A culture system for lactating rat mammary acini was evaluated, where the primary indicator of performance was lactose secretion, measured by a sensitive bioluminescence assay. Lactose secretion was reduced by half (p<0.01) over the first 6 h of culture by overnight feed withdrawal (FW) from tissue donors but was sensitive to increased glucose concentration in the culture media (p<0.001) up to 30 mM. Lactose production of cells from fed donors over the first 6 h in culture in 30 mM glucose was 8.9 fmol/cell/h - a rate calculated to be about half that in vivo. No significant difference was shown in lactose secretion by cells from fed or FW rats over 6-24 h. Lactose secretion was 3.6 fmol/cell/h by cells from fed animals in 40 mM glucose concentration media over the 6-24 h culture period. Addition of insulin to the culture media had no effect on rates of lactose secretion while addition of prolactin and hydrocortisone, with or without insulin, significantly (p<0.001) decreased lactose production over both 0-6 h and 6-24 h culture periods. Lactose synthesis in vitro was significantly enhanced by aeration of the media during collagenase digestion of mammary tissue (p<0.05). No improvement in lactose secretion was effected by shaking of cells during culture, Matrigel coating of culture dishes or change in cell density over a range up to 2.5 million cells per ml.
This experiment was conducted to determine the effects of trophoblastic vesicles (TV) and estradiol-17$\beta$ on the development in vitro of rabbit embryos. Thirty matured female rabbits were treated with PMSG followed by HCG injection and mating. Embryos were recovered with D-PBS (Dulbecco's Phosphate Buffered Saline) after superovulation, and normally developed to two-to four-cell embryos were used in the subsequent in vitro culture. Basal medium was Medium-199 su, pp.emented with 1.5% bovine serum albumin. Embryo on Day 5 after mating (Day 0) was cut into two or three pieces to remove the embryonic disc. Each piece of tissue was cultured for 24 hours at 37$^{\circ}C$ in 0.5 mlMedium-199 in 5% CO2. During culture, peices of trophoblastic tissue changed into spherical vesicles which were used for co-culture. These spheres were called trophoblstic vesicles. Two-to four-cell embryos were cultured for 4 days in Medium-199 in the absence or presence of trophoblastic vesicle, and two-to four-cell embryos cultured with varing concentration (0, 0.1, 1, 10ng/ml) of estradiol-17$\beta$ for 4 dyas. Culture vessels used were watch glass for coculture with trophoblastic vesicles and micortube for estradiol-17$\beta$ infusion. Compared with the Medium-199 alone as basal culture medium, more blastocysts (46.7% vs 15.1%; P<0.01) and morulae (84.4% vs 56.6%; P<0.05) were developed in the co-culture with trophoblastic vesicles. Estradiol-17$\beta$ infused in culture medium was not effective for embryo development to blastocysts (78.3% in control, 50.0% in 0.1ng/ml, 61.5% in 1ng/ml and 64.4% in 10ng/ml) and also to morulae (91.3% in control, 84.2% in 0.1ng/ml, 92.3% in 1ng/ml and 91.1% in 10ng/ml). Compared with the watch glass culture mehotd, more (P<0.01) blastocysts were developed in microtube culture (78.3% vs 56.6%) and more (P<0.01) morulae in microtube culture (91.3% vs 56.6%).
세균 감염에서 적절한 항생제를 선택하려면 배양검사가 매우 중요하다. 저자들은 복부 연조직 감염의 농양을 혈액배양병을 사용하여 시행한 배양검사에서 Actinomyces radingae와 Clostridium ramosum이 배양된 증례를 경험하여 보고하고자 한다. 이전에 건강하였던 13세 남자 환자가 배꼽주변에 발생한 통증, 발적 및 발열을 주소로 응급실에 내원하였다. 환아는 복부 수술 및 외상의 병력은 없었다. 컴퓨터 단층 촬영에서 배꼽주위에 농양을 동반한 피부 연조직염이 확인되었고 선천성 기형은 없었다. 초음파 유도 흡인을 하여 8.5 mL의 화농성 농양이 흡인되었고, 농양은 혈액배양병을 이용하여 배양하였다. 농양 배양검사에서 A. radingae와 C. ramosum이 확인되었다. 감염증의 원인이 드문 세균일 가능성이 있는 경우 농양 배양을 할 때 일반적인 농양배양의 방법 보다는 혈액배양병을 사용하는 것이 원인균이 분리될 가능성을 높이고 더 빨리 확인할 수 있을 것으로 사료된다.
