수용성 키토산의 농도와 가교제 (글루타알데히드)의 양을 변화시키면서 미네랄오일 내에서 키토산용액의 유화법에 의해 수용성 키토산 미세구를 제조하였다. 그러고 약물이 봉입되어진 수용성 키토산 미세구의 분해에 따른 형태의 변화, 약물의 봉입효율, 약물 방출 거동과 같은 물리화학적 특성을 규명하였다. Norfloxacion 이 봉입된 수용성 키토산 미세구는 표면의 약물에 의해 나타나는 과량의 약물 방출이 없는 높은 약물 봉입 함량을 보였다. 표면에 약물이 존재하지 않음을 선 회절 분석으로 확인하였다. 수용성 키토산 미세구의 분해 특성과 약물방출 거동을 관찰한 결과 가교제의 양이 약물의 봉입량, 방출, 그리고 분해에 중요한 역할을 하는 것을 확인하였다. 수용성 키토산 미세구는 가교제의 양이 증가함에 따라 분해속도가 느렸으며, 이와 동시에 약물이 천천히 방출되었음을 확인하였다.
본 발명은 키토산으로 이루어진 무수히 많은 갯수의 박막필름이 시트 평면에 수직, 수평 또는 경사 방향으로 일정간격의 공간을 유지하면서 적충되어서 라멜라구조를 형성하고 이 박막필름들이 일정한 간격으로 가지런히 나열되어 형성된 키토산 마이크로 플레이크로 이루어진 층상 격막시트에 관한 것이다. 두께 $1\mu{m}$내지 $50\mu{m}$로 라멜라구조를 이루는 키토산 박막필름이 $1\mu{m}$내지 $10000\mu{m}$의 공기간격을 두고 누적층을 형성하고 시트평면과$0^{\circ}C$내지$180^{\circ}C$사이의 일정 각도로 균일하게 배열되어 있어 수직, 수평 또는 경사방향으로 키토산 박막필름이 가지런히 배열되어 있는 키토산으로 조성된 수용성 층상 격막시트에 관한 것이다. 본 발명은 키토산을 약산성 액상에서 용해, 숙성 시켜 추출 고화 시키는 과정에서 수직, 수평 및 경사방향으로 키토산 마이크로 플레이크가 층상 라멜라구조를 이루는 키토산 격막시트를 형성시켜 줌으로 임상의학적 적용시 각각의 키토산 박막필름 사이의 균일한 공간으로 다양한 약물의 적용이 가능하며 특히 액상의 약재를 적용시 모세관의 원리에 따라서 약물이 원활하게 공급되는 약전성이 매우 우수하고 약물의 포집성이 획기적으로 부과된 재료로 사용될 수 있으며 키토산을 용해시켜 이용하는 산업에서 물에 신속하고 완전한 용해특성을 나타내는 키토산 원료물질로 사용될 수 있는 것이다.
본 연구에서는 유전자 전달체로 응용하기 위하여 다양한 분자량의 고순도 수용성 키토산 올리고당을 한외여과막을 이용하여 분급화 하였다. 분급화한 고순도 수용성 키토산 올리고당의 평균분자량과 분포를 측정하였고, 매우 좁은 분포를 갖는 것을 확인하였다. 고순도 수용성 키토산 올리고당의 분자량은 한외여과막에 따라 1에서 10 kDa의 범위를 가진다는 것을 젤크로마토그래피 측정을 통하여 확인하였다. 분급화된 키토산의 구조는 $^1H$ NMR과 FTIR을 통하여 구조를 확인하였고, UV를 통하여 탈아세틸화도를 측정한 결과 90% 이상의 높은 탈아세틸화도를 갖는다. 본 연구를 통하여 제조된 고순도 키토산 올리고당은 세포독성이 없고 아주 좁은 분자량 분포와 높은 순도를 갖고 있음을 확인하였다.
인간의 질병을 치료하기 위한 여러 가지 의료 시스템의 개발이 생명공학의 발전과 함께 많은 연구가 이루어지고 있다. 또한 약물이나 유전자와 같은 생리활성물질을 체내에 안전하게 전달할 수 있는 시스템의 개발과 함께 이루어지고 있다. 이러한 시스템에 있어서 가장 중요한 것은 생체적합성 및 생체분해성 그리고 무독성의 특성을 가진 생체의료용 고분자를 개발하는 것이다. 천연고분자물질인 키토산은 좋은 생체적합성과 생체활성의 특성을 가지고 있어서 생체의료용 재료로 심도 있게 고려되어지고 있다. 키토산의 물성은 키틴의 결정성 구조에 따라 다르게 설명되므로 키틴의 구조적 분석에 대한 연구가 생체재료로써의 응용을 위해서 선행되어야 한다. 이러한 관점에서 본 총설에서는 키틴의 결정성 구조 분석, 키토산의 일반적인 물성 그리고 생체의료용 재료로써 저분자량 수용성 키토산의 가능성을 소개하였다. 또한 다양한 기능성기를 이용한 저분자량 수용성 키토산의 화학적인 개질을 약물전달체로써의 가능성을 강조하고 생체이용율의 향상을 위해 수행하였다.
