Kim, Young-Ok;Lee, Jung-Kee;Sunitha, Kandula;Kim, Hyung-Kwoun;Oh, Tae-Kwang
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
제9권4호
/
pp.469-474
/
1999
Thermoactinomyces sp. E79 produced two types of thermostable alkaline proteases extracellularly. A minor protease was separated from a major protease by using DEAE-column chromatography. This enzyme was purified to homogeneity by ammonium sulfate and DEAE-Sepharose ion-exchange chromatography. The purified minor protease showed different biochemical properties compared to the major protease. The molecular mass of the purified enzyme was estimated by SDS-PAGE to be 36 kDa. Its optimum temperature and pH for proteolytic activity against Hammarsten casein were $70^{\circ}C$ and 9.0, respectively. The enzyme was stable up to$75^{\circ}C$ and in an alkaline pH range of 9.0-11.0. The enzyme was inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and $Hg^{2+}, indicating that the enzyme may be a cysteine-dependent serine protease. In addition, the enzyme cleaved the endoproteinase substrate, succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p- nitroanilide, and the $K_m$ value for the substrate was 1.2 mM.
Thermostable protease is very effective to improve the industrial processes in many fields. Two thermostable extracellular proteases from the culture supernatant of the thermophilic fungus Chaetomium thermophilum were purified to homogeneity by tractional ammonium sulfate precipitation, ion-exchange chromatography on DEAE-Sepharose, and Phenyl-Sepharose hydrophobic interaction chromatography. By SDS-PAGE, the molecular mass of the two purified enzymes was estimated to be 33 kDa and 63 kDa, respectively. The two proteases were found to be inhibited by PMSF, but not by iodoacetamide and EDTA. The 33 kDa protease (PRO33) exhibited maximal activity at pH 10.0 and the 63kDa protease (PRO63) at pH5.0. The optimum temperature for the two proteases was $65^{\circ}C$. The PRO33 had a $K_m$ value of 6.6mM and a $V_{max}$ value of $10.31{\mu}mol/l/min$, and PRO63 l7.6mM and $9.08{\mu}mol/l/min$, with casein as substrate. They were thermostable at $60^{\circ}C$. The protease activity of PRO33 and PRO63 remained at 67.2% and 17.31%, respectively, after incubation at $70^{\circ}C$ for 1h. The thermal stability of the two enzymes was significantly enhanced by $Ca^{2+}$. The residual activity of PRO33 and PRO63 at $70^{\circ}C$ after 60min was approximately 88.59% and 39.2%, respectively, when kept in the buffer containing $Ca^{2+}$. These properties make them applicable for many biotechnological purposes.
두엄에서 분리한 Thermoactinomycese sp. E79는 탈지 대두박(defatted soycean meal)을 특이적이로 분해하는 내열성 alkaline 단백질 분해효소를 생산한다. 이 효소를 생산하기 위한 환경인자를 조사하였는데 배지의 초기 pH가 6에서 8까지는 유사한 균체농도를 얻을 수 있었고 pH10에서는 단백질분해효소의 발현이 되지 않았다. 탄소원은 수용성 전분을 이용할 경우 최적의 값을 보여 9.2U/mL의 효소역가를 얻었고 포도당을 탄소원으로 사용한 경우 단백질분해효소의 발현이 억제되었다 최적의 효소발현을 위해 tryptone을 세포성장에 soytone을 단백질 분해효소 생산에 가장 적합한 질소원으로 선택하였다. 호기성 세균인 Thermoactinomycese sp. E79의 산소요구성으 알아보기 위해 산소전달속도를 달리하여 발효인자를 결정하였고 volumetric oxygen transfer coefficient 가 1.93$\times$102 hr-1 일 때 균체농도 6.58 g/L 효소역자 43.0 U/mL 의최대값을 보였다 또한 효소역가를 증강시키기 위해 200mg/L의 humic acid를 첨가한 경우 비첨가 대조구에 비해 단백질 분해효소 역가는 1.64배 세포성장은 1.77배 증가하였다.
