Background: Cytokine-mediated ex vivo expansion has been proposed as a means of increasing the number of cord blood (CB) hematopoietic stem cells for transplantation. As well as stem cell number, stromal cells are necessary for functional maturation of hematopoiesis. The purpose of this study was to analyze the development of stromal cells during ex vivo expansion of CB $CD34^+$ cells. Methods : $CD34^+$ cells were purified from CB by magnetic bead selection. The levels of of interleukin-3, interleukin-$1{\beta}$, interleukin-6, granulocyte macrophagecolony stimulating factor and tumor necrosis factor-${\alpha}$ were measured in culture supernatants on 0, 1, 2, and 3 weeks, using ELISA techniques. CB $CD34^+$ cells were expanded in Iscoves modified Dulbeccos medium in the presence of several cytokines. The expression of E-selectin, vascular cell adhesion molecule-1, intercellular adhesion molecule-1, platelet/endothelial cell adhesion molecule-1, von Willebrand factor, vimentin, and CD14 in newly developed stromal cells was examined by immunocytochemical method. Relevant extracellular matrix (ECM) proteins and proper cytokines were also assayed for the most suitable condition for expansion of stromal cells. Results: Several cytokines were found to have been produced by CB $CD34^+$ cells as well as bone marrow-derived $CD34^+$ cells. During ex vivo expansion of CB $CD34^+$ cells, stromal cells appeared in the culture by day 4 and expanded over the following 7-10 days before being confluent by day 2 1. These cells expressed surface markers characteristic of cells of endothelial lineage. Furthermore, these stroaml cells also expanded effectively when treated with thrombopoietin+flt-3 ligand+stem cell factor+leukemia inhibitory factor or 0.1% poly-L-lysine-coated wells. Conclusion: Stromal cells were developed during ex vivo expansion of CB $CD34^+$ cells and that this development could be enhanced further by treating the stromal cells with cytokines or ECM.
Lee, Jung Hyun;Lee, Bo Lyun;Lee, Soo Hyun;Yoo, Keon Hee;Sung, Ki Woong;Jung, Hye Lim;Cho, Eun Joo;Koo, Hong Hoe
Clinical and Experimental Pediatrics
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v.49
no.10
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pp.1079-1085
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2006
Purpose : The purpose of this study was to evaluate factors affecting hematologic recovery and infection in high-dose chemotherapy(HDCT) and autologous stem cell transplantation(ASCT) in patients with high-risk solid tumor. Methods : From January 2004 to December 2005, 72 HDCTs and ASCTs were applied to children with high-risk solid tumor at Samsung Medical Center. Medical records of these 72 HDCTs and ASCTs were retrospectively analyzed. Results : The single most powerful predictor of neutrophil and platelet recovery was the number of transplanted $CD34^+$ cells. The duration of high fever was significantly longer in young patients, in patients treated with total body irradiation and/or thiotepa, and in patients transplanted with lower $CD34^+$ cell dose(<$2{\times}10^6/kg$). However, the difference in the duration of high fever according to the number of $CD34^+$ cells was not clinically significant. Conclusion : Findings in this study suggest that HDCT and ASCT with low $CD34^+$ cell dose is clinically feasible despite delayed hematologic recovery, especially at a dose >$1{\times}10^6/kg$ per transplantation. Therefore, it is important not to defer the appropriate time for HDCT for an additional collection of hematopoietic stem cells if the number of collected $CD34^+$ cells is >$1{\times}10^6/kg$ per transplantation.
