This study was investigated spawning behavior, structure of egg masses and egg development in Aplysia kurodai inhabiting the coastal waters of Jeju Island, Korea. The mating and courtship behavior of A. kurodai occurred in the form of unilateral copulating with chain formation. In chain copulation, only the first animal acted as a female; the second and succeeding animals acted as males (sperm donors) to the animals in front and as females to the animals behind. The fertilized eggs were packaged in capsules that are embedded in jelly to form a cylindrical string called an egg masses. The number of capsule per cm of the egg masses was 55 to 60 capsules and each capsule within the egg masses held 15 to 25 eggs. After spawning, the egg masses were bright yellow or orange in color. This egg masses color not changed until embryos developed into trochophore stage. Thereafter, as embryo developed from trochophore stage to veliger stage the egg masses color became brownish. The fertilized eggs were spherical, with a diameter of approximately $80{\pm}1{\mu}m$ at spawning. At 5 to 6 days after spawning, the embryo developed into trochophore stage and began to rotate within the egg capsule. In the trochophore stage, the precursor of the velum, called the prototroch or prevelum, developed. At 10 days after spawning, the prevelum is transformed into the velum, and the trochophore developed into veliger stage. Between 10 to 15 days after spawning, the veligers broke out of the egg capsule, and hatched as free-swimming larvae.
Karyotype analysis is a major work in the process of triploid abalone production for the purpose of productivity and quality improvement. However, the metaphase spreads for karyotype analysis have been prepared just from the larvae at trochophore stage, which has restricted the spectrum of sample correction inhibiting more efficient analysis. Here, we investigated the feasibility of preparing metaphase spreads from the larvae at veliger stage that is the next developmental stage of trochophore. For this, diploid and triploid larvae at trochophore and veliger stages from Pacific abalone (Haliotis discus hannai) were subjected to metaphase spread preparation and its efficiencies were measured and compared each other. As the results, although the efficiencies of metaphase spread preparation were significantly lower in the larvae at veliger stage compared to the ones at trochophore stage regardless of ploidy status, we found that the preparation of metaphase spreads, which showed the clear chromosomal images containing the normal number of chromosomes, was possible from the veliger stage larvae. On the other hands, all larvae used in this study regardless of developmental stage and ploidy did not show colchicine sensitivity. Moreover, no significant difference was observed in cell cycle distribution of the cells comprising larvae between two developmental stages regardless of ploidy status. These suggested that the details of protocol to prepare metaphase spreads from abalone larvae should be optimized depending on its developmental stages. Taken together, we demonstrated the feasibility of preparing metaphase spreads from H. discus hannai veliger stage larvae for karyotype analysis.
Rabbitfish hatchlings were given a mixed food of rotifers (Brachionus rotundiformis) and trochophore larvae of oyster. Only the oyster-trochophore larvae were found in the gut of 62-h old fish larvae. The fish larvae, fed on rotifer and ciliate alone did not survive. However, their survival increased to 3.3 % on the 10th day after hatching, when trochophore was supplemented. Corresponding with the accelerated growth, the number of rotifers consumed increased from 11 in a 5-day old fish to 165 in a IS-day old fish. In a field ecosystem containing live diatom, Nannochloropsis oculata, rotifers and copepods, fish larvae were shocked and the oyster's trochophore larvae were fed from 2 to 7 days after hatching. A total of 76,000 seedling were produced after 50 days of hatching with 12.7 % survival. Mean total length and body weight were 65.6 mm and 3.4 g, respectively. Growth of body length (BL), body height (BH), body weight (BW) and head length (HL) as a function of the total length (TL) showed regressional relationships as follows; BL=0.8565 TL+0.0852 ($t^2$=0.9996); BH=0.3207 TL - 0.5052 (($t^2$=0.9641) BW=0.0652 TL2.3508 (($t^2$=0.9925); HL=0.2595 TL - 0.1898 (($t^2$=0.9901)
Post-thawed larval rearing in Pacific oyster Crassostrea gigas was performed to investigate the survival rate with time course in three kinds of larvae cryopreserved. The highest survival rate and larval activity index (LAI) of post-thawed larvae were obtained from the permeation in 0.2 M sucrose and 2.0 M ethylene glycol (EG) at $-1^{\circ}C/min$ in freezing speed showing the survival rates just after thawing of 63.8% in trochophore, 84.1% in D-shaped veliger and 56.3% in early umbo veliger. In post-thawed larval rearing with food supply, the larvae lasted their lives until 24 hours in trochophore, 75 hours in D-shaped veliger and 57 hours in early umbo veliger. The results suggested that each larval stage post-thawed revealed no more further development to subsequent respective stage.