대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
/
pp.331.2-331.2
/
2002
Actinomycetes CS0707 has been isolated in soil sample from location in the Jeju province. Korea, and produces thermostable extracellular proteases. Actinomycetes CS0703 showed the highest protease activity at late exponential phase when grown in OSYM medium (oatmeal 2.0%, soybean meal 1 %, dried yeast 1 %, mannitol 1 %) at $48^{\circ}C$. Three forms of protease(Ta-1, TA-2 and Ta-3) were fractionated by Ultrogel AcA 54 column chromatography, and further purified through ammonium sulfate fractionation, ultramembrane filtration, and DEAE-sepharose CL-6B column chromatography. (omitted)
Kim, Hyung-Kwoun;Kim, Kee-Hyun;Lee, Jung-Kee;Bae, Kyung-Sook;Sung, Chang;Oh, Tae-Kwang
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
제4권2호
/
pp.113-118
/
1994
A bacterial strain NS-83 isolated from soil was able to produce an extracellular thermostable protease. The strain was identified as Pseudomonas aeruginosa based on its morphological and physiological characteristics. A thermostable protease from this strain has been purified to homogeneity as judged by SDS-PAGE and isoelectric focusing. The purification procedures included hydrophobic interaction, ion exchange, and gel filtration chromatography. The $M_r$ and the pl of the enzyme were 32,000 and 5.9, respectively. The optimal pH at 55$^{\circ}C$ and the optimal temperature at pH 7.0 were 8.0 and 60$^{\circ}C$, respectively. The D-values of the enzyme at 60, 65, and 70$^{\circ}C$ were 22, 2.1, and 0.75 hrs, respectively. The enzyme activity was significantly inhibited in the presence of 1 mM o-phenanthroline or EDTA, suggesting that the enzyme is metalloprotease. The $K_m$, and $V_{max}$ for Hammarsten casein were found to be 3.2 mg/ml and 0.918 unit/ml, respectively. These enzymatic properties were similar to those of elastase produced from P. aeruginosa IFO 3455, but the enzyme was clearly different from the reported elastase, in respect to $Ca^{++}$ effects on enzyme-thermostability. This property, together with amino acid composition analysis, confirmed that the enzyme differs from the known P. aeruginosa elastase.
Media optimization for the production of thermostable protease specifically hydrolyzing defatted soybean meal (DSM) from Bacillus licheniformis NS70 was performed by two methods, one-at-a-time method and response surface methodology (RSM). The best carbon source and nitrogen source for the protease production were lactose and DSM, respectively. The maximum protease production estimated by RSM was 606 U/L at 1.11% lactose and 0.43% DSM, the value of which was nearly consistent to the experimental value of 599 U/L. Yeast extract suppressed the protease production. The medium pH was slightly increased at the beginning stage of fermentation, and it tended to decrease after 8 hours. The optimal pH for the protease production was 7.2 in the batch fermentation.
가정에서 제조된 된장 16점으로부터 $60^{\circ}C$에서 성장하는 Bacillus속 균주 63주를 분리하였으며 이로부터 내열성 protease를 생산하는 1개 균주를 선발하였다. 분리균의 형태적, 생화학적 특성과 16S rRNA 유전자서열을 조사한 결과 Bacillus licheniformis로 확인되었다. 분리균의 배양상등액은 반응온도 $60-65^{\circ}C$와 pH11에서 최대 protease 활성을 보였으며, $60^{\circ}C$에서 30분간 열처리한 후에도 87%의 protease 활성을 유지하였다. 질소원, 탄소원, 금속이온, 인 등의 배지성분이 protease 생산성에 미치는 영향을 조사한 결과 유당과 soytone peptone이 분리균의 효소 생산을 증가시키는 탄소원과 질소원으로 확인되었다. 분리균은 말기대수기 이후부터 protease를 생산하기 시작하였으며, 유당 (3%), soytone peptone (1.5%), $MgSO_4$ (0.1%), $K_2HPO_4$ (0.03%)와 $KH_2PO_4$ (0.03%)로 구성된 최적화 배지에서 배양시간이 28시간일 때 protease의 생산성이 최대 550 U/ml에 이르렀다.
