This research aims to develop the multiple channel electrochemical DNA chip using microfabrication technology. At first, we fabricated a high integration type DNA chip array by lithography technology. Several probe DNAs consisting of thiol group at their 5-end were immobilized on the gold electrodes. Then target DNAs were hybridized and reacted. Cyclic voltammetry showed a difference between target DNA and control DNA in the anodic peak current values. Therefore, it is able to detect a plural genes electrochemically after immobilization of a plural probe DNA and hybridization of non-labeling target DNA on the electrodes simultaneously. It suggested that this DNA chip could recognize the sequence specific genes.
Nguyen, Hoang Hiep;Yi, So Yeon;Woubit, Abdela;Kim, Moonil
Applied Science and Convergence Technology
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제25권3호
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pp.61-65
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2016
Here, the rapid detection of Salmonella typhimurium by a portable surface plasmon resonance (SPR) biosensor in which the beam from a diode laser is modulated by a rotating mirror is reported. Using this system, immunoassay based on lipopolysaccharides (LPS)-specific monoclonal anti-Salmonella antibody was performed. For the purpose of orientation-controlled immobilization of antibodies on the SPR chip surface, the cysteine-mediated immobilization method, which is based on interaction between a gold surface and a thiol group (-SH) of cysteine, was adopted. As a result, using the portable SPR-based immunoassay, we detected S. typhimurium in the range from 10^7 CFU/mL to 10^9 CFU/mL within 1 hour. The results indicate that the portable SPR system could be potentially applied for general laboratory detection as well as on-site monitoring of foodborne, clinical, and environmental agents of interest.
Peroxiredoxins are cysteine-dependent peroxide reductases that group into 6 different, structurally discernable classes. In 2011, our research team reported the application of a bioinformatic approach called active site profiling to extract active site-proximal sequence segments from the 29 distinct, structurally-characterized peroxiredoxins available at the time. These extracted sequences were then used to create unique profiles for the six groups which were subsequently used to search GenBank(nr), allowing identification of ~3500 peroxiredoxin sequences and their respective subgroups. Summarized in this minireview are the features and phylogenetic distributions of each of these peroxiredoxin subgroups; an example is also provided illustrating the use of the web accessible, searchable database known as PREX to identify subfamily-specific peroxiredoxin sequences for the organism Vitis vinifera (grape).
A protease, actinidin, was isolated from Cheju kiwi fruit Actinidia chinesis. The enzyme was purified about 8.5 fold with the yield of 25% by column chromatographies of DEAE-Toyopearl and Sphadex. G-100. Purified enzyme gave a single protein band on polyacrylamide gel electrophoresis and its molecular weight estimated by SDS-PAGE was about 27, 000. The optimum pH and temperature were 7.0 and 4$0^{\circ}C$, respectively. This enzyme was stable at the ranges of pH 5.0~9.0 and below 5$0^{\circ}C$. It was also found that Fe+2, Fe+3, and Na+ ions increased enzyme activity, whereas Hg+2 and Co+2 ions decreased. The enzyme was inhibited by phenylmercuric acetate and leupeptin, which indicated that active center of the emzyme had thiol-group. The enzyme reaction followed the Michaelis-Men-ten dkinetics with the Km value of 0.32 mM for casein.
Various $3{\alpha}$, $5{\alpha}$-cyclocholestan-6${\beta}-yl$ ethers were synthesized from solvolysis reactions of cholesteryl tosylate. ${3\alpha}$, $5{\alpha}$-Cyclocholestan-6${\beta}-yl$ sulfides were the sole products when cholesteryl tosylate was solvolyzed in thiol solvents. Diol solvolysis products were derivatized to aromatic esters, and nuclear magnetic resonance spectroscopic method was used to show that aromatic rings can approach C-18 methyl group and the side chain.
Synthesis of (lR,5S,6S)-6-[(lR)-1-hydroxyethyl] -2-[(3S,5S)-5-(2-ethoxycarbonyl-1-moxy(hydroxy)iminoethyl)pyrrolidine-3-ylthio]-1-methylcarbapen-2-em-3-carboxylic acids (10a,l0b) were described. Methyl(2S,4S)-4-tritylthio-1-(allyloxycarbonyl)pyrrolidine-2-carboxyla late (I) was prepared from trans-4-hydroxy-L-proline with (2S,4R)-abs olute configuration as starting material. (2S,4S)-1-allyloxycarbonyl-2-(2-ethoxycarbonyl-hydroxy(methoxy )iminoethyl)-4-mercapto- pyrrolidines (6,7) were obtained from the tritylthio compound (I). (lR,5S,6S)-6-[(lR)-1-hydroxyethyl]-2-[(3S,5S)-5-(2-ethoxycarbonyl-1-methoxy(hydroxy)imino-ethyl)pyrrolidine-3-ylthio]-1-methylcarbapem-2-em-3-carboxylic acids (10a,10b) were obtained by the coupling reaction with carbapenem diphenylphosphates (8) and pyrrolidine-thiol moiety (6,7). Their in vitro antibacterial activities against both Gram-positive and Gram-negative were tested. Compounds ( 10a,10b) showed potent antibacterial activity except pseudomonas aerusinosa.
