1) 인삼 사포닌을 5% 황산으로 가수분해하여 TMS화 한 후 GC로 분석한 결과 인삼중의 모든 사포닌을 diol계 사포닌과 triol계 사포닌으로 나누어 분석할 수 있었다. 2) 시료중의 전체 diol계(PD)와 triol계(PT) 사포닌을 ginsenoside Rb$_1$과 Rg$_1$의 양으로 각각 환산하여 표시하고 미삼에는 백삼에 비해 diol계 사포닌의 함량이 많은 것을 이용하여 PD/PT글 구하고 여기에서 구해진 비를 이용하여 시료중의 백삼 및 미삼의 이론적 함량을 구할 수 있었다. 3) 이 방법의 검출 한계는 백삼의 양으로 0.14$\mu$g이었다.
본 연구는 인삼 사포닌(Ponax ginseng C.A. Meyer)이 수영운동을 부하시킨 웅성 횐쥐(Sprague-Dawley 계, 360 $\pm$ 40 9)의 대퇴근 크레아틴 키나제(Creative Kinase, CK: E.C. 2.7.3.2) 동위효소 활성에 미치는 영향을 연구하였다. 운동군은 3시간 동안 수영운동시켰으며 ,인삼군은 인삼 사포닌을 체중 Kg 당 120 mg 복강투여하였다. 인삼 사포닌을 투여한 운동군은 수영운동 1시간 전에 인삼 사포닌을 투여한 후 3시간 동안 수영시켰다. 인삼군의 MB-CK의 활성은 대조군보다 유의하게 증가하였다(P<0.01). 또한 인삼 비투여 운동군과 인삼 투여 운동군에서의 MM-CK활성은 대조군보다 각각 현저하게 증가하였고(P < 0.01와 P < 0.05), 특히 인삼 투여 운동군에서 BB-CK활성이 대조군보다 유의하게 증가하였다(P < 0.01). 인삼 사포닌은 일반적으로 CK-동위효소의 활성을 증가시키고, 운동은 MM-CK의 활성을 현저하게 증가시켰으며, 인삼 투여 운동군에서 BB-CK의 활성이 인삼 비투여 운동군보다 현저하게 증가하였다. 따라서 인삼 사포닌과 운동이 CK동위효소 활성에 상승의 효과를 나타내는 것으로 생각된다.
돌외의 사포닌 성분을 비교하기 위하여 경남 거창지방과 일본 덕도지방에서 수집한 돌외의 잎과 줄기에서 사포닌을 추출 정제하여 HPLC로 분석하고, 인삼의 사포닌 성분과 비교하기 위하여 HPLC의 크로마토그램의 retention time에 의하여 비교하였다. 돌외의 사포닌 성분을 인삼의 사포닌 성분과 달랐으며, 두 지방에서 수집한 돌외의 사포닌 성분은 서로 비슷하였다. 사포닌의 함량은 거창지방에서 수집한 돌외가 일본 덕도지방의 것보다 0.26 % 더 많았다.