A thermophilic bacteria showing proteolytic activity against defatted soybean was isolated from soil. It was identified as Bacillus amyloliquefaciens based on its morphological and physiological characteristics. The Bacillus amyloliquefaciens NS 15-4 was cultivated at 50$\circ$C by rotary shaking in a medium containing defatted soybean. An extracellular protease from this strain was purified to homogeneity by ammonium sulfate precipitation, ion exchange, and hydrophobic interaction chromatographies. The molecular weight of the enzyme was estimated to be approximately 30,000 by SDS-PAGE and the N-terminal amino acid sequence of the enzyme was turned out to be AQSVPYGISQIKAPA. The optimum temperature and pH for the enzyme reaction were 60$\circ$C and 11, respectively, and its thermostability was increased by the addition of calcium ion. The enzyme was inactivated by phenylmethylsulfonylfluoride, suggesting it be a serine protease. Comparing with other commercial proteases, the enzyme showed relatively high proteolytic activity against defatted soybean, a water-insoluble protein substrate.
Kim, Seon-Ah;Son, Hong-Joo;Kim, Keun-Ki;Park, Hyun-Chul;Lee, Sang-Mong;Cho, Byung-Wook;Kim, Yong-Gyun
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
/
제22권2호
/
pp.83-93
/
2011
Biochemical and enzymatic characterization for extracellular protease isolated from Cordyceps militaris cultivated on rice bran medium was investigated. C militaris produced proteolytic enzymes from 10 days after inoculation, maximum enzyme production was found at 25 days. The optimum temperature and pH of proteases production was at $25^{\circ}C$ and pH 7.0, respectively. The protease activity was observed in the four peaks (Pro-I, Pro-II, Pro-III, and Pro-IV) separated through Sephadex G-100 column chromatography. The separated protease was optimally active at $25^{\circ}C$. Optimum pH of the protease was between 7 and 8. Enzyme was also stable over at $30-80^{\circ}C$. The enzyme was highly stable in a pH range of 4-9. Protease activity was found to be slightly decreased by the addition of $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Fe^{2+}$ and $Cu^{2+}$, whereas inhibited by the addition of $Ca^{2+}$ and $Co^{2+}$ Protease activity was inhibited by protease inhibitor PMSF. On the other hand, the partially purified protease was investigated on proteolytic protease activity by zymogram gel electrophoresis using three substances (casein, gelatin and fibrin). Four active bands (F-I, FII, F-III, and F-IV) of fibrin degradation were revealed on fibrin zymogram gels. Both of F-II and FIII showed caseinolytic, fibrinolytic and gelatinolytic activities in three gels. Thermostability, pH stability, and pH-thermostability of the enzyme determined the residual fibrinolytic activity also displayed on fibrin zymogram gel. The only one enzyme (F-II) displayed over a broad range of temperature at $30-90^{\circ}C$. The FII displayed fibrinolytic activity in the pH range 3-5, but was inactivated in the range of pH 6-11. The F-I and F-III showed enzyme activity in the pH range of 6-11. In the pH-thermostability, the F-II only kept fibrinolytic activity after heating at $100^{\circ}C$ for 10, 20 and 30 min at pH 3 and pH 7, respectively. On the other hand, the F-II was retained activity until heating for 10 min under pH 11 condition. By using fibrin zymogram gel electrophoresis, extracellular fibrinolytic enzyme F-II from C. militaris showed unusual thermostable under acid and neutral conditions.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.