• 대한본초학회지
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• 제27권6호
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• pp.1-6
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• 2012

Objectives : ROS are involved in a wide spectrum of diseases including chronic inflammation and cancer. S.chinensis Baill, a perennial herb commonly called Chinese lizard's tail or Sam-baek-cho in Korea, is used for the treatment of edema and inflammatory diseases in the Oriental folk medicine. In this study, we investigated the antioxidant activities and anti-inflammatory effects of the two extracts, water(WE) and ethyl acetate(EAE) from S.chinensis Baill. Methods : Anti-oxidant activity was evaluated using Fe2+ chelating and hydroxyl radical scavenging assay. DNA cleavage assay, and western blot and immunostaining for phospho-p65 were performed to evaluate anti-oxidative effect. Anti-inflammatory effect was performed using NO generation assay and western blot in LPS-stimulated RAW264.7 cell. Results : In Fe2+ chelating activity and hydroxyl radical scavenging activity, WE showed more strong scavenging activity for hydroxyl radical than EAE. WE scavenged hydroxyl radical by 12% at 3.2 ${\mu}g/ml$, 21% at 16 ${\mu}g/ml$, 32% at 80 ${\mu}g/ml$, 66% at 400 ${\mu}g/ml$ and 82% at 2000 ${\mu}g/ml$, respectively. In addition, WE showed more strong chelating activity than EAE. WE chelated Fe2+ ion by 1.1% at 3.2 ${\mu}g/ml$, 8.2% at 16 ${\mu}g/ml$, 26.3% at 80 ${\mu}g/ml$, 72% at 400 ${\mu}g/ml$ and 89% at 2000 ${\mu}g/ml$, respectively. Also, WE inhibited oxidative damage via its anti-oxidant activity. In anti-inflammatory effect, EAE inhibited NO production and iNOS expression. In addition EAE suppressed the NF-${\kappa}B$ and MAPK signaling pathway in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Conclusions : Together, these data indicate that S. chinensis Baill, shows anti-oxidant activity and anti-inflammatory effect.

• 대한본초학회지
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• 제24권4호
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• pp.181-188
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• 2009

Objectives : In this study, we investigated the effect of methyl gallate of Paeonia suffruticosa(Moutan Cortex Radicis) on inflammatory response in activated macrophages. Methods : RAW264.7 cells were incubated with different concentrations of methyl gallate of Paeonia suffruticosa for 30 min and then stimulated with or without LPS at indicated times. Cell toxicity was determined by MTT assay. The concentrations of nitric oxide (NO), prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$) and inflammatory cytokines (TNF-$\alpha$, IL-6) were measured in culture medium by Griess assay, enzyme-immuno assay, and ELISA, respectively. The expressions of iNOS, COX-2 and cytokine mRNA and protein were determined by RT-PCR and Western blot, respectively. The $I{\kappa}-B{\alpha}$ degradation in cytosol and NF-${\kappa}B$ p65 translocation into nuclear of the cells were determined by Western blot. Results : Methyl gallate was significantly inhibited LPS-induced production of NO and PGE2 in RAW264.7 cells. Methyl gallate was also suppressed LPS-induced expression of iNOS and COX-2 mRNA and protein in the cells. Methyl gallate was inhibited LPS-induced production of TNF-$\alpha$ and IL-6 via suppression of their mRNA expressions. Methyl gallate blocked the NF-${\kappa}B$ pathway in LPS-stimulated RAW264.7 cells. Conclusions : This study suggests that methyl gallate of Paeonia suffruticosa may have an antiinflammatory property through suppressing inflammatory mediator production in activated macrophages.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제65권6호
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• pp.476-486
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• 2008