We investigated the processes of egg and larval developments for aquaculture technique development of seedling production fo the flat oyster, Ostrea denselamellosa. Teo flat oyster of larviparous type was different from the pacific oyser (ovivarous type) because their larvae (trochophore and prodissoconch larvae) in the gill released into the seawater. The process of egg development was observed by artificial fertilization at $25^{\circ}C$, using a dissecting method. The sizes of Unfertilized eggs ranged from 80 to 90 $\mu\textrm{m}$ and fertilized eggs with globule-shape was 90-100 $\mu\textrm{m}$. The Polar body appeared after fertilization and egg cleavage began within 1 hour, reaching the blastula stage after 10 hours. The trochophore in the gill appeared 2-3 days after fertilization and grew to the prodissoconch larvae (130 140 $\mu\textrm{m}$) having a complete shell after 1-2 days. The shell of prodissoconch larvae grew to 205 220 $\mu\textrm{m}$ after 10 hours, and then they became umbo stage larvae showing oval in shape. The velum of umbo stage larvae was degenerated about 17-20 days after fertilization and grew into a pediveliger with a developed foot, at this time, the shell length size was 320 360 $\mu\textrm{m}$.
In 1991, specimens of the arkshell, Scapharca broughtonii of Arcidae(Ptriomorphia, Mollusca) were collected from bottom culture bed at Namhae Island in Korea. The chromosomes were examined in the colchicinetreated cells of trochophore larva based on the air-drying method. Diploid number of the chromosome was 38 which were classified as metacentrics(pairs 5, 8, 13), meta or submetacentrics(pairs 6, 7), submetacentrics(2, 3, 9, 10, 12, 15, 16, 17, 18, 19) and subtelocentrirs(pairs 1, 4, 11, 14). No telocentric chromosome was observed.
Variations in expressions of unique genes during oogenesis and early embryogenesis of a tubiculous polychaete were studied by determining the extents of gene transcriptions by sequential DNA-RNA molecular hybridizations. The genes which had been activated in the early stages of oogenesis (previtellogenesis) were gradualy suppressed during the subsequent stages of oogenesis. The transcripts that had been synthesized upto the stages examined were utilized and degraded throughout the vitellogenic stages, and thus, the amount of the transcripts remaining in the fully-grown oocytes was much smaller than that of the previtellogenic oocytes. During the post-fertilization period new genes were transcribed even in the 4-8 cell stage embryos, and the extent of transcription of new genes continues to increase at least upto the trochophore stage.
Develoment precess and characteristics of eggs of the geoduck clam, Panope japonica are reporting in this study. Eggs and sperm were excised from gonad, artificially fertilized in an aquarium, reared under various temperature regimes, and record and record the larval period and the time need to reach a certain larval stage from ferilization. Unfertilized eggs of P. japonica appeared to be oval with a mean diameter of $70\mu$m and they became spherical after fertilization. The eggs of P. japonica can be classified as demersal. At a constant water temperature of $ 11^{citc}C$, it took 4 hours form fertilization to become four-cell stage, two days to become trochophore larvae, three days to become D-shape larvae, twenty-three days to become umbo stage, and thirty-six days to become fully grown veliger ready form settlement. A negative correlation was observed between the water temperature and the larval period of P. japonica. From fertilization to D-shape larvae, it took five days at 8$^{\circ}C$, while it was only two days to become D-shape larvae at $ 17^{citc}C$. Time required to D-shape larvae from fertilization was proportional to temperature, and the relationships were expressed as follows : To 8-cell stage, 1/t=0.0209 w-0.1167 (r=0.9967) To blastula stage, 1/t=0, 0055 w-0.0192 (r=0.9825) To trochophore stage, 1/t=0.0034 w-0.0155 (r=0.9907) To D-shape larvae stage, 1/t=0.0014 w-0.0023 (r=0.9843) (t, time in hours ; w, water temperature) Bioligical minimum temperature for egg development was calculated as 3.82$^{\circ}C$ in average.
The tolerance evaluation for abalone Haliotis discus hannai embryos was performed using different concentrations of cryoprotective agents (CPAs): dimethyl sulfoxide, ethylene glycol and propylene glycol added to 0.2 M sucrose, respectively. 4-cell, trochophore and veliger were exposed in each CPA with different concentration for 10, 20 and 30 minutes of immersion time. Developmental rates were increased with decreased concentration of every CPA and decreased immersion time, and differed from types of CPA. Developmental rates of veliger in all the CPAs were higher than those of 4-cell and trochophore. The developmental rates and larval activity indices in ethylene glycol were comparatively higher than those in other CPAs and the effective CPA and its concentration for the cryopreservation of the abalone embryos was suggested as 2.0 M ethylene glycol with equilibration time of 30 minutes.
To find out the desirable cryoprotectant for cryopreservation of bivalve trochophores, four types of cryoprotectant were tested with trochophores of the pearl oyster (pinctada fucata martensii) generally used in the pearl production in Korea. Each cryoprotectant (dimethyl sulfoxide, ethylene glycol, glycerol and 1,2-propanediol) was mixed with 0.2 M sucrose to make final concentrations of 0.01, 0.1, 1.0 and 2.0 M. The trochophores were immersed in each preparation, waiting for 10 minutes to reach equilibration and cryopreserved in the liquid nitrogen (-l96$^{\circ}C$). Survival rate of trochophores thawed after cryopreservation increased as the media concentration increase. However, a few number of the trochophores seemed to be damaged with the efflux of cell inclusions. Our study rsults indicate that desirable cryoprotectants for cryopreservation of pearl oyster trochophores are 1.0~2.0 M dimethyl sulfoxide and ethylene glycol : 82.8~97.4% of the trochophores cryopreserved with these media survived after thawing.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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