We have cloned a soluble type human folate receptor(hFR type${\gamma}$) from human thymus cDNA library using the PCR amplification technique. To examine whether hFR type${\gamma}$ has a folate transport activity, CHO cells were transfected with the pcDNAhFR${\gamma}$ expression plasmid, and the stable cell line CHO/hFR${\gamma}$ expressing a high level of the hFR type${\gamma}$ was identified by northern and western blot analysis. The CHO/hFR${\gamma}$ cells produced a [$H^3$]folic acid binding protein in the culture medium. However, we couldn't detect any cell surface [$H^3$] folic acid binding and transport activities. The growth of the CHO/hFR${\gamma}$ cells was more rapidly inhibited than the wild type CHO cells in the low concentration folic acid media. These observations indicate that although soluble type human folate receptor can bind [$H^3$]folate, it does not involve in folate transport.
This study was aimed to select useful mutants of rapeseed (Brassica napus L.) and leaf mustard (Brassica juncea L.), the seeds of three lines S-14, S-27, and S-28 were treated with gamma-ray and EMS. The optimum ranges of gamma-ray dose and EMS concentration to enlarge the characteristic morphological variations were also separately investigated. The survival rates of S-28 only linearly decreased with increasing the gamma-ray dose. The overall growth parameters decreased of gamma-ray dose in all three lines of S-14, S-27, and S-28. The reduction dosage 50 of gamma-ray was identified as 1,200 Gy for S-14 leaf mustard, while those of S-27 and S-28 rapeseed lines were appeared as same 1,000 Gy. The emergence rates of S-14 and S-27 showed no significant differences by EMS treatment, while the growth of all three lines were significantly decreased. The reduction concentration 50 in S-14 could not be determined, demonstrating that this leaf mustard line is presumably insensitive to mutagenic EMS, while those in S-27 and S-28 were identified as 3.0 and 2.5%, respectively, showing that these rapeseed lines possess higher sensitivity to EMS than S-14. Various morphological characteristics of $M_1$ generation obtained from mutagen treatment were elaborately investigated for further maintenance of $M_2$ generation. In $M_2$ generation variants showing short stem, yellow color in seed coat, chlorophyll deficiencies in leaf or pod, abnormal flower color were selected as potentially useful mutants for breeding.
우유 단백질인 ${\gamma}$- 카제인 유전자는 여러 호르몬들에 의해서 임신기간과 비유기기간 동안에 동물의 유선조직에서 발현되는 카제인 유전자 집단의 하나이다. 우유 단백질 유전자의 유도를 조절하는 호르몬에 관한 메커니즘 설명으로 생쥐 ${\gamma}$- 카제인 유전자가 분석되었고 특성을 밝혔다. ${\gamma}$- 카제인 유전자는 박테리오파지 EMBL 3벡터에 삽입된 제놈 도서관으로부터 ${\gamma}$- 카제인 cDNA를 probe로 사용하여 스크린하여 하나의 클론을 얻었다. ${\gamma}$- 카제인 cDNA를 probe는 부분적으로 염기배열을 밝혔으며 ATC 개시 암호와 5'-noncoding 부위를 포함하고 있다. 클론된 제놈 DNA는 제한효소 Sal I에 의해서 ENBL 3벡터로부터 분리 되었다. 3개의 DNA밴드들을 관찰할 수 있었다. 각각의 크기는 28Kb, 14Kb 그리고 9Kb 이다. 따라서 삽입된 DNA의 크기는 대략적으로 23Kb 이다. Southern blot 분석 결과, 클론된 제놈 DNA는 cDNA 5' 발단 부위를 합성한 oilgonucleotides(40 mer)와는 결합되지 않음을 보여주고, 그러나 ${\gamma}$- 카제인 cDNA와는 결합되는 것을 보여 준다. Pormoter 부위를 포함하는 ${\gamma}$- 카제인 제놈 DNA는 cDNA 5' 말단 부위의 합성된 probe에 의해서 생쥐 제놈 도서관으로 부터 스크린하여 현재 29개의 클론을 얻었다.