연구배경: 정상세포는 보호되고 종양세포에 독성을 보인다고 알려진 TNF유전자족으로 새로이 확인된 TRAIL이 폐암세포에서 보이는 아포프토시스 효과를 확인하고, 아포프토시스로부터 세포를 보호하는 전사인자 $NF-{\kappa}B$가 TRAIL에 의하여 활성화 되는 정도를 평가하여 MG132의 $NF-{\kappa}B$활성억제가 TRAIL 유도성 아포프토시스를 감작시키는지를 확인하기 위하여 본 연구를 시행하였다. 방법: A549(wt p53) 및 NCI-H1299(null p53) 폐암세포주를 사용하였다. 세포독성 검사는 MTT assay를 이용하였고 아포프토시스는 Annexin V assay와 FACS 분석을 이용하였다. $NF-{\kappa}B$ 전사활성은 luciferase reporter gene assay를 이용하였고 $I{\kappa}B{\alpha}$ 분해는 western blot을 이용하였으며, TRAIL에 의해 활성화된 $NF-{\kappa}B$와 DNA 결합은 electromobility shift assay와 anti-p65 antibody를 이용한 supershift assay로 확인하였다. 결과: 1) TRAIL 100 ng/ml 농도에서 wild-type p53인 A549 폐암세포는 34.4%, p53 null인 NCI-H1299 폐암세포는 26.4%의 세포사를 관찰하였다. 2) Luciferase reporter gene assay로서 TRAIL에 의한 $NF-{\kappa}B$의 활성이 A549 $IgG{\kappa}B-luc$세포에서 2.45배 증가하고 NCI-H1299 $IgG{\kappa}B-luc$세포에서는 1.47배 증가함을 관찰하여 TRAIL에 의하여 $NF-{\kappa}B$가 활성화됨을 확인하였다. 3) MG132의 전처치로 TRAIL에 의한 $NF-{\kappa}B$의 활성이 A549 세포와 NCI-H1299 세포에서 각각 기저수준의 0.24, 0.21배로 강력히 억제되었다. 4) TRAIL단독으로 30% 전후의 세포독성이 MG132 전처치 후 TRAIL을 투여하면 두 세포주 모두에서 80% 이상의 세포독성이 관찰되어 MG132가 TRAIL유도성 아포프토시스에 감작효과가 있음을 확인하였다. 결론: 이상의 결과로 TRAIL에 상대적인 내성을 보이는 폐암세포주에서 MG132가 $NF-{\kappa}B$ 활성억제로서 TRAIL유도성 아포프토시스를 강화시키는 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구는 향후 폐암치료에 있어서 TRAIL유도성 아포프토시스가 이용될 수 있는 가능성을 확인한 기초자료가 된다고 생각된다.

• 대한예방한의학회지
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• 제18권1호
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• pp.83-92
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• 2014

Objective : This study was performed to investigate the antineoplastic effect of Astragalus membranaceus, Angelica gigas, Rhus verniciflua Stokes and Trichosanthes kirilowii on SNU-80 anaplastic thyroid carcinoma cell line. Method : We examined whether our herbal medicines decreases cell growth rate of SNU-80 using MTT assay. We performed western blot analysis to verify that our herbal medicines induces apoptosis via caspase-dependent mechanism. We also performed wound healing assay and transwell invasion assay to investigate whether our herbal medicines affects the migration and invasion of anaplastic cancer cells, SNU-80. We also carried out ELISA assay to know our herbal medicines suppresses the expression of proinvasive molecules, such as VEGF and MMP-2 secreted from SNU-80. Results : MTT assay demonstrates that Angelica gigas, Rhus verniciflua Stokes, and Trichosanthes kirilowii suppressed strongly the growth of SNU-80. Western blot analysis demonstrates that Trichosanthes kirilowii induces apoptosis activating the cleavages of caspases (caspase-8, caspase-3) and PARP. Wound healing assay demonstrates that Rhus verniciflua Stokes, and Trichosanthes kirilowii inhibited the migration of SNU-80. Transwell invasion assay demonstrates that Rhus verniciflua Stokes, and Trichosanthes kirilowii inhibited the invasion of SNU-80. Elisa assay demonstrates that Astragalus membranaceus, Angelica gigas, Rhus verniciflua Stokes, and Trichosanthes kirilowii suppressed the expression of VEGF and MMP-2. Conclusion : We could conclude that several herbal medicines suppresses the growth and inhibits the migration and invasion of SNU-80 which is anaplastic thyroid cancer cells. Especially, Rhus verniciflua Stokes, Trichosanthes kirilowii had stronger anti-cancer effect suggesting that we can apply them to treat anaplastic thyroid cancer.

