• Journal of Periodontal and Implant Science
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• v.36 no.2
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• pp.361-373
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• 2006

치주질환의 진행이 나이에 의해 영향을 받는다는 사실은 알려져 있으나 노화에 따른 치주조직 세포의 기능적인 변화에 관한 사실은 많이 알려져 있지 않다. 노화에 따른 세포의 노화가 치주질환의 진행에 어떠한 여향을 끼치는가를 아는 것은 중요하다. 염증 상태에서 nitric oxide (NO)는 조직 파괴에 관여하는 인자로 작용하여 치주질환의 진행에 관여하는 것으로 알려져 있다. 따라서 이 연구는 사람의 치은에서 배양된 치은섬유아세포를 이용하여 세포의 노화에 따른 NO와 이의 합성효소인 inducible nitric oxide synthase (iNOS)의 발현을 알아봄으로써 세포의 노화가 치주질환의 진행에 끼치는 영향에 대해 알아보고자 하였다. 10세의 환자와 55세의 환자에서 각각 채취한 치은에서 배양된 세포와 10세의 환자에서 채취한 세포를 계속적인 계대배양을 통해 얻은 실험실 상 노화된 세포를 포함하여 총 3 종류의 치은섬유세포를 실험에 이용하였다. Hot phenol-water extraction을 통해 추출된 Porphyromonas, gingivalis ATCC 33277 lipopolysaccharide (LPS)와 재조합 $IFN-{\gamma}$ 를 세포에 적용시켜 Griess assay를 통해 조건화된 배지에서 NO를 측정하였다. 20세와 55세의 환자에서 채취된 치은 조직과 총 3 종류의 배양된 세포에 NOS-II 항체를 적용시켜 iNOS 단백질 발현을 관찰하였다. Total RNA를 추출하여 RT-PCR를 통해 iNOS mRNA의 발현을 분석하였다. 치은섬유아세포에서 NO는 자발적으로 발생되었고, 이러한 발현은 젊은 세포보다 노화된 세포에서 강하였다. P, gingivalis LPS와 제조합 $IFN-{\gamma}$는 치은섬유아세포에서 NO의 발현을 증가시켰고, 이러한 발현은 젊은 세포보다 노화된 세포에서 강하였다. 면역조직화학 염색에서 iNOS 단백질은 젊은 사람과 노화된 사람의 치은 조직 모두에서 치은섬유아세포와 상피의 기저층 세포와 염증세포에서 발현되었으나 노화에 따른 발현의 차이를 구별할 수는 없었다. 세포의 면역염색에서 iNOS 단백질은 노화된 세포에서 강하게 발현되었고 이러한 발현은 LPS와 $IFN-{\gamma}$ 에 의해 강화되었다. LPS와 $INF-{\gamma}$ 의 조건이 주어지지 않은 상태에서 iNOS mRNA는 젊은 세포에서보다 노화된 세포에서 강하게 발현되었다. 이러한 결과를 통해 세포의 노화가 NO와 iNOS 발현을 증가시킴으로서 치주질환의 진행에 영향을 끼칠 수 있음을 시사하였다.

• Journal of Chest Surgery
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• v.38 no.4 s.249
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• pp.263-270
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• 2005

In recent years, a combination of two demographic phenomena, an increased number of older people in the population and an increase in the incidence of lung cancer with age, has made it mandatory to develop therapeutic modalities with less toxicity for the treatment of inoperable elderly patients with lung cancer. Therefore, we investigated the correlation between COX-2 expression and cytotoxicity of Nimesulide, a specific COX-2 inhibitor. Material and Method: Immunohistochemical staining of COX-2 was performed. After exposure of Nimesulide, XTT analysis, FACS analysis and Hoechst staining were carried out. Result: COX-2 protein was expressed in non-treated A549 cells strongly, but not in H1299. Cytotoxicity of Nimesulide against A549 cell and H1299 cell were similar and $IC_{50}$ of Nimesulide in both cell lines were $70.9{\mu}M$ in A549 cell line and $56.5{\mu}M$ in H1299 cell line respectively. FACS analysis showed $G_0/G_1$ arrest in both cell lines and the S phase cell fraction was decreased. Morphologic assessment of apoptosis by Hoechst 33258 staining, many apoptotic cells were detected in both cell lines. Conclusion: Selective COX-2 inhibitor, Nimesulide, can inhibit the proliferation of non-small cell lung cancer cell lines in vitro. Inhibitory effect of Nimesulide are induction of apoptosis and $G_0/G_1$ arrest. There is no correlation between COX-2 expression and cytotoxicity of Nimesulide, a specific COX-2 inhibitor. Therefore, highly selective COX-2 inhibitors such as Nimesulide can be expected to lead to even greater efficacy of their use as adjuncts to various anticancer angents and radiation therapy for the treatment of high-risk patients.