키틴의 탈아세틸화로 얻어지는 화합물인 키토산과 키토올리고당은 다양한 생리활성 기능을 나타내므로 생물의학적인 응용에 많은 관심이 집중되고 있다. 본 연구는 키토올리고당과 수용성 키토산의 열처리 후 올리고당 함량의 변화와 어린이 바이러스성 설사를 유발하는 HRV(human rotavirus)의 MA-104 세포감염에 억제작용을 나타내는지 확인하기 위하여 수행하였다. 그 결과 열처리 후 비색법으로 측정한 올리고당의 함량은 수용성키토산의 경우 62.67 %에서 60.45%로 약 2%정도, 키토올리고당은 59.48%에서 54.31%로 약 5%정도 감소하였다. 키토산 유래물질의 항로타바이러스성 탐색은 AEC staining으로 측정하였으며, 수용성키토산은 농도 0.125% 이상에서 HRV S2의 세포감염에 있어 90% 이상의 감염 억제효과가 있었으며, HRV Wa의 경우 89% 이상의 억제효과가 있었다. 키토올리고당은 HRV의 세포감염에 억제효과가 없었다. 열처리한 시료의 경우, 수용성 키토산과 키토올리고당 모두 열처리가 HRV의 감염 억제에 영향을 미치지 못하는 것으로 나타났다. 따라서 중합도가 높은 수용성키토산은 열처리를 거치는 식품에 첨가하여도 그 기능이 크게 감소하지 않으므로 향후 식품첨가물로서 이용가능성이 클 것으로 사료된다.
수용성 고분자인 폴리(비닐 알코올) (PVA)과 키토산에 제 4급 암모늄염을 도입하여 합성한 수용성 키토산 유도체인 N-(2-하이드록시)프로필-3-트리메틸 키토산 클로라이드 (HTCC)를 수용액 상태로 하여 용액 블렌딩하고 이를 캐스팅하여 PVA/HTCC 블렌드 필름을 제조한 후 두 고분자 사이의 혼화성과 블렌드 필름의 특성을 FT-IR, DSC, DMA 및 TGA를 사용하여 검토하였다. HTCC 함량을 50%까지 변화시킨 본 연구의 혼합 범위에서 블렌드 필름들은 모두 투명한 상태를 나타내었으며, T$_{g}$와 T$_{m}$ 이 하나로 나타나 두 고분자 사이에 혼화성이 있음을 확인하였다. 또, HTCC의 우수한 항미생물성 때문에 HTCC가 1%만 포함되더라도 블렌드 필름은 우수한 항미생물성을 나타내었다.
본 연구에서는 키틴의 알칼리 가수분해를 통해 탈아세틸화도가 조절된 세 가지 조건의 키토산을 제조하였고, 이 키토산이 수용성을 지니게 화학적 분해법을 이용해 분자량을 조절하였다. 이렇게 제조된 분자량이 조절된 세 가지 조건의 탈아세틸화도를 가지는 키토산 각각에 항산화제인 리포산을 합성하여 항산화 능력을 가지는 생체 적합성 나노 구조체를 형성하였다. 키토산-리포산의 합성을 확인하기 위하여 분광학적 분석 방법을 사용하여 분석하였다. 키토산-리포산 합성체는 수용액 상태에서 자기조립체를 형성하며 이렇게 형성된 자기조립체 나노 입자는 약 135 nm 정도의 크기를 가지고 있음을 알 수 있었다.
물에 잘 녹지 않는 고분자량의 키토산을 가수분해하여 수용성을 갖는 저분자량 키토산을 제조하였다. 키토산을 효율적인 유전자 전달체로 개발하기 위하여 항산화제의 일종인 리포산과 결합하여 빗살 형태의 공중합체를 제조하였다. 양친성을 가지는 공중합체는 수용액 상에서 자기조립을 하여 나노입자를 형성하였다. 나노입자의 평균크기는 217.6 nm이었고 유전자와 복합체를 이루었을 때의 평균크기는 170 nm로 나타났다. 새롭게 만들어진 키토산-리포산 공중합체는 낮은 세포독성을 나타내었고 순수한 키토산에 비하여 10배 정도 높은 형질 발현효율을 보여주었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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