• 대한본초학회지
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• 제29권6호
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• pp.85-93
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• 2014

Objectives : We compared with the effects of different parts (root head, root body and hairy root) of Angelica gigas Nakai (Angelicae Gigantis Radix, AG) with on middle cerebral artery occlusion(MCAO)-induced ischemic rats, and on LPS-induced inflammatory response in BV2 microglia. Methods : The 30% ethanol and water extracts of different parts of AG were prepared. Each extract (50 and 100 mg/kg) was administrated intraperitoneally once in MCAO-induced ischemic rats. We measured infarction volumes by TTC staining, and investigated the expression of iNOS, Bax, Bcl-2 and caspase-3 by Western blot. BV2 cells were treated with each extract for 30 min, and then stimulated with LPS. The levels of NO was measured by Griess assay. The expression of iNOS, Cox-2 and proinflammatory cytokines ($TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$, and IL-6) were determined RT-PCR and Western blot. The phosphorylation of ERK1/2 and JNK MAPK was determined by Western blot. Results : Among different parts of AG, the 30% ethanol and water extracts of hairy root significantly decreased infarction volume in ischemic brains and inhibited the expression of iNOS, bax and caspase-3. The extracts of hairy root significantly inhibited LPS-induced production of NO, $TNF-{\alpha}$ and IL-6 in BV2 cells, and suppressed the expression of iNOS and COX-2. The hairy root extracts attenuated LPS-induced phosphorylation of ERK1/2 and JNK MAPK in BV2 cells. Conclusions : Our results indicate that the root hairy of AG has a good neuroprotective and anti-inflammatory effects in ischemic stroke compared to other parts.

• 식물병연구
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• 제18권3호
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• pp.231-235
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• 2012

본 연구는 citrus에 심각한 피해를 초래하는 바이러스인 ICRSV가 국내로 유입되는 것을 차단하여 그로 인한 피해를 방지하기 위해 이를 진단하는 시스템을 구축하고자 하였다. ICRSV가 감염된 시료를 구할 수 없어 외피단백질 유전자를 E. coli의 codon usage를 고려하여 optimization한 뒤 E. coli에서 수용성 단백질로 과발현된 재조합 ICRSV 외피단백질을 정제하였다. 정제한 재조합 단백질을 이용해 제작한 복클론 항체는 $1{\times}10^{-4}$으로 희석하였을 때 western blot과 ELISA를 통해서 각각 10 ng, 5 ng의 재조합 ICRSV 외피단백질을 검출할 수 있었다. 이로써 제작된 항체를 이용하여 소량의 바이러스 입자만으로도 ICRSV를 검출할 수 있을 것이다.

• Journal of Korean Dental Science
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• 제11권2호
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• pp.62-70
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• 2018

Purpose: Bone marrow has long been a source of primary cells. This study was performed to evaluate the effects of age and sex on the cellular viability and expression of stem cell markers of mRNA and on the protein expression of bone marrow stem cells (BMSCs) derived from healthy donors. Materials and Methods: Stem cells were isolated from human bone marrow and plated in culture plates. The shape of the BMSCs was observed under inverted microscope. Quantitative cellular viability was evaluated using a Cell-Counting Kit-8 assay. The expression of stem cell surface markers was tested and a series of quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) and Western blot was performed to evaluate the expression in each group. Result: The shapes of the cells at 20s, 30s, and 50s were similar to each other. No significant changes in cellular viability were noted among different age groups or sex groups. The BMSCs expressed CD44, CD73, and CD90 surface markers but did not express CD14 and CD34. There were no noticeable differences in CD surface markers among the different age groups. The expressions of CD surface markers were similar between men and women. No significant differences in the secretion of vascular endothelial growth factors (VEGFs) were noted at Day 3 between different age groups. qRT-PCR regarding the expression showed differences between the age groups. However, Western blot analysis showed a decrease in expression but did not reach statistical significance (P>0.05). Conclusion: This study clearly showed no significant differences in shape, cell viability, expression of stem cell surface markers, or secretion of human VEGF among different age groups. However, western blot analysis showed a tendency of age-related decrease which did not reach statistical significance. Collectively, autologous or allogeneic BMSCs should be meticulously applied to obtain optimal results regarding age and sex.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제50권5호
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• pp.549-556
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• 2001

