활성오니의 주요 미생물인 Zoogloea ramigera의 증식과 zooglan 생산에 영향을 미치는 배양조건에 대하여 연구하였다. Z. ramigera의 증식과 zooglan 생산에 영향을 미치는 성분의 영향을 살피기 위해 특정성분을 제한한 결과 phosphate 제한시 zooglan의 생산이 현격하게 감소하였다. 탄소원으로 포도당 이외에 유당을 이용한 zooglan 생산이 우수하였다. 질소원으로 사용된 $NH_4Cl$와 ${(NH_4)}_2SO_4$가 세포 증식을 향상시켰다. 포도당과 $NaNO_3$의 비가 60일 경우 포도당의 초기농도가 456g/L일 때 zooglan 생산이 18.5g/L로 가장 높았다.
본 연구에 서는 Zoogloea ramigera에 의한 zooglan 생산에서 탄소원의 영향에 대한 연구를 수행하였다. 탄소원의 농도를 기존의 연구에셔 사용된 $25g/\ell$ 보다 높은 $45g/\ell$ 를 사용한 경우에도 zooglan을 효과 적으로 생산함으로써 유청을 희석시키지 않고 그대로 zooglan 생산에 사용할 수 있는 가능성을 확인하였다. 탄소원이 lactose인 발효배양의 경우 zooglan 생 산량 및 정도가 가장 켰고, glucose, galactose, suc crose 순이었다. 정제된 zooglan용액(5g/P)의 점도 는 lactose 기질로 생산된 zooglan의 경우 가장 큰 값을 보였고 glucose, galactose 기질의 경우가 가약간 작았으며 sucrose 기질의 경우는 상당히 낮은 값을 보였다. Lactose로의 배양시 발효액 에 상탕량 의 glucose와 galactose가 존재하였지만 이 균주는 세포외로 ${\beta}$-galactosidase를 분비하기보다는 세포내 에 존재한 ${\beta}$-galactosidase에 의해 lactose를 분해 하고 다음 대사과정으로 들어가지 못한 과영의 단당 들이 세포 밖으로 배출된 것으로 판단된다.
zooglan생합성에 필수적인 gene cluster를 clone하기 위해 2종류의 변이주가 분리되었다. Zoogloea ramigera 115는 협막형 다당(주로 zooglan)을 생산한다. 115 균주로 접합시키고 생산물을 용이하게 분리하기 위하여 반복된 원심분리와 선별을 통해 협막을 만들지 않는 slime형 생산균주를 분리하였다. 세포외 다당 생산 능력이 결여된 변이주를 전통적인 transposon(Tn5) 기술을 사용하여 얻었고 달라진 colony 형태와 celluflour결합 성질에 의해 선별하였다. 이들 변이주들은 범용숙주범위 cosmid vector안에 건설된 Z.ramigera 115slime gene library 와 helper plasmid로의 3양친 접합에 의해 보상되었다.
Zoogloea ramigera produces an extracellular polysaccharide called zooglan, which adsorbs heavy metals. In the current study, Zoogloea ramigera was cultured in media containing various carbon sources. When different carbon sources were included in the cultivation medium, there was a change in the composition of zooglan that is mainly composed of glucose, galactose, and pyruvic acid. The various zooglan compositions were analyzed by HPLC, and changes in the heavy metal (lead (II) and cadmium) adsorption characteristics relative to a change in the composition were examined using an atomic absorption spectrophotometer. A high adsorption capacity was observed at a pH higher than 3.0. The adsorption of metal ions was the highest at $35^{\circ}C$, and a higher adsorption was obtained with a lower flow rate. Changes in the zooglan composition did result in changes in the heavy metal adsorption characteristics. Furthermore, it was also found that the pyruvic acid content was more important than the glucose or galactose content for heavy metal adsorption.
Polysaccharides are very effective adsorbents for heavy metals. In this study, the adsorption characteristics of various polysaccharides for heavy metal adsorption were investigated. Tested polysaccharides were homogeneous polysaccharides such as curdlan, chitin, starch, cellulose, Avicel, and Solka floc and heterogeneous polysaccharides such as zooglan, locust bean gum, ghatti gum, pectin, and xylan. Lead(II) adsoption characteristic on these polysaccharides followed Freundlich isotherm and the isotherm parameters were calculated. For adsorption of lead(ll), Avicel, starch, and zooglan were found to be good adsorbents.