연구배경: Mycobacteria 배양액 여과 단백질은 결핵에 대한 세포성 면역반응 및 진단 연구에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 새로운 결핵균 특이 유전자를 클로닝하여 약 14-kDa의 결핵균 재조합 단백질(TB-14)을 분리 정제 한 뒤 전혈 배양(whole blood culture)을 통해 재조합 단백질 항원의 자극에 따른 IFN-${\gamma}$ 분비 유도를 PPD와 비교 측정하여 TB-14 단백질이 결핵균에 대한 숙주의 세포성 면역반응 유도에 어떤 역할을 하는 지를 알아보고자 하였다. 방 법: M. avium 배양 여과액에서 항혈청과 강하게 반응하는 하나의 M. avium 특이 단백질을 확인하여 아미노산 서열을 규명한 뒤 이 단백질과 높은 상동성을 나타내는 M. tuberculosis 유전자를 클로닝하여 다량의 결핵균 재조합 단백질(TB-14)을 분리 정제하였다. 재조합 단백질 TB-14에 대한 세포성 면역 반응 유도를 알아보기 위해 결핵 환자(9명), PPD 양성 정상인(7명) 및 PPD 음성 정상인(7명)들로부터 얻은 전혈(whole blood)를 RPMI로 희석한 뒤 $10{\mu}g$의 PPD와 TB-14 단백질로 48 시간 동안 자극하여 상층액에 분비된 IFN-${\gamma}$ 농도를 ELISA로 측정하였다. 결 과: 1. M. avium LR114F 균주의 배양 여과액 내에서 M. intracellulare 항혈청에 강하게 반응하는 새로운 M. avium 특이 단백질을 규명하여 아미노산 서열을 확인하였다. 2. M. avium 특이 단백질과 상동성을 보이는 M. tuberculosis 특이 재조합 단백질인 TB-14은 148개의 아미노산으로 구성되어 있고 30개의 아미노산으로 이루어진 signal peptides를 가지며 M. avium과 78%의 상동성을 보였다. 3. PPD 양성인의 전혈 배양에서 TB-14 단백질 항원으로 자극된 군에서 PPD로 자극된 군보다 월등히 높은 IFN-${\gamma}$ 분비를 나타내었다. 반면 결핵환자에서는 질환의 양상이나 치료 정도에 따라 IFN-${\gamma}$의 분비 양상이 일정하지 않았다. 결 론: 새로운 결핵균 특이 재조합 단백질 TB-14는 결핵에 대한 인체 내 세포성 면역반응 유도에 중요한 역할을 할 수 있는 단백질이라 생각되며 특히 PPD 양성자에서 높은 IFN-${\gamma}$의 분비 양상을 보여 정상인과 결핵 감염자의 감별진단에도 활용될 수 있으리라 생각된다. 또한 TB-14 단백질에 대한 항혈청을 제작하여 환자의 가검물에 분비되는 결핵균 특이 단백질을 탐색하는 결핵의 진단 연구에도 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
Tsai, Hung-Chin;Chen, Yu-Hsin;Yen, Chuan-Min;Chung, Li-Yu;Wann, Shue-Ren;Lee, Susan Shin-Jung;Chen, Yao-Shen
Parasites, Hosts and Diseases
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제57권3호
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pp.249-256
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2019
Steroids are commonly used in patients with eosinophilic meningitis caused by A. cantonensis infections. The mechanism steroids act on eosinophilic meningitis remains unclear. In this mouse experiments, expressions of 14-3-3 isoform ${\beta}$ and ${\gamma}$ proteins significantly increased in the CSF 2-3 weeks after the infection, but not increasedin the dexamethasone-treated group. Expression of 14-3-3 ${\beta}$, ${\gamma}$, ${\varepsilon}$, and ${\theta}$ isoforms increased in brain meninges over the 3-week period after infection and decreased due to dexamethasone treatment. In conclusion, administration of dexamethasone in mice with eosinophilic meningitis decreased expressions of 14-3-3 isoform proteins in the CSF and in brain meninges.
Ectopic expression of $14-3-3{\zeta}$ has been found in various malignancies, including lung cancer, liver cancer, head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC), and so on. However, the effect of $14-3-3{\zeta}$ in the regulation of interactions between tumor cells and the immune system has not been previously reported. In this study, we aimed to investigate whether and how $14-3-3{\zeta}$ is implicated in tumor inflammation modulation and immune recognition evasion. In oral squamous cell carcinoma (OSCC) cell lines and cancer tissues, we found that $14-3-3{\zeta}$ is overexpressed. In OSCC cells, $14-3-3{\zeta}$ knockdown resulted in the up-regulated expression of inflammatory cytokines. In contrast, $14-3-3{\zeta}$ introduction attenuated cytokine expression in human normal keratinocytes and fibroblasts stimulated with interferon-${\gamma}$ (IFN-${\gamma}$) and lipopolysaccharide (LPS). Furthermore, supernatants from $14-3-3{\zeta}$ knockdown OSCC cells dramatically altered the response of peritoneal macrophages, dendritic cells and tumor-specific T cells. Interestingly, Stat3 was found to directly interact with $14-3-3{\zeta}$ and its disruption relieved the inhibition induced by $14-3-3{\zeta}$ in tumor inflammation. Taken together, our studies provide evidence that $14-3-3{\zeta}$ may regulate tumor inflammation and immune response through Stat3 signaling in OSCC.