연구배경 : 세포성장에 관여하는 여러 growth factor중 IGF-I은 IGF-IR와 결합하여 세포증식을 유발하는 mitogen으로 알려져 있다. 대부분의 정상세포 및 암세포는 IGFBPs을 분비하는데 이들은 IGF-I과 결합하여 IGF-I의 세포증식 효과를 증가 혹은 억제시킨다. 마우스 폐암세포주 (3LL)에서 IGF-I이 세포성장에 미치는 효과를 보고, 3LL 세포에서 분비되는 IGFBP을 추출 확인하고, IGFBPs이 세포 성정에 미치는 영향을 관찰하였다. 방 법 : 마우스 폐암세포주 (3LL)를 이용하여, IGF-I을 투여하여 세포성장을 MTT assay로 측정하였고, 3LL에서 분비되는 IGFBP을 추출하여 Western ligand blot 및 western immunoblot으로 확인하였다. 또한 분비된 IGFBP이 세포성장에 미치는 영향을 보기위해, anti-IGFBP antibody을 첨가하여 이의 기능을 억제하여 세포성장에 관한 기능을 관찰하였다. 결 과 : IGF-I은 serum free media에서 3LL 세포성장을 증가시켰다. 3LL 세포는 IGFBP-4를 생성하는 것을 확인하였고, anti-IGFBP-4 antibody를 첨가시 세포성장이 증가된 소견이 관찰되어 IGFBP-4는 세포증식을 억제하는 기능을 가지고 있음을 간접적으로 알 수 있었다. 결 론 : 이상의 실험 결과로 3LL 마우스 폐암세포에서 IGF-I은 세포성장을 증가시키며, 3LL에서 생성된 IGFBP-4는 세포증식을 억제하는 기능을 가지고 있다는 것을 관찰하였다. 향후 IGF-I과 IGFBPs이 암 성장에 미치는 기전과 임상적 적용에 대한 연구가 필요하리라 생각된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제53권3호
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• pp.275-284
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• 2002

연구배경: Gemcitabine은 폐암에서 임상적 유용성이 큰 새로운 항암제이다. 저자들은 폐암세포에서 Gemcita bine에 의한 세포 사멸과 p53의 역할을 규명하고자 하였다. 방 법 : 폐암 세포주로 A549와 H358 세포주를 이용하였고 세포 독성 검사는 MTT assay를 이용하였으며 Gemcitabine 농도는 10nM, 100nM, 1uM, 10uM, 100uM을 사용하였다. 세포 주기 검사는 FACScan을 이용하여 분석하였고 p53 활성화 여부는 western blot을 사용하였다. p53 단백질 분해를 촉진시키는 안정적 세포주 A549-E6과 H358-E6을 제조하고 대조 세포주 A549-neo와 H358-neo 세포주와 비교하여 p53의 기능적 knock-out 실험을 시행하였다. p53의 기능적 knock-out은 p53 유도 약제인 doxorubicine 1 M을 사용하여 western blot으로 확인하였다. 결 과 : A549와 H358 세포주에서 Gemcitabine은 농도에 비례한 세포 독성을 보였고 S phase arrest와 p53의 활성화를 유도하였다. 안정적 세포주 A549-E6과 H358-E6은 MTT assay에서 대조 세포주 A549-noo와 H358-noo에 비해 각각 20-30%, 30-40%의 세포 독성 차단효과를 보였다. 결 론 : Gemcitabine은 S phase arrest를 유발시키고 p53 단백질의 활성화를 유도하며 p53의 기능소실이 Gemcitabine에 대한 저항인자로 작용하고 있음을 확인할 수 있었다. 향후 Gemcitabine에 의해 p53의 활성화가 발생하는 신호경로와 p53 활성화에 의한 아포프토시스의 신호경로에 대한 연구가 필요할 것으로 사료된다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제36권4호
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• pp.269-275
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• 1998

톡소포자충과 네오포자충 (Neospora caninum)의 충체 항원으로 톡소포자충 양성 혈청 및 톡소포자충증 환자의 혈청과 ELISA, western blot 및 면역형광법을 실시하였다. ELISA에서는 172명의 톡소포자충 양성 혈청에서 12명 （6.7％）이 두 항원에 모두 반응하였으며, 톡소포자충 음성인 110명의 혈청에서 1명이 네오포자충과 반응하였다. 교차반응을 보인 12 명의 혈청을 western blot으로 확인하였을 때, 톡소포자충 항원과는 다양한 양상으로 반응하였으나, 30 kDa (SAG1)과 22 kDa (SAG2) 항원과 강하게 반응하였다. 네오포자충과의 반응은 급격히 감소하였으나, 세 경우에서 43 kDa 단백질과 반응하였으며, 음성 혈청군의 1명도 43 kDa 단백질과 반응하였다. 면역형광법에서는 모든 양성 혈청이 톡소포자충의 세포막에 표지되었으나, 네오포자충과의 반응은 세포막, 세포 내 소기관, 혹은 둘 다를 표지하였다. 이로써, 톡소포자충과 네오포자충의 항원적 교차반응과 사람 혈청에서 네오포자충에 대한 항체의 존재를 확인하였으며, 네오포자충에 의한 인체감염 가능성에 대해서는 추후 연구가 필요할 것으로 판단된다. 또, N. caninum의 우리말 이름을 네오포자충으로 제안한다.