Yolk protein-3 (YP3) was purified from the ovary of Hvpharatria cunea D. and the synthesis and fate during embryogenesis of WP3 were investisated by electrophoresis and fluorography. YP3 purified through gel slice and electrophoretic elution'was determined to have M. W. of 18 Kd and consist of one subunit. Haemolymph and fat body of male and female %were electrophoresed during vifellogenic stages to indentifv the vitellosenin in female. The result showed that there was no distinct difference in electrophoretic patterns betweerl male and female. However, tissue culture of fat body and maturing ovary indicated that YP3 was svuthesized by fat body. Aiso, vP3 in iaid eggs was maintained constant untii naut s artier oviposition and then decreased, indicating that YP3 was drastically used during late embryosenesis. However, a part of YP3 was present even in newly hatched first instar larvae.
The present was undertaken to establish a model for the control of adipocytes differentiation by using antibody from egg yolk. The emulsion of membrane protein of 3T3L-1 cell membrane protein with the complete Freund's adjuvant was firstly immunized in layer. Second and third boosting were undertaken with two weeks intervals by injection of the emulsion of the same antigen with the incomplete Freund's adjuvant. After 4 week of the first immunization, eggs were collected and antibody (IgY) was purified from egg yolk. The purity of IgY was 60-98% determined by single radial immunodiffusion (SRID) methods. Titer value of the antibody showed high reactiviy for the preadipocytes membrane protein measured by ELISA. When the IgY was added in the test media containing either 2.5% porcine serum or 10% FBS(control), the differentiation of 3T3L-1 cells and Glycerol-3-phosphate dehydrogenase(GPDH) activities was significantly decreased compared to the control cells(p〈0.05). When mice were subcutaneously injected with IgY raised against membrane protein of 3T3L-1 cells for 3 weeks, adipose tissue mass around ovary was tended to be decreased in female mice compared to those of control mice. It is suggested that a potential for manipulating of lipid accumulation through decrease in 3T3L-1 cell differentiation and fat accumulation in female mice by IgY treatment.
범가자미, Verasper variegatus의 황단백 질을 증류수로 침전시킨 후 Sepharose CL-6B column chromatography에 의해 분리하였다. 조난황단백추출액에서 분리한 난황단백질이 암컷 특이 혈청단백질과 공통의 항원성을 가짐을 Ouchterony 면역확산 test와 면역전기영동으로 확인하였다. 분리한 난황단백질의 분자량은 약 550kD이었으며, 난황단백질을 구성하고 있는 subunits은 분자량이 각각 108, 85, 31kD인 3종의 major subunits와 103, 80kD인 2종의 minor subunits이었다. 분리한 난황단백질은 vitellin에 대한 항혈청을 이용하여 western blot으로 확인한 바, 면역화학적 반응을 나타냈다.
The quality characteristics and proximate composition of the eggs of pheasant, chukar, quail, and guinea fowl were compared. Eggs of the 4 species had a similar ovalish conical shape with blunt and pointed ends, showing the shape indices of 77.30-79.63 with no statistical difference. Egg weight was heaviest in guinea fowl (46.65 g), followed by pheasant (25.79 g), chukar (19.16 g) and quail (10.34 g). Proportion of yolk to the total egg weight was highest in pheasant (35.7%), followed by chukar (33.9%), quail (31.4%) and guinea fowl (30.6%). Albumen content was highest in quail showing 61.2%, while pheasant, chukar and guinea fowl were in the range of 55.6~57.4%. The ratio of yolk to albumen (Y/A) was highest in pheasant (0.65), followed by chukar (0.60), guinea fowl (0.55) and quail (0.52). The portion of shell to the total egg weight was highest in guinea fowl (13.5%) and lowest in quail (7.3%). The shell thickness of the eggs was thickest in guinea fowl ($462.8{{\mu}m}$), followed by pheasant ($241.5{{\mu}m}$), chukar ($231.8{{\mu}m}$) and quail ($174.8{{\mu}m}$). The contents of moisture, crude protein, crude fat and crude ash of whole egg were in the ranges of 74.26-74.50%, 11.98-12.77%, 10.83-11.91% and 1.02-1.10%, respectively, with no statistical difference (p>0.05) among the species. Albumen was high in moisture (87.46-87.99%) and very low in crude fat (0.09-0.13%), which was quite different from yolk. Yolk showed relatively low level of moisture (49.71-50.42%) and high levels of fat (31.48-32.32%), crude protein (15.12-15.99%) and crude ash (1.53-1.86%). No species difference in the proximate compositions of albumen and yolk was found except in crude ash content of albumen.