Adenosine deaminase (ADA)의 여러 기질과 억제물질의 반응 속도론적 상수가 Aspergillusoryzae의 세포내 효소인 ADA의 활성자리에 어떻게 부착하고 어떤 요인을 필요로 하는지를 알기위해 측적되어졌다. kcat/$K_m$값에 의하면 조사된 기질로 작용하는 화합물 중에 3'-deoxyadenosine이 가장 좋은 기질로 작용하는 것으로 밝혀졌다. 몇 개의 유사체가 억제물질로 조사되었는데 purine riboside가 $3.7{\times}10^{-5}$M의 값 $K_i$값을 가지고 가장 강한 억베물질로 나타났다. Adenine은 기질로도 억제물질로도 작용을 못하므로 adenine의 N-9 위치의 ribose가 효소에 부착하는데 중요하다는 것을 시사하고 있다. 또 ADA는 6-chloropurine riboside(6-CPR)의 dechlorination을 촉매화하여 inosine과 Cl이온을 생성한다. 6-CPR의 ADA에 대한 기질 특이성은 정상 기질인 adenine의 0.86%로 측정되었다. ADA의 경쟁적 억제물질인 purine riboside는 비슷한 $K_i$값을 가지고 dechlorination도 억제하므로 deamination과 dechlorination 반응은 효소의 부착자리를 공유하고 있다고 생각되어진다. SH기에 작용하는 화합물중 수은제인 p-chloromercuribenzoate(PCMB), mersalyl acid, $HgCl_2$는 효소의 deamination 반응을 억제했다. Mersalyl acid에 의해 활성이 억제된 ADA는 thiol reagent인 dithiothreitol이나 2-mercaptoethanol에 의해 활성이 회복되지만 PCMB에 의해 억제된 효소는 회복되지 않았다. 각 수은제들이 억제물질로 작용할 때 $K_i$값과 억제양상이 측정되었는데 모두 경쟁적 방해를 보였다. $K_i$값은 10mM 인산완충용액에서 측정한 것이 100 mM 인산완충용액에서 측정한 것보다 훨씬 낮아 인산기가 기질이 아니어도 효소의 부착에 큰 영향을 미치는 것을 보여주고 있다.
The objective of this study was to investigate the effects of thiol compounds with bovine oviduct epithlial crlls(BOEC) co culture on development and intracellular glutathione(GSH) concentrations of bovine embryos derived from IVM /IVF oocytes. In experiment 1 and 2, embryos developed to 2~8 cell stage after in vitro fertilization were co-cultured with BOEC in CR$_1$aa with or without $\beta$-mercaptoethanol($\beta$-ME) and cysteamine. The percentage of embryos that developed to morulae and blastocysts in 0,10, 25 and 5O$\pi$M $\beta$-ME with BOEC was 48.1, 64.0, 72.9 and 75.9%, respectively. Twenty-five and 5O$\pi$M $\beta$-ME groups were significantly higher than in 0 and 1O$\pi$M $\beta$- -ME groups(P$\pi$M cysteamine with BOEC was 50.0, 53.2, 72.0 and 66.7%, respectively. Fifty $\pi$M cysteamine group was significantly higher than any other groups (P$_4$aa with 0 and 5O$\pi$M $\beta$-ME or cysteamine were 68.5, 77.8, 78.7 and 80.0pM, respectively. Fifty $\pi$M $\beta$-ME group was significantly higher than that of control(P<0.05), but cysteamine group was not. Cell numbers of blastocysts were not difference in all experimental groups. These experiments indicate that $\beta$-ME and cysteamine with BOEC co-culture can affect the development and intracellular GSH concentrations of bovine embryos produced by IVM /IVF docytes.
This research aims to develop the multiple channel electrochemical DNA chip using microfabrication technology. At first, we fabricated a high integration type DNA chip array by lithography technology. Several probe DNAs consisting of thiol group at their 5-end were immobilized on the sold electrodes. Then target DNAs were hybridized and reacted. Cyclic voltammetry showed a difference between target DNA and control DNA in the anodic peak current values. Therefore, it is able to detect a plural genes electrochemically after immobilization of a plural probe DNA and hybridization of non-labeling target DNA on the electrodes simultaneously. It suggested that this DNA chip could recognize the sequence specific genes.
The transfer assembly (or transfer printing) technique is a promising method for fabricating multi-scale structures on various substrates including semiconductors and polymers, and has been applied to fabrication of flexible devices with superior performance to conventional organic flexible devices. The mechanical behaviors of the structures fabricated by the transfer assembly is a very important information for design and reliability evaluation purpose, but the measurement of the behaviors is difficult since their critical-dimensions are very tiny. In this study, Au films with nano-scale thickness were fabricated on a silicon substrate and their mechanical properties were measured using micro-tensile test. The Au films on the silicon substrate were then transferred to a PDMS substrate using the transfer assembly technique. Self-assembled monolayer (SAM) with a thiol group was used to enhance the transfer of Au films, and the mechanical behaviors were characterized using wrinkle-based test. The test results from micro-tensile and wrinkle-based test are compared to each other, and their implication to the transfer assembly technique is discussed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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