타가수정작물인 옥수수, 진주조, 메밀의 약 또는 조직배양기술의 향상을 위한 유전자형 및 문제점들을 찾아내어 개선하기 위하여 1988년 작물시험장 약 및 조직배양 연구실에서 실시한 주요연구결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 옥수수 약배양에서 FR1141/FR16 교잡종이 N6배지에서, Fla 2BT 73/S 6013 교잡종은 5$^{\circ}C$에서 7일간 저온전처리를 한 후 MS배지에 치상하였을 때 callus가 형성되었으나 27 공시 교잡종의 전체 37,450 약중에서 단지 두 개만이 callus가 형성되었다. 2. 옥수수 수원 19호의 미숙배를 MS 배지에 치상하였을 때 모두 callus가 형성되었으며 이 callus로부터 녹색체 분화율은 8.6%이었다. 3. 옥수수 수원 99호 등 20품종의 미숙웅수배양에서는 FR1141/FR16, B68/A116N//KS15, KS16/KS17, Ga209/DN578, SDB126/Ga209 교잡종 등에서 callus 형성율이 비교적 높았다. 4. 진주조$\times$Napier grass 종간교잡종의 조기배양에서 간의 조기ㅐ양에 적합한 절간신장부위의 절편크기가 2.5~4.0mm 이었고 callus 형성율이 50~100%로 비교적 높았다. 5. 메밀 신농 1호 식물체 분화율은 27%이었다. Epicotyl에서 유도한 callus에서 1개 식물체가 분화하였다. 6. 타가수정작물인 옥수수, 진주조, 메밀의 유전자형$\times$배지 및 환경 상호작용이 있어 유전자형에 따라서 약 및 조기배양반응이 크게 달랐다.
Currently, lasers are one of the most popular light sources in use for medical treatment. Many studies on low power lasers are being done in cell culture or through animal tests and most report different findings, making it difficult to verify their true effects. There are shifts in trends of studies from laser and LED that are expensive and generate heat problem to LED that are economically effective and safe. Its near infrared rays can penetrate deep into skin or muscle, up to 23 cm, without causing thermal damage or impairing neighboring tissues. This study verified the performance and effectiveness of an LED irradiator that was designed to emit similar wavelengths to that of a laser and thus could be used instead of a low level laser therapy in experiments on animals. And then, each experiment was performed to irradiation group and non-irradiation group for NTacSam:SD tissue cells. MIT assay method was chosen to verify the cell increase of two groups and the effect of irradiation on cell proliferation was examined by measuring 590nm transmittance of ELISA reader. As a result, the cell increase of NTacSam:SD tissue cells was verified in irradiation group as compared to non-irradiation group. The fact that specific wavelength irradiation has an effect on cell vitality and proliferation is known through this study.
Experiments initiated 30 years ago to obtain selectable markers have led to a series of studies of Trp biosynthesis and anthranilate synthase (AS) the control enzyme using largely plant tissue cultures since they have experimental properties that can be readily exploited. Enzymological and compound feeding studies provided evidence that AS is the control point in the Trp biosynthesis branch and that altering the AS feedback control by the selection of mutants resistant to the Trp analog 5-methyl-tryptophan (5MT) can lead to the overproduction of this important amino acid. Plants regenerated from these Trp overproducing lines of most species also had high free Trp levels but Nicotiana tabaum (tobacco) plants expressed the feedback altered AS only in cultured cells and not in the regenerated plants. further tests by transient and stable expression of the cloned promoter for the naturally occurring tobacco feedback-insensitive AS, denoted ASA2, confirmed the tissue culture specific nature of the expression control. The 5MT caused by the expression of a feedback-insensitive AS from tobacco has been used to select protoplast fusion hybrids with several species since the resistance is expressed dominantly. Recently the ASA2 gene has been used successfully as a selectable marker to select transformed Astragalus sinicus and Glycine max hairy roots induced by Agrobactetium rhizogenes. These results show that the ASA2y-subunit can interact with the y-subunit of another species to form active feedback-insensitive enzyme that may be useful for selecting transformed cells. Plastid DNA transformation of tobacco has also effectively expressed ASA2 in the compartment in which Trp biosynthesis is localized in the cell.
