium Arachidonate-induced and ADP-induced), lung TBA value, and serum Na/sup +/, K/sup +/, Cl/sup +/ level. The results obtained as follows; 1. In the effects of Insambakhab-tang on the pulmonary thromboembolism by Sodium Arachidonic acid and ADP, Insambakhab-tang group revealed significant effect. 2. In the effects of Insambakhab-tang on the vascular permeability responses to intradermal histamine, Insambakhab-tang group revealed significant effect. 3. In the effects of Insambakhab-tang on the vascular permeability responses to intradermal serotonine, Insambakhab-tang group revealed significant effect. 4. In the 48hrs homologous passive cutaneous anaphylaxis provoked by the IgE-like antibody against egg white albumin, Insambakhab-tang group revealed significant effect. 5. In the delayed type hypersensitivity responses to Picryl Chloride, Insambakhab-tang group revealed significant effect. 6. Insambakhab-tang group revealed significant effect on decrease of the lung TBA value of lung. 7. In the effects of Insambakhab-tang on Serum Na/sup +/, K/sup +/ Level in O₃-intoxicated Mice. Insambakhab-tang group revealed none significant effect, but In the effects of Insambakhab-tang on Serum Cl/sup +/ Level in O₃-intoxicated Mice, Insambakhab-tang group revealed significant effect.

• 한국수산과학회지
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• 제32권4호
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• pp.420-426
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• 1999

한국 양식산업에서 중요한 어종인 넙치 (Paralichthys olivaceus) 포르말린으로 처리한 E. tarda를 항원으로 하였을 때의 면역반응 분석을 위하여 ELISPOT 기법을 적정화시킨 후 넙치의 각 장기에 있는 총 항체생성세포와 특이 항체생성세포를 계수하는데 응용하고자 하였다. 전신과 비장의 항체생성세포를 2.5시간 이상 96 well plate에 배양하면 충분히 분석이 가능하였다. 그러나 총 또는 특이 항체생성세포 분석을 위하여 과량의 토끼 항 넙치 면역글로불린 또는 E. tarda 항원을 plate에 coating하는 것은 오히려 ELISPOT법의 감도를 감소시키는 것으로 나타났다. ELISPOT법의 특이성은 단백질 합성 억제제인 cycloheximide를 처리한 임파세포에서 총 항체생성세포가 발견되지 않는 것으로서 입증할 수 있었다. 특이 항체생성세포 수의 최대치는 면역 3주째에 나타났으며 이후 계속 빠르게 감소하여 7주째는 거의 발견되지 않았다. 이러한 반응은 신장과 비장에서 유사하게 나타나 임파장기에 따른 차이점은 발견할 수 없었다. 면역 후 2주와 3주 사이에 혈청내 특이 항체량 또한 빠르게 증가하여 ELISPOT법으로 분석된 특이 항체생성세포 수의 변화와 일치함을 발견할 수 있었다. 그러나 증가된 혈청내 특이 항체량이 면역 5주부터 실험 종료 시점까지 계속 높은 수준으로 유지되고 있는 것은 급격한 감소를 보이는 특이 항체생성세포의 동력학적 변화와는 명확히 구별되는 점이었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제12권3호
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• pp.483-489
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• 2002

The role of $G{\alpha}12\;and\;G{\alpha}13$ in modulating the IgE receptor-mediated histamine secretion in the streptolysin-o-permeabilized human cultured mast cell was investigated. The expression of $G{\alpha}12\;and\;G{\alpha}13$ proteins were regulated during human cultured mast cell differentiation, and a significant correlation was observed between the levels of expression of $G{\alpha}12\;and\;G{\alpha}13$ proteins and IgE receptor-mediated histamine secretion capability in human cultured mast cells. Antibodies against $G{\alpha}12\;and\;G{\alpha}13$ effectively inhibited the IgE receptor-induced histamine release, and the concentration of anti-$G{\alpha}12$ antibody used to inhibit histamine secretion was shown to also inhibit the IgE receptor-mediated elevation of intracellular $Ca^2+$. Therefore, the results suggest that $G{\alpha}12\;and\;G{\alpha}13$ play roles in modulating IgE receptor-activated $Ca^2+$ influx, thereby regulating histamine release in cultured human mast cells. This is the first report to show that $G{\alpha}12\;and\;G{\alpha}13$ are involved in the regulation of $Ca^2+$ mediated exocytosis in human cultured mast cells.

• 대한한방소아과학회지
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• 제4권1호
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• pp.19-30
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• 1990

Experimental Studies were done to research the clinical effects of Hyunggaeyeugyotang on the Anti-allergic effect in mice and rats. The results obtained as follows; 1. In the effect of Hyunggaeyeungyotang on vascular permeability responses to intradermal histamine in rats, Hyunggaeyeugyotang revealed Significant effect. 2. In the effect of Hyunggaeyeungyotang on vascular permeability responses to intradermal serotonin in rats, Hyunggaeyeungyotang revealed significant effect. 3. In the 48hr homologous passive cutaneous anaphylaxis in rats provoked by the IgE-like antibody against egg albumin, Hyunggaeyeungyotang revealed significant effect. 4. In the effect of Hyunggaeyeungyotang on Delayed-type hypersensitivity responses to picryl chloride in mice, Hyunggaeyeungyotang revealed none of significant. 5. In the effect of Hyunggaeyeungyotang on Delayed-type hypersensitivity responses to SRBC in mice, Hyunggaeyeungyotang revealed none of significant. According to above-stated results, Hyunggaeyeungyotang is concluded to be effective as anti-allergic regimen and recommended to be used for treatment of allergic disease.

