• 한국어병학회지
• /
• 제31권2호
• /
• pp.81-85
• /
• 2018

Fetal bovine serum (FBS) is an essential element of cell growth and can also affect the viral replication. In this study, we tried to find out whether FBS concentration affects the viral infectivity titer of IHNV and IPNV. EPC cells were suspended with MEM supplemented with various concentrations of FBS (MEM0, MEM2, MEM5 and MEM10) and cultured in 96-well plate. Each virus was 10-fold diluted virus and inoculated in 96-well plate. The highest infectivity titer of IHNV was $10^{7.88}\;TCID_{50}/mL$ in 96-well plate using MEM5 and the lowest one was $10^{7.30}\;TCID_{50}/mL$ in 96-well plate using MEM10. The highest infectivity titer of IPNV was $10^{7.47}\;TCID_{50}/mL$ in 96-well plate using MEM5 and the lowest one was $10^{6.97}\;TCID_{50}/mL$ in 96-well plate using MEM10. This study showed that not only 0% FBS but 10% FBS leads low infectivity titer of IHNV and IPNV. Therefore, it is considered that the desirable concentration of FBS is 2% or 5% for measurement of infectivity titer of IHNV and IPNV.

• 대한임상검사과학회지
• /
• 제52권1호
• /
• pp.53-61
• /
• 2020

Cell migration은 embryogenesis 혹은 cancer metastasis 이외에, 물리적 손상에 의한 상처의 수복을 위해서 손상된 부위로 세포가 이동하는 매우 흔하게 관찰되는 현상 중 하나 이다. Wound healing assay는 in vitro의 이차원 평면상에서 세포의 이동을 관찰할 수 있는 기본적인 연구 기법이다. In vitro상에서 물리적 손상을 재현하는 가장 손쉬운 접근법으로서, 세포의 confluent monolayer 표면에 날카로운 도구를 이용하여 기계적인 스크레치를 내는 방법이 사용되고 있다. 완충 스프링이 탑재된 금속 핀을 96-well plate를 기반으로 하는 wound maker에 장착하여 multi-well plate 바닥 표면의 고르지 못한 굴곡과 스크레칭 팁 사이에 직각을 이루는 접촉면에서의 미세한 조절이 가능하도록 하였다. 실험용 팁으로 confluent monolayer위에 스크래치를 내었을 때에는 다양한 지그재그 패턴이 그려진 반면에, 직접 제작한 wound maker에서는 동일한 형태의 선형 wounds가 fibroblast가 seeding된 96-well plate의 각 well의 중심부에 그려짐을 확인하였다. 상용화 되어있는 몇몇 multi-well plate가 본 실험에서 제작된 wound maker와 호환되는 것을 고려하여 보았을 때에, 실시간 wound healing을 관찰하는 high content screening (HCS)실험에 있어서의 활용적인 측면에서 기존의 전형적인 polypropylene 파이펫 팁을 이용한 스크래칭 방법보다 더욱 용이한 방법임을 알 수 있다.

• 농약과학회지
• /
• 제7권2호
• /
• pp.92-99
• /
• 2003

96-well plate를 사용해서 DPPH free radical 소거활성의 고효율검정 (high throughput screening)방법을 확립하였고, 이 방법을 이용하여 107개의 식물특정 효소저해제와 다양한 식물 추출물의 항산화활성을 조사하였다. DPPH free radical 소거활성 측정 측정을 위한 적정 시험조건은 총 반응액이 $250{\mu}L$일 경우 $100{\mu}M$의 DPPH(pH 7.8), 20 분의 반응시간이었고, 이 조건하에서 ascorbate와 a-tocopherol 은 농도 의존적인 항산화활성을 나타내었다. 107개의 식물 특정효소저해제 중에서 11개의 화학물질이 $100{\mu}M$ 농도에서 70% 이상의 항산화활성이 있었는데, 특히 ampicillin과 gallic acid는 각각 90.2% 와 92.6% 의 나타냈다. 또한 100개의 식물 추출물은 $50{\mu}g/mL$ 농도에서 70% 이상의 활성을 보이는 추출물이 11개이었는데, 그 중에서 AT-407의 활성이 90.1%로 가장 높게 나타났다. 따라서 96-well plate를 이용한 DPPH free ra 이때 소거활성 측정방법은 여러가지 합성물질이나 다양한 천연물질에 대하여 보다 간편하고 신속하게 항산화활성을 측정할 수 있을 것으로 사료되었다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
• /
• 제5권3호
• /
• pp.207-210
• /
• 2000

