The fungal strain SW-3 having antimicrobial activity was isolated from soil of crucified plants in Pocheon, Kyungki-Do, Korea. Strain SW-3 was identified as Alternaria brassicicola by its morphological characteristics, and confirmed by the analysis of the 18S gene and ITS regions of rDNA. The fungus showed a similarity of 99% with Alternaria brassicicola in the 18S rDNA sequence analysis. A. brassicicola has been reported to produce an antitumor compound, called depudecin. We found that strain SW-3 produced antimicrobial metabolites, in addition to depudecin, during sporulation under different growth conditions. The metabolite of the isolated fungus was found to have strong antifungal activity against Microsporium canis and Trichophyton rubrum, and antibacterial activity against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aerogenes. The amount and kind of metabolites produced by the isolate were affected by growth conditions such as nutrients and growth periods.
국내 토양에서 분리한 식물성 병원균인 Alternaria brassicicola SW-3리 항암활성 물질 생산능을 조사하고, 활성물질을 분리 정제하여 구조를 확인하였다. A. brassicicola SW-3는potato dextrose broth를 이용하여 15$^{\circ}C$에서 2주간 진탕 배양한 다음, MTT assay를 실시하여 항암활성을 확인하였으며, 배양여액 중의 항암물질은 ethyl acetate로 추출하고, silica gel column chromatography로 정제하여 무색의 oily product를 얻었다(수율 22mg/m1). 분리된 물질은 물이나 hexane에는 녹지 않고, chloroform, ethyl acetate, ethanol 등에는 잘 녹는 특징을 보였으며, , $IR^{1}$H-NMR, $^{13}$C-NMR 등을 통해 구조를 분석한 결과, 최근에 일본에서 분리되어 항암효과가 있는 것으로 알려진 depudecin과 동일한 물질로 추정되었다. 본 실험에서 분리된 depudecin은 인체간암세포와 mouse 피부암세포에 대한 세포독성을 나타내었으며, 각각의$ IC_50$ 는 $57\mu$g/ml, $69\mu$g/ml로 나타났다. Alternaria brassicicola SW-3에 의해 생산된 물질이 기지의 물질이지만, depudecin은 아직 작용 기작이나 적용범위 등이 밝혀지지 않은 초기 연구 단계에 있는 물질로서, 새로운 항암제로서의 가능성이 매우 높아 이의 유도체를 합성하거나, 다른 항암제와의 혼용에 의해 부작용이 적은 강력한 항암제를 개발하기 위한 선도물질로 활용될 수 있을 것이다.
본(本) 실험(實驗)은 몇 종류(種類)의 종자상(種子上)에 형성(形成)된 7종의 Alternaria의 생육습성(生育習性)을 조사(調査)하고 종자건전도검사시(種子健全度檢査時) 쉽게 동정(同定)할수 있는 방법(方法)을 강구(講究)하기 위해서 실시(實施)하였다. Alternaria의 종류별(種類別)로 기생범위(寄生範圍)와 피해상황(被害狀況)을 설명하였고 사진을 통해서 설명(說明)을 보충(補充)하였다. 조사(調査)된 Alternaria는 A. tenuis A. brassicicola, A. brassicae, A. raphani, A. dauci, A. radicina 및 A. sesami등이고 서로 비슷한 종(種)에 대해서는 식별(識別)에 도움이 되도록 고찰(考察)하였다.
Mitogen-activated protein kinase (MAPK) cascades in fungi are ubiquitously conserved signaling pathways that regulate stress responses, vegetative growth, pathogenicity, and many other developmental processes. Previously, we reported that the AbSte7 gene, which encodes a mitogen-activated protein kinase kinase (MAPKK) in Alternaria brassicicola, plays a central role in pathogenicity against host cabbage plants. In this research, we further characterized the role of AbSte7 in the pathogenicity of this fungus using ${\Delta}AbSte7$ mutants. Disruption of the AbSte7 gene of A. brassicicola reduced accumulation of metabolites toxic to the host plant in liquid culture media. The ${\Delta}AbSte7$ mutants could not efficiently detoxify cruciferous phytoalexin brassinin, possibly due to reduced expression of the brassinin hydrolase gene involved in detoxifying brassinin. Disruption of the AbSte7 gene also severely impaired fungal detoxification of reactive oxygen species. AbSte7 gene disruption reduced the enzymatic activity of cell walldegrading enzymes, including cellulase, ${\beta}$-glucosidase, pectin methylesterase, polymethyl-galacturonase, and polygalacturonic acid transeliminase, during host plant infection. Altogether, the data strongly suggest the MAPKK gene AbSte7 plays a pivotal role in A. brassicicola during host infection by regulating multiple steps, and thus increasing pathogenicity and inhibiting host defenses.
Alternaria brassicicola (Schwein.) invades Brassicaceae and causes black spot disease, significantly lowering productivity. Mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and their upstream kinases, including MAPK kinases (MAPKKs) and MAPKK kinases (MAPKKK), comprise one of the most important signaling pathways determining the pathogenicity of diverse plant pathogens. The AbSte7 gene in the genome of A. brassicicola was predicted to be a homolog of yeast Ste7, a MAPKK; therefore, the function was characterized by generating null mutant strains with a gene replacement method. AbSte7 replacement mutants (RMs) had a slower growth rate and altered colony morphology compared with the wild-type strain. Disruption of the AbSte7 gene resulted in defects in conidiation and melanin accumulation. AbSte7 was also involved in the resistance pathways in salt and oxidative stress, working to negatively regulate salt tolerance and positively regulate oxidative stress. Pathogenicity assays revealed that AbSte7 RMs could not infect intact cabbage leaves, but only formed very small lesions in wounded leaves, whereas typical lesions appeared on both intact and wounded leaves inoculated with the wild-type strain. As the first studied MAPKK in A. brassicicola, these data strongly suggest that the AbSte7 gene is an essential element for the growth, development, and pathogenicity of A. brassicicola.