• IMMUNE NETWORK
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• 제22권5호
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• pp.42.1-42.20
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• 2022

Vaccination with tumor peptide epitopes associated with MHC class I molecules is an attractive approach directed at inducing tumor-specific CTLs. However, challenges remain in improving the therapeutic efficacy of peptide epitope vaccines, including the low immunogenicity of peptide epitopes and insufficient stimulation of innate immune components in vivo. To overcome this, we aimed to develop and test an innovative strategy that elicits potent CTL responses against tumor epitopes. The essential feature of this strategy is vaccination using tumor epitope-loaded nanoparticles (NPs) in combination with polyinosinic-polycytidylic acid (poly-IC) and anti-PD1 mAb. Carboxylated NPs were prepared using poly(lactic-co-glycolic acid) and poly(ethylene/maleic anhydride), covalently conjugated with anti-H-2K^b mAbs, and then attached to H-2K^b molecules isolated from the tumor mass (H-2^b). Native peptides associated with the H-2K^b molecules of H-2K^b-attached NPs were exchanged with tumor peptide epitopes. Tumor peptide epitope-loaded NPs efficiently induced tumor-specific CTLs when used to immunize tumor-bearing mice as well as normal mice. This activity of the NPs significantly was increased when co-administered with poly-IC. Accordingly, the NPs exerted significant anti-tumor effects in mice implanted with EG7-OVA thymoma or B16-F10 melanoma, and the anti-tumor activity of the NPs was significantly increased when applied in combination with poly-IC. The most potent anti-tumor activity was observed when the NPs were co-administered with both poly-IC and anti-PD1 mAb. Immunization with tumor epitope-loaded NPs in combination with poly-IC and anti-PD1 mAb in tumor-bearing mice can be a powerful means to induce tumor-specific CTLs with therapeutic anti-tumor activity.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제39권sup2호
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• pp.231-237
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• 2009

Purpose: Cytolethal distending toxin (CDT) is a family of heat-labile cytotoxins produced by several gram-negative mucosa-associated pathogens, including Aggregatibacter actinomycetemcomitans. CDT is well known to be capable of inducing growth arrest, morphological alterations, and eventually death in various cells. CDT belongs to a tripartite $AB_2$ toxin (CdtB: the enzymatic A subunit; CdtA and CdtC: the heterodimeric B subunit). Previous studies proposed that CdtA and CdtC together bind to a cell surface receptor and glycolipids act as a receptor for A. actinomycetemcomitans CDT (AaCDT). In this study, recombinant CdtA and CdtC proteins of AaCDT were co-expressed in a bacterial expression system and tested for their affinity for $GM_1$ ganglioside. Methods: The genes for CdtA and CdtC from A. actinomycetemcomitans Y4 were utilized to construct the expression vectors, pRSET-cdtA and pET28a-cdtC. Both CdtA and CdtC proteins were expressed in Escherichia coli BL21(DE3) and then purified using hexahistidine (His6) tag. The identity of purified protein was confirmed by anti-His6 antibody and monoclonal anti-CdtA antibody. Furthermore, the affinity of recombinant protein to $GM_1$ ganglioside was checked through ELISA. Results: Recombinant CdtA and CdtC proteins were expressed as soluble proteins and reacted to anti-His6 and monoclonal anti-CdtA antibodies. ELISA revealed that purified soluble CdtA-CdtC protein bound to $GM_1$ ganglioside, while CdtA alone did not. Conclusions: Co-expression of CdtA and CdtC proteins enhanced the solubility of the proteins in E. coli, leading to convenient preparation of active CdtA-CdtC, a critical material for the study of AaCDT pathogenesis.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.265-265
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• 1994

본 연구는 간염 바이러스의 X 및 elongated X 유전자를 클로닝하여 E. coli에서 대량 발현시진 후, 그 기능을 여러 측면에서 연구하교 지금까지 알려진 oncogene products, tumor suppressor, 그리고 그 밖의 다른 암 유발인자와의 interaction에 대해 분석함으로써 간암 생성의 분자적 기작을 이해하고 더 나아가 간암의 예방 및 치료제의 개발을 목표로 하였다. 그 일차적 연구로서 이전에 플로닝된 mutant hepatitis Bvirus genome으로부터 X 및 elongated X 유전자를 클로닝하였으며, E. coli에서 대량 발현시키기 위하여 T7 bacteriophage promoter아래에 재 클로닝하였다. 이러한 X 및 ebngated X 유전자를 E. coli에서 대량 발현시킨 후, rabbit anti-X antibody를 이용하여 western blotting을 수행함으로서 이를 확인하였으며 DEAE-cellulose와 heparin-agarose chromategraphy를 이용하여 순수분리하였다. 순수분리된 X 및 etongated X 단백질을 highly differentiated hepatoma cell인 HepG$_2$ cell에 처리하여 transactivation activity를 측정하였다. 그 결과 순수분리된 단백질들이 SV4O promoter를 transactivation 함을 할 수 있었으며, 이로부터 클로닝된 유전자들이 모두 정상적인 기능을 가짐을 확인하였다. 그러고 X 유전자의 작용기작을 규명하기위하여 restriction endonuclease를 이용하여 5 개의 mutant X 유전자를 구성하였으며 현재 이를 HepG2 cell에 transfection 하여 그 기능을 연구하고 있다.