Objective : Increasing in frequency and success of hematopoietic stem cell transplantation and improved survival rates have led to growing concerns regarding the psychosocial aspects of hematopoietic stem cell transplantation recipients. In this study, we have examined the stress coping strategies and related psychiatric symptom in the hematopoietic stem cell transplantation recipients. Methods : In this study, we examined the psychological stress symptoms of hematopoietic stem cell transplantation recipients and differences of psychosocial variables between active coping group and passive coping group. Twenty nine recipients of hematopoietic stem cell transplantation were recruited prospectively and assessed at 2 weeks pretranplant and at 1-2 days posttranplant. Thirty normal controls were recruited. Assessments included a psychiatric interview, a variety of standardized questionnaires (Ways of Coping Questionnaires, Perceived Stress Scale, Hospital Depression and Anxiety Scale, Short-Form 36 Health Survey). Results : Hematopoietic stem cell transplantation patients showed higher degree of depression (p<0.001) and anxiety (p=0.011) symptoms than normal control group. However, no differences of depression and anxiety symptoms between pretransplant and posttransplant status were showed. And, passive coping group showed higher degree of depression (p=0.046) and anxiety symptoms (p<0.001) than active coping group. Conclusions : Our results suggested that many hematopoietic stem cell transplantation recipients would exhibit severe to moderate symptoms of anxiety and depression. Also, it seemed likely that passive coping style might influence the development of negative affect such as anxiety and depression. The implications of these findings were discussed in terms of the need to monitor the coping strategies and apply the appropriate psychiatric intervention. And, further prospective studies about long-term survival and psychological adaptive functions of hematopoietic stem cell transplantation patients are recommended.
Efficient gene transfer into hematopoietic stem cells is a great tool for gene therapy of hematopoietic disease. Retrovirus have been extensively used for gene delivery and gene therapy. However, current in vitro gene transfer has some obstacles suck as induction of differentiation loss of self-renewal capacity, and down-regulation of homing efficiency for in vitro hematopoietic stem cells transplantation. To overcome these problems, we developed efficient in vitro retroviral transfer technique by direct intra-bone marrow injection (IBM). We identified effective retrovirus gene transfer in bone marrow hematopoietic cells in vitro. Two weeks after retrovirus transfer via IBM injection, we observed stable EGFP gene expression in bone marrow, lymph node, spleen, and liver cells. In addition, $6.4{\pm}2.7%$ of hematopoietic stem/progenitor cells were expressed EGFP transgene from flow cytometry analysis. Our results demonstrate that in vitro retrovirus gene transfer via IBM injection can provide a viable alternative to current or moo gene transfer approach.
Purpose: The purpose of this study was to compare Quality of life (QOL) in type and time after Hematopoietic stem cell tansplantation (HSCT) for patients with hematologic cancer. Method: This study was cross-sectional. The autologous recipients was 120, the allogeneic recipients was 237. The obtained data were analyzed using T-test, One-way ANOVA, Scheffe's test. Results: No significant differences were total QOL between the autologous and allogeneic recipients. But the autologous recipients reported better status than the allogeneic recipients in physical domain, especially 1-3 yr after HSCT. There was poorer QOL of 1-3 yr compared to 1 yr after HSCT in physical, psychological and social domain between the two groups. QOL in time after HSCT of the autologous recipients was significance differences in psychological, social domain. And QOL in time after HSCT of the allogeneic recipients was significant differences in physical, psychological and social domain. Conclusions: QOL of recipients undergoing HSCT is recovered beyond 3 yr point. Accordingly, long term care and service is essential to recipients undergoing HSCT. And further studies with a longitudinal design are necessary.
Purpose: Objectives of this study was to investigate the level of anxiety and depression according to the stages of autologous and allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). It would be provide the basis for effective psycho-emotional nursing intervention. Methods: We report on 52 patients, including 19 with autologous HSCT, and 33 with allogeneic HSCT from August 2002 to August 2003, at a university hospital. Spielberger's State-Trait Anxiety Inventory and Jung's Depression Inventory were used to measure levels of anxiety and depression, respectively, at admission time, the day before HSCT, and discharge time. Data was analyzed using SAS program that included Chi-square test, Fisher's exact test, repeated measures ANOVA and Stepwise multiple regression analysis. Results: In all stages of HSCT, the level of anxiety of patients who underwent allogeneic HSCT was significantly higher than that of autologous HSCT (P=0.047). The depression at the day before HSCT was significantly higher than that at admission. The major variable affecting anxiety in autologous HSCT was depression. Specially depression and gender were significant predictors to explain anxiety in allogeneic HSCT at admission time (61%). Experience of relapse and gender were significant predictors to explain anxiety in allogeneic HSCT at discharge time (36%). Conclusion: We recommend that the anxiety and depression be researched during the stages of allogeneic HSCT, specifically in the day before HSCT. It is necessary to develop an effective psycho-emotional nursing intervention according to the stages of HSCT.