When endothelial cells isolated isolated from human umbilical venis were cultred for 6dary using 96-well microplates, the final cell density in each was fiund not to be the same although the medium composition of each well was exactly the same. Cell growth in the wells located at the periphery of a microplate was low, while that in the central area of the plate was high. A possible cause for different rate of growth was proposed as the uneven concentration of oxygen in the culture medium of each well.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
• /
• 제33권12호
• /
• pp.4023-4027
• /
• 2012

Cytotoxicity assessment of silver nanoparticles (AgNPs) was performed using MTT-based microfluidic image cytometry (${\mu}FIC$). The $LC_{50}$ value of HeLa cells exposed to AgNPs in the microfluidic device was estimated as 46.7 mg/L, which is similar to that estimated by MTT-based IC for cells cultured in a 96 well plate (49.9 mg/L). These results confirm that the ${\mu}FIC$ approach can produce cytotoxicity data that is reasonably well-matched with that of the conventional 96 well plate system with much higher efficiency. This ${\mu}FIC$ method provides many benefits including ease of use and low cost, and is a more rapid in vitro cell based assay for AgNPs. This may aid in speeding up data acquisition in the field of nanosafety and make a significant contribution to the quantitative understanding of nanoproperty-toxicity relationships.

• Journal of Periodontal and Implant Science
• /
• 제25권3호
• /
• pp.694-702
• /
• 1995

Using the Korean red ginseng saponin, which is known to world-wide and thd effects of it have been investigated by many reserachers for years. Ginseng saponin, one of the major components of Korea ginseng root, has many various biologic effects, such as cytotoxic effect, tumorcidal activity, protein biosynthesis and membrane modifying effect. The purpose of this study was to evaluate effects of ginseng saponin on the alkaline phosphatase activity of ROS cells in culture. After ROS cells were seeded into a 96-well plate, 96-well plate cultured until confluence was obtained. To evaluate cytotoxic effect of total saponin in cultured ROS cells, the plates were added to each total saponin concentration (0-1mg/ml). After 48hr., cells were counted by stain with 0.2% trypan blue at randomly selected field microscopically. Also, to evaluate alkaline phosphatase(ALP) activity of total saponin in cultured ROS cell, the plate was added to each total saponin concentration (0-1mg/ml) and ALP activity was assayed. To evaluate time-course of ALP activity, $31.25{\mu}g/ml$ of saponin added to 96-well plate. After culture of 6, 12, 24 and 48hr., ALP activity test was performed. To evaluate effect of cycloheximide in ALP activity, 96-well plate was added to saponin and cycloheximide. In control group, the plate was added saponin only. The results were as follows. 1. After the various concentration of total saponin was added in the medium, 500 and $1000{\mu}g/ml$ of total saponin showed cytotoxic effect of ROS(P<0.005). 2. In contrast to control group, 7.6, 15.6, 31.25, 62.5 and $250{\mu}g/ml$ of total saponin increased ALP activity significantly. 3. Otherwise, 500 and $1000{\mu}g/ml$ of total saponin decreased ALP activity significantly(P<0.005). 4. As the time span increases, $31.25{\mu}g/ml$ of total saponin increased ALP activity. 5. Cycloheximide decreased saponin-indueced ALP actitity in ROS(P<0.005). These results suggest that Ginseng total saponin stimulates the ALP activity of rat osteoblastic cells.

• 농약과학회지
• /
• 제4권3호
• /
• pp.52-59
• /
• 2000

Saccharomyces cerevisiae를 이용하여 효율적인 호흡저해 스크리닝 방법을 개발하고자 실험하였다. S. cerevisiae균을 glucose 발효와 미토콘드리아 호흡이 가능한 yeast extract-peptone-dextrose (YPD) 배지와 단지 미토콘드리아 호흡만이 가능한 non-fermentable carbon source-yeast extract (NFY) 배지로 수확하였다. 96-well plate의 각 well에 균 현탁액을 분주한 다음 다양한 작용기작의 46개 살균제를 여러 가지 농도로 처리하였다. NFY배지에서의 non-fermentable carbon source로는 ethanol (NFY-E배지) 및 glycerol (NFY-G배지), lactate (NFY-L배지)를 이용하였다. 접종 후 $1{\sim}3$일 동안 배양한 다음 최소억제농도 (minimum inhibitory concentration, MIC)를 결정한 결과, 4개의 호흡억제 살균제인 azoxystrobin, kresoxim-methyl, metominostrobin, trifloxystrobin은 YPD 배지에서 균의 생육을 전혀 억제하지 못하였으나, 세가지 NFY배지에서는 높은 항균활성을 보였다. 이와는 반대로 5개의 N-trihalomethylthio계 살균제는 NFY배지보다 YPD 배지에서 높은 활성을 보였다. 그리고 11개 살균제는 두 배지 모두에서 같은 항균활성을 나타내었고, 나머지 26개의 살균제는 모든 배지에서 전혀 항균활성을 보이지 않았다. 그러므로 S. cerevisiae와 96-well plate를 이용한 호흡저해제 검정법은 신속하고 편리하게 호흡저해제를 스크리닝 할 수 있는 방법으로 여겨진다.