동남참게, Eriocheir japonicus의 난황단백전구체 합성부위를 면역조직화학적인 방법으로 구명하기 위하여, 난황단백질을 정제하고, 이 단백질에 대한 항혈청을 제작하여 난황단백질에 대한 면역학적인 성질을 밝힌 후, 난황단백전구체의 항체가 존재하는 항 난황단백혈청을 사용하여 PAP(peroxidase-antiperoxidase)법으로 생식소, 간췌장, 근육조직을 대상으로 면역조직화학 반응을 시켰다. 성숙한 암, 수혈청에 대한 면역전기영동과 Ouch-terlony 면역확산 실험에 의하여 암혈청내에는 암 특이성혈청단백질이 있음이 밝혀졌다. 암, 수혈청에 대한 항혈청과 난황형성중인 암혈청에 대한 조난황단백추출액에 대하여 면역전기영동과 Ouchte-rlony 면역확산 실험을 행한 결과, 암 특이성혈청 단백질은 난황단백전구체임이 밝혀졌다. 조난황단백추출액으로 부터 DEAE 이온교환 chro-matography와 sepharose CL-4B gel 여과법에 의하여 난황단백질을 정제하였으며, 이 난황단백질의 분자량을 sepharose CL-4B gel 여과법에 의하여 추정한 결과 분자량은 약 245,000 dalton이었다. 또한 난황단백질은 면역학적인 분석에 의하여 난황 단백질에 대한 항혈청에는 난황단백전구체에 대한 항체가 존재하고 있음이 증명되었다. 난황단백질에 대한 토끼 항혈청을 이용하여 PAP법에 의한 면역조직화학반응을 시킨 결과, 난황형성중인 난모세포와 성숙한 암참게의 간췌장은 양성반응이 나타는데 반하여 난소내의 여포세포층과 난황형성전 난모세포, 근육층 그리고 성숙한 수참게의 간췌장은 전혀 양성반응이 나타나지 않았다. 따라서 본 종의 난황단백전구체의 합성부위는 간췌장임을 알 수 있다.
난황 단백질의 효소에 의한 가수분해에서 에탄올의 농도가 증가할수록 고형물과 단백질의 회수가 증가함을 알 수 있었다. 이것은 유화층을 에탄올의 증가가 감소시켰기 때문이다. 그러나 가수분해물에서 단백질 함량이나 sialic acid의 함량은 에탄을 농도와는 관계없이 일정하였다. 한외여과 후에 retentate에 대한 에탄올의 영향을 조사하였다. 마찬가지로 고형물의 회수는 에탄을 농도의 증가와 함께 증가하였다. 그리고 retentate에서 sialic acid의 함량은 대략 $2.5\%$정도로 일정하고 에탄올의 농도에 영향을 받지 않았다 이상의 결과로부터 난황 단백질의 효소 가수분해를 통해 sialic acid가 함유된 제품을 얻고자 할 때는 원료 난황단백질에 포함된 에탄올의 함량을 증가시킬수록 높은 수율의 제품을 얻을 수 있다. 본 실험에서는 원료 난황 단백질 중에서 $40\%$의 에탄을 함량까지는 제품 수율이 계속 증가하는 경향을 보였다. 난황 단백질 가수분해물의 한외여과에서 농축단계에서는 막 모듈의 MWCO의 차이에도 불구하고 retentate에서 총 고형물의 회수율은 비슷함을 나타내었으며, 투석에서 회수율은 MWCO가 작을수록 높아지지는 않았다. 제품에서의 sialic acid의 함량은 사용한 모듈에서 약 $2.0\%$를 나타내었다. 이것은 단백질 가수분해물에 비해 5배정도 상승한 결과이다. 본 연구에서 사용된 막 모듈 가운데서 Amicon 모듈이 제품의 회수율과 함량면에서 가장 우수한 특성을 보였다. 결론적으로 난황 단백질의 protease에 의한 가수분해에서 한외여과에 의해 순도를 높일 때 MWCO, 막 모듈의 type 그리고 운전조건 등을 잘 고려해 줄 때 최적의 조업조건을 얻을 수 있었다.
This study was conducted to determine the serum vitellogenin (VTG) concentration changes during the ovulation period in elkhorn sculpin, Alcichthys alcicornis. The results of sepacryl S-300 showed that the molecular weight of VTG could be 380,000. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis may indicate that the purified VTG consists of three subunits with molecular weights of 180,000, 118,000 and 85,000, respectively. Yolk protein purified from the egg extracts was eluted on an equilibrated sephacryl S-300 column, and its molecular weight was estimated 250,000. The precipitation lines of the female serum against the antiserum of the egg extracts were fused completely by immunoelectrophoresis and immunodiffusion analysis. VTG was detected in the serum, and hepatocytes from males injected with $17\beta-estradiol\;(E_2).$ Furthermore, VTG was immunochemically similar to yolk proteins. The concentration of VTG was high before ovulation $(9.80\pm0.81-11.02\pm0.09 mg/ml),$ and then decreased rapidly after ovulation $(less\;than\;6.19\pm0.59 mg/ml).$ This study suggested that VTG was synthesized in the liver by the action of $E_2$ and released to blood, and then incorporated into oocytes.