The alkaloid securinine was assessed against spore germination of some plant pathogenic and saprophytic fungi (Alternaria alternata, Alternaria brassicae, Alternaria brassicicola, Curvularia lunata, Curvularia maculans, Curvularia pallenscens, Colletotrichum musae, Colletotrichum sp., Erysiphe pisi, Helminthosporium echinoclova, Helminthosporium spiciferum, Heterosporium sp.). Spore germinations of all the tested fungi were inhibited. Alternaria brassicicola, C. lunata, C. pallenscens and H. spiciferum were highly sensitive as complete inhibition of spore germination was observed at very low concentrations (200 ppm).
본 연구는 Alternaria brassicicola에 의해 발생하는 무 검은무늬병에 대한 효율적인 저항성 검정법을 확립하기 위하여 수행되었다. A. brassicicola 7균주의 포자 형성량과 병원성을 검정하였다. 실험한 균주 중, A. brassicicola KACC 40036과 43923 균주는 V-8 juice agar 배지에서 가장 많은 포자를 생산하였다. 그리고 실험한 균주 모두는 무 유묘에 대하여 강한 병원력을 나타냈다. 시판 중인 무 61개 품종의 A. brassicicola KACC 40036 균주에 대한 저항성 스크리닝을 수행하였다. 실험한 품종 중 높은 저항성을 보이는 품종은 없었으나 '금봉'과 '새롬'같이 약한 저항성을 나타내는 품종이 발견되었다. 이들 결과로부터 추후 실험을 위해 저항성 반응에 차이를 보이는 4개 품종을 선발하였다. 이들 4개 품종의 접종하는 무의 생육 시기, 접종원 농도 그리고 접종 후의 재배 온도에 따른 검은무늬병 발생을 조사하였다. 실험한 모든 품종은 어린 유묘일수록 검은무늬병에 대한 감수성이 증가하였으며, 더 많은 A. brassicicola 포자를 접종할수록 검은무늬병이 더 많이 발생하였다. 그리고 접종한 유묘를 $25^{\circ}C$의 습실상에서 배양하였을 때에는 $20^{\circ}C$ 나 $30^{\circ}C$에서 배양하였을 때보다 검은무늬병 발생이 증가하였다. 이들 실험의 결과로부터 무 품종의 검은무늬병에 대한 저항성을 검정하기 위해서는 무 종자를 파종하고 온실($25{\pm}5^{\circ}C$)에서 16일 동안 재배하고, 이 유묘에 A. brassicicola 균주의 포자현탁액($2.0{\times}10^5spores{\cdot}mL^{-1}$)을 분무하여 접종하고, 접종한 식물은 $25^{\circ}C$ 습실상에 24시간 동안 배양한 후에 $25^{\circ}C$, 상대습도 80%의 생육상에서 재배하고, 접종 2일 후에 병반면적율을 조사하는 것을 제안한다.
Lawrence, Christopher B.;Mitchell, Thomas K.;Craven, Kelly D.;Cho, Yang-Rae;Cramer, Robert A.;Kim, Kwang-Hyung
The Plant Pathology Journal
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제24권2호
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pp.101-111
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2008
The fungal genus Alternaria is comprised of many saprophytic and endophytic species, but is most well known as containing many notoriously destructive plant pathogens. There are over 4,000 Alternaria/host associations recorded in the USDA Fungal Host Index ranking the genus 10th among nearly 2,000 fungal genera based on the total number of host records. While few Alternaria species appear to have a sexual stage to their life cycles, the majority lack sexuality altogether. Many pathogenic species of Alternaria are prolific toxin producers, which facilitates their necrotrophic lifestyle. Necrotrophs must kill host cells prior to colonization, and thus these toxins are secreted to facilitate host cell death often by triggering genetically programmed apoptotic pathways or by directly causing cell damage resulting in necrosis. While many species of Alternaria produce toxins with rather broad host ranges, a closely-related group of agronomically important Alternaria species produce selective toxins with a very narrow range often to the cultivar level. Genes that code for and direct the biosynthesis of these host-specific toxins for the Alternaria alternata sensu lato lineages are often contained on small, mostly conditionally dispensable, chromosomes. Besides the role of toxins in Alternaria pathogenesis, relatively few genes and/or gene products have been identified that contribute to or are required for pathogenicity. Recently, the completion of the A. brassicicola genome sequencing project has facilitated the examination of a substantial subset of genes for their role in pathogenicity. In this review, we will highlight the role of toxins in Alternaria pathogenesis and the use of A. brassicicola as a model representative for basic virulence studies for the genus as a whole. The current status of these research efforts will be discussed.
RAPD analysis was performed from four host-specific toxin (HST) producing Alternaria, i.e., A. kikuchiana, A. mali, a. longipes and A. Longipes and A. alternata f. sp. lycopersici, nonpathogenic A. alternata and A. brassicicola to assess their phylogenetic relationship. DNA polymorphism was detected among species (pathotypes) of HST producing Alternaria by PCR amplification and differentiation of the species was recognized by RAPD analysis. Primer OPA-02 was the most profitable among 7 notificated primers for differentiation of the HST producing Alternaria species. UPGMA analysis of the RAPD bands from alternaria spp. revealed that HST producing Alternaria and nonpathogenic a. alternata are closely related.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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