• Radiation Oncology Journal
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• v.17 no.2
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• pp.158-165
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• 1999

Purpose : To investigate the percentage of colonies wi1h16or more cells distribution of human skin fibroblast according to in vitro aging, and to evaluate the relationship between percentage of colonies with 10 or more cells and in vivo donor age in human skin fibroblast culture. Material and Method : C1, C2, C3a, and C3b human skin fibroblast samples from three breast cancer patients were used as subjects. The C1, C2, and C3a donor were 44, 54, and 55 years old, respectively. C3a and C3b cells were isolated from the same person. Single cell suspension of skin fibroblasts was prepared with primary explant technique. One hundred cells are plated into 100m1 tissue culture flask and cultured for two weeks. The colony size was defined as colonies with 16 or more cells. The cultured cell was stained with crystal violet, and number of cells in each colony was determined with stereo microscope at $\times$10 magnification. Passage number of C1, C2, C3a and C3b skin fibroblast were 12th, 17th, and 14th, respectively. Results : Percentage of colonies with 16 or more cells of skin fibroblast samples decreased with increasing in vitro passage number. In contrast, cumulative population doublings of skin fibroblast sample increased with increasing in vitro passage number. Percentage of colonies with 16 or more cells also decreased with increasing population doublings in human skin fibroblast culture. There was strong correlation with percentage of colonies with 16 or more cells and population doublings En C3a skin fibroblast sampie. At the same point of population doublings, the percentage of colonies with 16 or more cells of the young C1 donor was higher level than the old C3a donor. Conclusion : The population doublings increased with increasing in vitro passage number but percentage of colonies with 16 or more cells decreased. The results of this study imply that percentage of colonies with 16 or more cell is useful as a indicator of in vitro human skin fibroblast aging and may estimate the in vivo donor age.

• Proceedings of the Korean Aquaculture Society Conference
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• 2003.10a
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• pp.84-85
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• 2003

조개류의 먹이생물인 미세조류를 대체할 수 있는 효모를 개발하기 위하여 빵효모 (Saccharomyces cerevisiae), Candida utilis, Klyveromyces fragilis 3종류의 효모를 대상으로 그 먹이효율을 실험하였다. 이들 3종류의 효모를 세포벽을 75, 50, 25% 제거한 것과 세포벽을 제거하지 않은 효모로 구분하여 Artemia를 대상으로 먹이효율을 조사한 후 가장 좋은 먹이효율을 보인 C. utilis를 조개류의 대표적 먹이생물인 Isoch교sis galbana 와 함께 진주담치 유생을 대상으로 먹이효율을 조사하였다. Artemia 실험결과 빵효모보다 C. utilis, K. fragilis가 높은 생존율과 성장을 보였으며 세포벽을 제거한 것이 제거하지 않은 것보다 유의적으로 높은 생존율을 보였다. Artemia의 생존율은 75%와 50% 세포벽을 제거한 것이 25%에 비해 유의적으로 높은 생존율을 보였다. 성장은 유의적이지는 않지만 전체적으로 세포벽을 많이 제거할수록 성장과 생존율은 높은 경향이었다. 이와같이 Artemia의 경우는 세포벽을 제거한 C. utilis가 더 좋은 먹이효율을 보인 것은 Artemia는 효모의 세포벽을 소화시키지 못하기 때문으로 판단 할 수 있다. 진주담치 유생의 먹이로 C. utilis를 공급한 경우 성장에 있어서 세포벽을 제거한 효모를 50% 대체한 실험구의 먹이효율이 가장 좋았으며 세포벽을 벗기지 않은 효모의 경우 I. galbana에 비해 낮은 결과를 보였다. 진주담치 유생에 있어서도 세포벽을 제거한 C. utilis를 공급한 것은 대조구인 I. galbana와 생존율에 있어 유의성이 없었다. 그리고 25% 세포벽을 제거한 것을 공급한 실험구는 유의적으로 낮은 생존율을 보였다. 각장 성장의 경우 75% 세포벽을 제거한 것은 대조구인 I. galbana와 유의성이 없었다. 세포벽을 제거한 C. utilis와 I. galbana를 1:1로 혼합하여 공급한 실험의 경우 생존율에 있어서는 세포벽을 50%, 75% 제거한 C. utilis를 50% 첨가한 실험구는 대조구인 I. galbana 100%를 공급한 것과 유의적인 차이가 없었다. 그러나 성장의 경우는 I. galbana 에 세모벽을 75% 제거한 C. utilis를 1:1로 혼합한 실험구에서 각장 179.3 $\mu\textrm{m}$, 각고 150.3 $\mu\textrm{m}$로 가장 높았고 대조구인 I. galbana 100%와는 유의적인 차이를 보였다.