Some trials to alter the structure of extracellular polysaccharides by means of biotransformation and microbial modification have been reported. Seaweed alginate was acetylated by intact and resting cells of Pseudomonas syringae ATCC 19304. Glucose analogs such as 3-O-methyl-D-glucose used as sole carbon sources was directly incorporated into curdlan by agrobacterium sp. ATCC 31749. The 2-amino-2-deoxy-D-glucose (glucosamine)and 2-acetamido-2-deoxy-D-glucose (N-acetylglucosamine) were incorporated into microbial cellulose by Acetobacter xylinum ATCC 10245. The changed monomeric composition in pullulan by Aureobasidium pullulans ATCC 42023 as well as zooglan by Zoogoea ramigera ATCC 25935 was another effect of glucose analogs used a carbon source. There was no effect of glucose analogs found in polysacharide-7 (PS-7) produced by Beijerinckia indica. ATCC 21423.
Pseudomonas sp. GP32가 생산하는 생물고분자응집제 Biopol32의 실제 산업폐수에서의 적용을 위하여 생물고분자 Biopol32의 응집특성을 조사하였다. Biopol32의 응집물질은 polysaccharide로 확인되었다. 음이온성 응집제들은 응집효율을 높이기 위하여 보조응집제로 counter ion을 사용하고 있다. Biopol32의 응집활성은 보조응집제로 $Ca^{2+}$, $Al^{3+}$와 같은 양이온을 첨가 하였을 때 크게 증가하였으며, 보조응집제로서 7.0 mM $CaCl_2{\cdot}2H_2O$을 첨가하였을 때 Biopol32의 응집활성이 가장 높게 나타났다. Kaolin 현탁액에 Biopol32를 1.5 mg/l의 농도로 첨가하였을 때 가장 높은 응집활성을 보였다. Biopol32의 pH와 온도에 따른 응집활성은 현재 폐수처리 현장에서 상업적으로 이용되고 있는 음이온성 유기합성고분자응집제 polyacrylamide와 Zoogloea ramigera로부터 생산된 생물고분자응집제 zooglan과 응집활성을 비교하였다. Biopol32의 응집활성은 pH 5.0에서 8.0의 넓은 범위의 pH에서 높은 응집활성을 보였으며, 또한 온도의 영향에서는 $60^{\circ}C$에서 가장 높은 응집활성을 나타내었으나, $70^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 응집활성이 급격히 감소하는 것으로 나타났다. Jar fermentor를 이용한 batch culture를 통하여 Biopol32의 응집활성과 전하밀도와의 관계를 조사하였다. 음이온성 전하밀도와 겉보기 점도가 높을수록 Biopol32의 응집활성이 높아져, Biopol32의 응집활성과 겉보기점도는 Biopol32의 전하밀도와 밀접한 관계가 있는 것으로 나타났다.
Bacillus sp. A56 was studied, because of its high flocculating activity. The flocculating substance produced by this strain was purified by ethanol precipitation, cetylpyridinium chloride (CPC) precipitation, and gel permeation chromatography (GPC). The FT-IR spectrum of the purified bioflocculant, designated as BF-56, showed typical characteristics of polysaccharides. The non-sugar substituents, and sugar components of BF-56 containing glucose, fucose, glucuronic acid, and galactose in an approximate molar ratio of 2.76:1.10:1:0.12, suggested that it was a novel bioflocculant with an estimated molecular mass of over $7{\times}10^3$ kDa. Rheological analysis of BF-56 revealed that it was a pseudoplastic that had higher apparent viscosity rate at dilute concentrations than those of zooglan. The solution of bioflocculant BF-56 exhibited non-Newtonian characteristics and it was compatible to high concentrations of salts such as KCl, NaCl, $CaCl_2,\;or\;FeCl_3.$ The present results suggested strong possibility of bioflocculant BF-56 to be fully applicable to industries such as wastewater treatment.
The culture conditions for Bacillus sp. DP-152 in the flask were investigated for the production of polysaccharide locculant, DP-152. The optimum pH and temperature for the locculant production were 8.0 and $30^{\circ}C$, respectively. The avorable substrates for flocculant production were soluble tarch and ammonium nitrate. The medium composition was optimized as follows: 30 g soluble starch, 0.75 g $NH_4NO_3,\; 2.0g\; K_2\;HPO_4,\; 0.1\; g KH_2PO_4,\; 0.2g\; MgSO_4.\; 7H_2O,\; and\; 0.2g\; MnSO_4~5H_2O$ in 11 of distilled water. Under this optimized condition, flocculating activity has been improved 4-fold compared with that of the basal medium. In the culture flask, the highest flocculating activity was obtained after 70 h of cultivation and the amount of bioflocculant DP-152 yielded was 12.4 g/$\ell$. The solution of bioflocculant DP-152 showed non-Newtonian characteristics. Bioflocculant DP-152 exhibited apparently higher viscosity at all concentrations compared to that of zooglan (from Zoogloea ramigera), and it was stable over a wide range of temperatures and pHs.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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