고밀도 저수고형의 성공적인 왜화재배를 위한 사과 왜성대목인 M.9 T-337의 대량증식체계를 확립하기 위하여 실험한 결과를 요약하면 다음과 같다. 초기 생장점 배양은 채취한 경정조직을 ascorbic acid와 citric acid를 각각 100 mgL$^{-1}$와 150mgL$^{-1}$로 혼합한 용액에 30분간 전처리한 다음, IBA 0.1 mgL$^{-1}$, GA 0.5 mgL$^{-1}$와 sucrose 30 gL$^{-1}$가 첨가된 MS 액체배지에서 50 rpm으로 2주간 진탕배양한 후, 한천 8 gL$^{-1}$가 첨가된 동일조성의 MS 배지에서 배양하는 것이 신초형성에 가장 좋았다. 발근은 증식된 신초를 1주일간 Hormex 1,000배 액이 첨가된 1/2 MS 기본배지에 IBA 0.5 mgL$^{-1}$, sucrose 30 gL$^{-1}$ 등이 함유된 배지에서 50 rpm으로 진탕배양한 다음 Hormex를 제외한 동일 조성의 한천배지에 옮겨 배양하였을 때 배양된 모든 유묘로부터 정상적인 발근을 유도할 수 있었다.
This study was intended to examine whether dehydroepiandrosterone (DHEA) and dietary fat level or source could modulate glutathione utilizing detoxifying system activity and the cytosolic NADPH generation in rat liver. Male Sprague-Dawley rats were fed semipurifed diet containing either 2%(w/w) corn oil (low level of corn oil diet: 5 ca% of fat) 15% corn oil (high level of corn oil diet: 31 cal% of fat) or 13% sardine oil plus 2% corn oil(high level of fish oil diet: 31 cal% of fat) for 9 weeks. Half of the rats in each diet group were fed a diet supplemented with 0.2% DHEA (w/w). DHEA administration increased plasma total cholesterol level in low corn oil diet-fed rats. The high fish oil diet significantly decreased plasma total cholesterol level compared to the high corn oil diet. Plasma triglyceride level was not significantly changed by DHEA administration and dietary fat level and source. Fasting plasma glucose level was increased by DHEA administration and fish oil diet. Glucose 6-phosphate dehydrogenase activity in liver tissue was significantly increased by DHEA administration and high fat diet, especially fish oil diet. Malic enzyme activity in liver tissue was significantly increased by DHEA administration and high fat diet, especially fish oil diet. Malic enzyme activity in liver tissue was significantly increased by DHEA administration. DHEA suppressed the glutathione peroxidase, glutathione-dependent enzymes compared to the low corn oil diet, while fish oil diet elevated the activity of glutathione peroxidase and glutathione reductase compared to corn oil diet. These results suggest that DHEA administration and high level of corn oil diet may suppress the cellular detoxifying system activity through reduction of glutathione utilization, while the fish oil diet did not show these effects.
Purpose: Skin and soft tissue defect is one of the major challenges faced by plastic surgeons. Adipose derived stromal cells, which can be harvested in large quantities with low morbidity, display multilineage mesodermal potential. Therefore, adipose derived stromal cells have been met with a great deal of excitement by the field of tissue engineering. Recently, Adipose derived stromal cells have been isolated and cultured to use soft tissue restoration. In order to apply cultured cells for clinical purpose, however, FDA approved facilities and techniques are required, which may be difficult for a clinician who cultures cells in a laboratory dedicated to research to utilize this treatment for patients. In addition, long culture period is needed. Fortunately, adipose derived stromal cells are easy to obtain in large quantities without cell culture. The purpose of this study is to present a possibility of using uncultured adipose derived stromal cells for wound coverage. Methods: Seven patients who needed skin and soft tissue restoration were included. Five patients had diabetic foot ulcers, 1 patient got thumb amputation, and 1 patient had tissue defect caused by resection of squamous cell carcinoma. The patients' abdominal adipose tissues were obtained by liposuction. The samples were digested with type I collagenase and centrifuged to obtain adipose derived stromal cells. The isolated adipose derived stromal cells were applied over the wounds immediately after the wound debridement. Fibrin was used as adipose derived stromal cells carrier. Occlusive dressing was applied with films and foams and the wounds were kept moist until complete healing. Results: One hundred to one hundred sixty thousand adipose derived stromal cells were isolated per ml aspirated adipose tissue. All patients' wounds were successfully covered with the grafted adipose derived stromal cells in a 17 to 27 day period. No adverse events related to this treatment occurred. Conclusion: The use of uncultured adipose derived stromal cells was found to be safe and effective treatment for wound coverage without donor site morbidity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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