The present study demonstrates the effect of fibrates, agonists of $PPAR{\alpha}$ on cytokines-induced proliferation in primary cultured astrocytes. Alone or combination treatment with cytokines, such as IL-$1{\beta}$ (10 ng/ml), $IFNP{\gamma}$ (10 ng/ml), and TNF-$\alpha$ (10 ng/ml) cause a significant increase of cell proliferation in a time-dependent manner. Treatment of astrocytes with bezafibrate and fenofibrate (0, 5, and $10\;{\mu}M$) reduced the $IFNP{\gamma}$ and IL-$1{\beta}$-induced cell proliferation in a dose-dependent manner. To address the involvement of IL-6 on the $IFNP{\gamma}$ and IL-$1{\beta}$-induced cell proliferation, released IL-6 level was measured. $IFNP{\gamma}$ and IL-$1{\beta}$ cause an increase of released IL-6 protein level in a time-dependent manner. Furthermore, pretreatment with IL-6 antibody (0, 0.1, 1, 2.5, and 5 ng/ml) dose-dependently inhibited the $IFNP{\gamma}$ and IL-$1{\beta}$-induced cell proliferation. However, bezafibrate and fenofibrate did not affect increased mRNA and protein levels of IL-6 in $IFNP{\gamma}$ and IL-$1{\beta}$-stimulated astrocytes. Taken together, these results clearly suggest that activation of $PPAR{\alpha}$ attenuates the $IFNP{\gamma}$ and IL-$1{\beta}$-induced cell proliferation through IL-6 independent pathway.
본 연구에서는 $3mm{\times}3mm{\times}2mm$, $3mm(Dia){\times}15mm$, $3mm(Dia){\times}20mm$, $10mm(Dia){\times}20mm$. YSO 섬광체와 광전자증배관을 결합하여 검출기를 제작하였다. 또한 10mm의 지름을 가진 섬광체는 LightTools를 이용하여 최적화한 광가이드와 결합하였다. 광가이드의 두께는 2mm이며 입사부는 섬광체 크기와 같은 10mm이고 출사부는 다른 섬광체와 같은 3mm이다. 제작된 검출기는 표준 감마선원인 $^{137}Cs$를 이용하여 분광 특성을 분석하였다. 그 결과 662keV에서 각각의 에너지 분해능이 14.46%, 21.10%, 10.71%, 나왔으며 10mm의 지름과 20mm의 길이를 가진 섬광체에 광가이를 결합한 섬광체가 7.48%로 분해능이 가장 좋게 나왔다.
We investigate the upper critical field anisotropy ${\Gamma}_H$ and the magnetic penetration depth anisotropy ${\Gamma}_{\lambda}$ of a high-quality $FeSe_{1-x}$ single crystal using angular dependent resistivity and torque magnetometry up to 14 T. High quality single crystals of $FeSe_{1-x}$ were successfully grown using $KCl-AlCl_3$ flux method, which shows a sharp superconducting transition at $T_C{\sim}9K$ and a high residual resistivity ratio of ~ 25. We found that the anisotropy ${\Gamma}_H$ near $T_C$ is a factor of two larger than found in the poor-quality crystals, indicating anisotropic 3D superconductivity of $FeSe_{1-x}$. Similar to the 1111-type Fe pnictides, the anisotropies ${\Gamma}_{\lambda}$ and ${\Gamma}_H$ show distinct temperature dependence; ${\Gamma}_H$ decreases but ${\Gamma}_{\lambda}$ increases with lowering temperature. These behaviors can be attributed to multi-band superconductivity, but different from the case of $MgB_2$. Our findings suggest that the opposite temperature dependence of ${\Gamma}_{\lambda}$ and ${\Gamma}_H$ is the common properties of Fe-based superconductors.
Nanoparticles of $Fe_2O_3$ with a mean particle size of 4-30 nm have been prepared by a pulsed wire evaporation method, and its structural and magnetic properties were studied by SQUID magnetometer and Mossbauer spectroscopy. From the main peak intensity of XRD and absorption rate of Mossbauer spectrum, the amounts of $\gamma-Fe_2O_3$ and $\alpha-Fe_2O_3$ in as-prepared sample are about 70% and 30%, respectively. The coercivity (53 Oe) and the saturation magnetization (14 emu/g) are about 20% of those of the bulk $\gamma-Fe_2O_3$. The low value of coercivity and saturation magnetization indicate that the $\gamma-Fe_2O_3$ phase nearly shows the spin glass-like behavior. Analysis of the set of Mossbauer spectrum indicates a distribution of magnetic hyperfine fields due to the particle size distribution yielding 20 nm of average particle size. The magnetic hyperfine parameters are consistent with values reported of bulk $\gamma-Fe_2O_3$ and $alpha-Fe_2O_3$. A quadrupole line on the center of spectrum represents of superparamagnetic phase of $\gamma-Fe_2O_3$ with a mean particle size of 7 nm or below.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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