• Journal of Life Science
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• v.20 no.4
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• pp.519-527
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• 2010

Paclitaxel is known as a potent inhibitor of microtubule depolymerization. It leads to mitotic arrest and cell death by stabilizing the spindle in various cell types. Here, we investigated the effects of paclitaxel on the proliferation and cell death of rabbit articular chondrocytes. Paclitaxel inhibited proliferation in a dose- and time- dependent manner, determined by MTT assay in rabbit articular chondrocytes. We also established paclitaxel-induced G2/M arrest by fluorescent activated cell sorter (FACS) analysis. Paclitaxel increased expression of cyclin B, p53 and p21, while reducing expression of cdc2 and cdc25C in chondrocytes, as detected by Western blot analysis. Interestingly, paclitaxel showed the mitotic catastrophe that leads to abnormal nucleus division and cell death without DNA fragmentation through activation of caspase. Cell death by mitotic catastrophe in cells treated with paclitaxel was suppressed by inhibiting G1/S arrest with 2 mM thymidine. These results demonstrate that paclitaxel induces cell death via mitotic catastrophe without activation of casepase in rabbit articular chondrocytes.

• Proceedings of the Korean Society of Embryo Transfer Conference
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• 2002.11a
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• pp.70-70
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• 2002

형질전환 가축을 생산하기 위하여 최근 체세포 복제 기법을 이용하고 있다. 이러한 체세포를 이용한 형질전환 동물의 생산에는 체세포내에 유전자의 도입 효율이 직접적인 영향을 주게 된다. 따라서 본 연구는 세포내 유전자의 transfection 효율을 높이고자 한우의 체세포를 이용하여 여러 가지 조건에서 유전자 도입을 실시하였다. 세포내 유전자 도입 방법은 electroporation (EP) 방법을 이용하였다. 사용한 세포는 소의 귀세포(KbESF), 태아섬유아세포 (KbFF), 그리고 대조구로서 CHO cell을 이용하여 GFP 유전자를 도입하였다. EP는 0.4 cm cuvette을 사용하였고, voltage는 0.25 kV, 그리고 field strength 는 0.625 kV/cm 조건으로 실시하였으며, pulse times은 각각 1, 2, 또는 3회를 사용하였다. KbFF와 KbESF에서는 각각 pulse times을 증가시킬수록 유전자도입 세포수가 증가하였으나 (KbFF: 81, 634, 1,065 cells/$10^{6}$ cells, KbESF: 1,011, 5,567, 15,408 cells/$10^{6}$ cells), CHO cell에서는 pulse times을 증가시킬 수록 오히려 유전자도입 세포수가 감소하였다 (CHO: 1,591, 687, 297 cells/$10^{6}$ cells). 그리고 2주 동안 neo selection을 실시 한 결과 KbFF, KbESF, CHO에서 각각 93, 35, 184 colony가 선발되었으며, 이 중 65.6%, 8.6%, 4.3% 가 GFP 형광 발현 colony로 나타났다. 한편 CHO cell에서 transfection cell수가 감소된 것은 EP의 자극으로 인해 손상된 세포가 많이 발생한 것으로 나타났다. 또한 neo selection에서 선발된 colony중 GFP가 발현되지 않거나 일부만 발현되는 colony들이 많이 발생하였는데, 이것은 세포내 유전자가 transfection되지 않은 세포도 neo selection에서 선발된다는 것을 제시하고 있다. 따라서 체세포를 이용한 형질전환동물 생산을 위해서는 세포내 유전자 도입과 선발 과정에서 나타난 colony에 대하여 보다 엄격한 screen을 하는 것이 필요한 것으로 생각된다.