치주질환의 치유에 있어서 치주인대 세포의 증식과 분화는 매우 중요하다. 몇몇 학자들에 의해 치주인대 세포의 증식과 분화에 영향을 주는 platelet derived growth나 fibronectin과 같은 growth factor에 대한 연구가 있었다. 이 연구는 홍삼 총사포닌이 치주인대 세포에 미치는 세포독성과 세포의 성장 및 분화에 미치는 영향을 규명하고자 사람의 치주인대 세포를 분리, 배양하여 실험하였다. 총사포닌이 치주인대 세포에 미치는 세포독성을 특정하기 위해 여러가지 농도의 총사포닌을 세포배양액에 첨가하여 1주일 배양후의 결과와 단일 농도($1{\mu}g/ml$})하에서의 세포 성장을 혈구계산반을 사용하여 관찰하였다. 치주인대 세포가 조골세포양세포로의 분화과정에 사포닌이 영향을 미치는 것을 관찰하기 위해 개개의 총사포닌 농도)0.1,1,$10{\mu}g/ml}$)를 세포배양액에 첨가하여 배양하였다. 치주인대 세포가 조골세포의 표현형으로 분화되는데 미치는 총사포닌의 영향을 알아보기 위하여 총사포닌의 단일 농도($1{\mu}g/ml$)하에서 $50{\mu}g/ml$ ascorbic acid와 10mM ${\beta}-glycerophosphate$를 배양액에 첨가하여 배양후 von Kossa's staining을 시행하여 생성된 골결절을 관찰하였다. 이상의 실험에서 얻어진 결과는 아래와 같다. 1. 각각의 농도를 투여한 결과, $1{\mu}g/ml$의 총사포닌에 의해서 세포독성이 유의성있게 증가하였다. 2. 0.01,0.01,1,$10{\mu}g/ml$의 총사포닌을 세포배양액에 첨가한 다음 7일 후의 고나찰시 cell viability가 실험농도 모두에서 유의성있게 증가하였다. 3. 0.1,1,10,$100{\mu}g/ml$의 농도에서 유외성있는 세포 증식이 있었다. 4. $1{\mu}g/ml$의 총사포닌을 세포배양액에 첨가한 다음 1,3,5,7,9일의 관찰시 시간경과에 따라 유의성있는 세포 증식이 있었다. 5. $10{\mu}g/ml$의 총사포닌을 세포배양액에 첨가시 ALP activity가 대조군에 비해 유외성있게 증가하였다. 6. $1{\mu}g/ml$의 총사포닌으로 배양된 치주인대 세포내에서 ALP positive cell이 관찰되었다. 7. $1{\mu}g/ml$의 총사포닌으로 배양된 치주인대 세포내에서 골결절 형성이 관찰되었다.
인삼(Panax ginseng C. A. Meyer)뿌리 절편을 효소원으로 사용하여 $^14C$-acetate로부터 제조한 방사성 인삼사포닌을 함유한 인삼 사포닌 분획 조제물을 High performance liquid chromatography방법으로 분리하여 각 glycosides의 함량과 비 방사능을 측정하였다. 1mg의 $^14C$-표지사포닌을 함유한 인삼 사포닌을 쥐에게 구경 투여하고 1시간후 혈청 및 간장으로부터의 추출물을 분석한 결과 혈청이나 간의 경우 모두 사포닌 투여후 회수된 매탄올-물층의 방사능이 빠른 속도로 경감되었으나 방사능이 어느 수준 이하가 되면 방사능 소멸속도가 크게 저하되는 것으로 보아 일정수준의 인삼사포닌은 비교적 오래 혈청이나 간에 잠재하는 것으로 사료된다. 각 glycosides에 따라 흡수정도는 다르나 0.1%-1%정도 흡수된 것으로 확인되었고 간에서의 인삼 사포닌의 농도는 인삼 사포닌 투여후 상당기간 $10^{-6}$%-$10^{-5}$%수준을 유지할 것으로 예상된다.
사포닌은 동양의 전통적인 약재로 널리 알려진 인삼의 주요한 성분이다. 사포닌의 다양한 생물학적 효능이 밝혀져 있으나, 피부재생과 관련된 효능은 현재까지도 명백하지 않다. 본 연구에서는 세포외 시스템에서 사포닌의 항산화 효과 뿐만 아니라 사람 진피 섬유아세포에서 기질금속단백질 분해효소(MMP)에 대한 효능이 조사되었다. 먼저 MTT assay를 이용한 세포생존력에 대한 사포닌의 효능을 조사한 결과, 10 ${\mu}g$/ml 이하의 농도에서 사포닌은 세포생존력을 증가시켰으나 25 ${\mu}g$/ml 이상의 농도에서는 세포독성을 나타내었다. 항산화에 대한 사포닌 효능을 조사한 결과, 1 ${\mu}g$/ml 이상의 농도에서 사포닌은 환원력 뿐만 $H_2O_2$에 대한 억제 효능을 보여주었다. 특히, DNA 산화에 대한 보호 효과도 나타내었다. 더욱이 gelatin 및 casein zymography 시험결과, 사포닌은 MMP-2를 활성화 시키고 MMP-1의 활성을 증가시키는 것으로 보아, 항노화 및 피부재생 약효제로 잠재적인 가능성이 기대된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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