• KSBB Journal
• /
• 제23권6호
• /
• pp.484-488
• /
• 2008

본 연구에서는 peroxidase 활성의 신속한 스크리닝을 위해 peroxidase의 활성을 정량적으로 평가할 수 있는 분석으로 agar plate와 96-well plate에서 peroxdase의 활성에 비례하여 색상감도를 측정할 수 있는 colorimetric 분석법을 개발하였다. 이 방법은 RP-HPLC 결과와 매우 비례적으로 상관적인 결과를 보였다. 이 colorimetric 분석법을 사용하여, 폐수에서 한천 고체배지에서 7회에 걸친 스크리닝으로 높은 농도의 2,4-DCP(1000 ppm)에서 생존하는 균주를 스크리닝하였고 선별된 이들 균주들은 탄소원으로 2,4-DCP 만을 대사할 수 있으며 높은 peroxidase 생산량을 보였다. 분리된 균주들 중 높은 peroxidase 활성을 가지는 2,4-DCP 분해 균주를 분리하였고 최종 분리된 균주는 염색폐수의 COD를 4시간 동안 44%에서 61%까지 제거하였다. 상기의 결과에 의해 본 연구에서 개발된 발색법이 페놀화합물 분해 균주 스크리닝법이 빠르고 쉬운 난분해성 물질인 페놀 혼합물의 분해 균주 탐색에 대하여 성공적으로 적용될 수 있기를 기대한다.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
• /
• 한국생물공학회 2002년도 생물공학의 동향 (X)
• /
• pp.126-128
• /
• 2002

Monascus pigment-dipeptide derivatives were synthesized by Monascus in 48-well plates. Monascus pigment-dipeptides derivatives were identified as antibacterial agents. The antibacterial activities against 20strains were tested with ELISA Reader and 96-well plate.

• 농약과학회지
• /
• 제11권1호
• /
• pp.18-26
• /
• 2007

콩 검음뿌리썩음병의 방제를 위한 살균제 선발을 위하여 실내 및 온실 검정을 실시하였다. 한천희석법과 96-well microtiter plate법을 이용하여 총 25종의 살균제의 병원균에 대한 생육 억제 효과를 검정하였다. 보호용 살균제 중에서 iminoctadine을 제외한 dithianon, dichlofluanid, mancozeb, captan 등은 한천희석법에서 조사한 병원균의 생육을 억제하는 $EC_{50}$값은 $500{\mu}g\;mL^{-1}$ 이상으로 효과가 매우 낮았지만, 96-well microtiter plate법에서는 4.65, 0.61, 4.64, $0.29{\mu}g\;mL^{-1}$로, 병원균의 포자 발아에 대하여 매우 높은 활성을 보였다. 그러나 ergosterol 생합성을 저해하는 살균제 (EBI) 그룹은 물질에 따라 매우 다른 살균활성을 보였다. Difenconazole의 경우에는 균사생육보다는 포자발아 억제활성이 높았고, prochloraz의 경우에는 균사 생육활성과 포자 발아억제활성이 서로 유사하였다. 이에 비하여 다른 EBI 살균제들은 포자발아보다는 균사생육저해활성이 큰 것으로 나타났다. Carbendazim과 diethofencarb의 혼합제와 dazomet만이 두 가지의 실내 검정법 모두에서 우수한 효과를 보였다. Carbendazim과 diethofencarb의 혼합제를 비롯한 8종의 살균제를 선발하여 온실검정을 실시한 결과, carbendazim과 diethofencarb의 혼합제만이 병원균을 접종하기 2일 전과 후에 토양에 처리하였을 때, 75와 76.7%의 효과를 보였고, tebuconazole은 병원균을 접종하고 2일 후에 관주처리 하였을 때, 83.3%의 효과를 보였다.