Objectives: The object of this study is to observe the possible ameliorating effects of Nokyongdaebo-tang (NYDBT) on the experimental subacute hemorrhagic anemia (SHA) in rats. Methods: In the present study, SHA in rats was induced by exsanguinations from orbital plexus, and ameliorating effects of NYDBT was observed based on the changes of body and hematopoietic organ (spleen, liver and femur) weights, red blood cell (RBC) related hematological values, smear cytology, histopathological changes and immunohistochemistrical analysis of hematopoietic stem cells in the femur bone marrow, liver and spleen. In addition, the gastrointestinal motility and the surface mucosa thicknesses of remnant fecal pellets in the colon lumen, mucosa thicknesses and the mucous producing cell numbers in the colonic mucosa were analyzed to observe the digestive disorders, especially on the constipation, the major discomfort problems in iron supplement. Results: SHA related abnormal anemic signs were markedly and dose-dependently inhibited by oral administration of NYDBT 500, 250 and 125 mg/kg in a condition of this experiment. In addition, no meaningful changes on the gastrointestinal motilities and mucous component on the colon and remnant feces were noticed in all three different dosages of NYDBT treated rats as compared with intact vehicle and SHA control rats in this study. Conclusions: It, therefore, is expected that NYDBT will be promising as a novel alternative hematopoietic and therapeutic agent for anemia.
Cord blood is a useful source of allogeneic hematopoietic stem cells for bone marrow reconstitution. The number of umbilical cord blood transplants is increasing worldwide. In this a case 15-month-old boy with acute myeloid leukemia was treated with umbilical cord blood transplant from an HLA-3 loci mismatched unrelated donor. Granulocyte recovery greater than $500/mm^3$ occurred at day 49, and the platelet recovered greater than $20,000/mm^3$ independent of transfusion at day 81 after stem cell infusion.
This study compared cell expansion and colony forming ability in human cord blood stem cells cultured ex vivo with two kinds of cytokine combinations, two kinds of media, presence or absence of fetal bovine serum (FBS) and two or three dimensional (2D or 3D) culture environments. Purified $CD34^+$ cells were cultured in the IMDM (Iscove's Modified Dulbecco's Medium) and SFM (Serum Free Medium) containing a cytokine cocktail-I (coc-I) (EPO, GMCSF, SCF, and IL-3) or a cytokine cocktail-II (coc-II) (TPO, G-CSF, SCF, IL-6, and Flt3/Flk-2 ligand) with or without FBS. Generally, higher cellular and clonogenic expansion were observed in the coc-I cytokine condition, compared to coc-II cytokine condition. 3D (Methocult) and 2D (IMDM + coc-I + FBS) conditions gave the greatest cell ($2,258{\pm}456$ fold) and CFU (BFU-E: $652{\pm}19$, CFU-GM: $520{\pm}58$, CFU-GEMM: $339{\pm}100$ fold) expansions, respectively. In aspect of medium, IMDM was better than SFM, except for coc-II condition without FBS. In conclusion, 'IMDM + coc-I + FBS' and 'IMDM + coc-I' were the best CFU expansions on the occasion of all culture conditions. FBS and 2D conditions had affirmative effect on CFU expansion, generally. These data might provide a variety of notions about ex vivo expansion of hematopoietic stem cells.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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