• Proceedings of the Korean Vacuum Society Conference
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• 2012.02a
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• pp.558-558
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• 2012

최근의 원자간력현미경(AFM)은 soft한 생체물질을 비파괴적 방법 및 나노크기의 분해능으로 여러 구조적, 물리적 특성 측정이 가능하여 bio분야에 다양이 활용되고 있다. 본 연구에서는 AFM을 이용하여 줄기세포인 BM MSC(bone marrow mesenchymal stem cell)가 신경세포로 분화 여부를 측정하는 방법을 보고하고자 한다. 신경세포의 신호전달은 시냅스에서 신경전달물질을 매개로 하여 이루어지는데, 신경전달물질 중에 D-Glutamic acid는 시냅스후세포에서 흥분성 전위 크기를 증가시킨 상태를 장기간 유지시켜주는 물질로, 특정물질인 Glutamate와 항원-항체 결합을 한다. 본 연구에서는 이 두 물질간의 항원-항체 반응을 활용하여 줄기세포의 신경세포로 분화 여부를 AFM으로 측정하였다. 먼저, 수용성 시료인 두 물질을 증류수에 용해시켜 Mica 기판에 그 용액을 떨어뜨려 자연건조로 시료를 준비한 후, AFM으로 형태 및 크기를 측정하였다. D-Glutamic acid와 Glutamate는 구형 입자 형태를 보였으며, Glutamate의 너비는 ~100 nm이고, D-Glutamic acid는 ~50 nm였다. 두 물질이 든 용액을 섞었을 때, 항원-항체 반응에 의해 다른 크기의 두 구형입자가 붙어 있는 형태가 관찰되었다. 이 반응을 활용하여, 신경세포에서 분비되는 신경전달물질인 D-Glutamic acid를 선별하였다. DMEM 배지에 신경암세포주인 SH-SY5Y 를 접종한 후 $37.6^{\circ}C$의 incubator에서 24시간 배양하고, 화학적 자극(60~70 mM의 KCl 용액을 주입함)을 주어 신경전달물질 분비를 유도하였다. 그 배지에 항체 Glutamate 를 주입하여 자연건조 시킨 후 항원-항체 결합특성을 AFM으로 측정하여, 항원-항체 결합된 이미지와 동일함을 확인하였다. 결과적으로 AFM을 이용한 신경전달물질의 항원-항체 결합여부 측정을 통해, BM MSC 줄기세포의 신경세포로 분화를 판단할 수 있으며, 이 방법은 줄기세포의 특정 세포로의 분화 여부 판단에 활용될 것으로 기대된다.

• Journal of Dental Rehabilitation and Applied Science
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• v.25 no.2
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• pp.191-200
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• 2009

Dental Pulp Stem Cells are superior to other types of adult stem cell. Because of teeth are easy to access and are extracted throughout life. A supernumerary tooth is an important clinical problem found in various populations of the world. The incidence of supernumerary teeth varies depending on the literature source. Pediatric dentists are routinely extracted them. However, no studies have been reported regarding Dental Pulp stem cells in a supernumerary tooth, and we failed to note that a valuable source of human stem cell. Herein, we tried to show that a supernumerary tooth contains cells that display the characteristic features of stem cells.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• v.37 no.3
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• pp.199-206
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• 2010

Stem-cell therapy has the potential to improve vision in patients with untreatable retinal disease. Various types of cell source including fetal, embryonic and adult stem cells, intrinsic and extrinsic factors for differentiation into retinal progenitors and transplantation mode were discussed in this review. Experimental approaches have successfully induced photoreceptor precursor cells and retinal pigment epithelium. Stem-cell-based therapy is a promising treatment to restore vision in patients with retinal disease, in spite of the challenges.

• Journal of Life Science
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• v.30 no.9
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• pp.819-825
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• 2020

All living organisms exhibit the characteristics of aging, such as skin wrinkle formation, muscle degeneration, cataracts, and hair graying as the number of aged cells increases over time. Senescence, which is known as a key cause of aging, is directly related to the aging of living organisms because cells are aged by external and internal factors and eventually cell proliferation is stopped. Senescence is caused by the gradual shortening of the telomere with cell division, and lifespan is determined by the length of the telomere. Recently, it has been found that the histone deacetylase, which can influence gene expression, is not only involved in yeast but also deeply involved in anti-aging mechanisms in both C. elegans and humans. It was also discovered that old cells play a decisive role in the aging phenomenon, and it has been reported that it is possible to promote the proliferation of young cells and delay aging by removing these senescent cells from the inside. Therefore, in order to develop potential anti-aging agents in the future, research should begin with an in-depth study of telomerase activators, sirtuin activators, and senolytics.