연두금파리의 난세포성숙에 따른 단백질의 변화와 난특이성단백질의 특성을 확인하기 위하여 gel filtration, 전기영동 및 분자량측정, 아미노산과 지방산함량을 측정하여 얻은 결과는 다음과같다. 연두금파리 암컷성충의 난소단백질은 단백질원을 섭식시킨 후 72시간 이후 빠르게 증가하였고, 완전한 성숙이 일어나는 96시간에 최고의 함량을 나타냈다. DEAE-cellulose와 Sephacryl 5-200으로 gel filtration하고 7.5% native polyacrylamide gel에서 전기영동한 결과 난소에서 분리된 특이단백질은 ${R}_{f}$ 0.4에서 혈림프 및 난소와 다른 밴드가 확인되었으며, 분자량은 110,000 dalton이였다. 분리된 난특이성단백질내 아미노산 조성은 asparagine 외 모두 13종이 검출되었으며, asparagine, glutamic acid와 함께 tyrosine이 특이하게 높게 나타났다. 지방산은 난소와 함께 난특이성단백질에서 palmitic acid의 4종이 분리되었다. 따라서, 연두금파리의 난에는 지방체에서 합성, 분비된 난황단백질이외에 난소에만 존재하는 특이단백질이 있음을 알 수 있다.
난황에 포함된 IgY는 포유동물에 있는 바이러스나 항원에 반응하는 항체와 같은 역할을 한다. IgY 분리를 위해 난황을 전처리한 후 3-zone SMB를 이용하여 지질단백질들로 부터 분리하는 전산모사연구를 수행하였다. 회분식 크로마토그래피와 pulse input method(PIM) 실험을 이용하여 전산모사 매개변수와 흡착 등온식을 얻었다. Aspen simulator를 이용하여 전산모사를 수행하여 IgY를 분리할 수 있는 SMB 운전조건을 다음과 같이 제시할 수 있었다. 삼각형 이론의 $m_2$와 $m_3$ 값은 각각 0.18, 1.0이고 스위칭 타임은 419 초이었다. 전산모사 결과 raffinate의 IgY 순도가 98.39%이고 두번째 싸이클에서 순도가 정상상태에 도달하였다.
본 연구에서는 SDS/polyacrylamide젤 전기영동과 2차원 전기영동을 사용하여 Gerris paludum(소금쟁이)의 난 형성 동안 난소 단백질과 혈림프 단백질을 비교하였다. 또한 난물질의 구성성분인 glycoprotein의 양상을 살펴 보았다. 결과는 다음과 같다. 난을 갖지 않는 5령의 난소 단백질의 양상을 성체의 산란 무 난소 단백질 퍼턴과 유사하였다. 난 발달동안의 난소의 단백질중 M.W 66,000-110,000 사이의 단백질이 난을 갖지 않은 난소 단백질에 비해 많은 양이 존재하였다. 난을 갖지 않은 난소에서는 glycoprotein은 나타나지 않았다. glycoprotein은 5령의 난 발달이 진행됩에 따라 점차적으로 증가하였다. 산란후 성체의 난소에서는 5령의 난을 갖지 않는 난소에서처럼 glycoprotein은 나타나지 않았다. 또한, M.W 66,000-110,000 사이의 혈림프 단백질은 5령의 난 형성 동안 양적으로 증가하였다. 이러한 결과는 난소 단백질 중 일부를 혈림프로부터 얻을 것이라는 사실을 제시하는 것이다. 발달하고 있는 난의 glycoprotein은 이 단계의 혈림프에서도 점차 증가하였다. 낮은 분자 영역에서 하나의 band (M.W. 9,500)가 난을 갖지 않는 5령과 성체의 혈림프에서 분리되었다. 이 단백질은 고분자량의 영역(M.W. 66,000-110,000)에서 나타나는 glycoprotein 전구체라고 생 각된다. 2차원 전기영동에서는 난을 갖지 않은 난소 단백질이 난을 가지고 있는 난소 단백질에 비해 적은 spots로 분리되었고 그 양도 적었다. M.W 45,000-110,000 사이의 band들은 2차원 전기영동에서 산성쪽으로 분리되어 나타났다. 특히, M.W. 102,000의 분자량을 가지는 band는 4개의 spots bl, b2, b3 및 b4로 분리되었다. 반면에 M.W 24,000이하의 단백질들은 산성쪽의 단백질보다 염기성쪽으로 분리되었다. Gepris paludum의 난황 형성과정에 있어서 세포내 기관(= 세포 소기관)의 기작이 난세포의 난황단백질 합성과 관계를 가지고 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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