Thi-Phuong Nguyen;Tang Van Duong;Thai Quang Le;Khoa Thi Nguyen
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제34권8호
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pp.1680-1687
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2024
The diverse pharmacological properties of edible bird's nest (EBN) have been elucidated in recent years; however, investigations into its antibacterial effects are still limited. In the present study, we explored the antibacterial activity of a peptide-rich extract of EBN against Staphylococcus aureus, a notorious pathogen. The EBN extract (EEE) was prepared by soaking EBN in 80% ethanol for 2 days at 60℃. Biochemical analyses showed that peptides at the molecular weight range of 1.7-10 kDa were the major biochemical compounds in the EEE. The extract exhibited strong inhibition against S. aureus at a minimum inhibitory concentration (MIC) of 125 ㎍/ml and a minimum bactericidal concentration (MBC) of 250 ㎍/ml. This activity could be attributed to the impact of the extract on cell membrane integrity and potential, biofilm formation, and reactive oxidative species (ROS) production. Notably, the expression of biofilm- and ROS-associated genes, including intercellular adhesion A (icaA), icaB, icaC, icaD, and superoxide dismutase A (sodA), were deregulated in S. aureus upon the extract treatment. Our findings indicate a noteworthy pharmacological activity of EBN that could have potential application in the control of S. aureus.
임상가검물에서 생화학 검사와 항생제 감수성 검사를 통하여 45주의 Staphylococcu aureus를 분리하여 역학적 연구를 위한 형별 분류로써 항생제 감수성 검사, bacteriophage typing,효소중합 연쇄반응 등을 실시하였으며, methicillin 내성과 관련이 있는 mecA 유전자를 검출 및 역학적 변별력이 있는 가변지역의 중합효소증폭반응을 실시하여, 약제 내성과 관련된 구조 유전자의 발현 양상을 비교하여 특정 유전자 배열의 상동성을 밝히고자 하였다. 45주의 Staphylococcus aureus중에서 mecA 유전자 양성주는 30주였으며, 그 중에서 26주가 methicillin에 내성을 보였다. 약제 내성양상에 따라 9개의 antibiogram으로 분류되었으며, SA6을 제외한 균주에서 penicillin, oxacillin, gentamicin 및 chloramphenicol 에서는 높은 내성을 보였으며, SAl3, SAl4 및 SA27에서는 rifampin에 내성을 보였다. 27주에서 bacteriophage 형별 분류가 가능하였으며, Iytic group III가 12주로 가장 많았다. mecA 유전자와 mec관련 가변부위의 polymerase chain reaction을 실시한 결과 모든 methicillin resistant Staphylococcus aureus 에서는 533 bp의 증폭 band가 관찰되었으나, methicillin 감수성 균주에서는 증폭된 band가 관찰되지 않았다. mec관련 가변부위의 polymerase chain reaction에서는 200 bp에서 600 bp사이에 분포하여 4개의 유형으로 분류되었으며, 410bp인 C형이 10균주로 가장 많았다. C형 가변부위의 DNA sequence에서 40 bp가 반복되는 dru sequence를 관찰할 수 있었으며, 이러한 dru sequence는 4 unit가 직접적으로 중복됨을 알 수 있었다.
본 연구에서는 보육시설 실내공기에서 분리된 식중독 균주의 독소 유전자 분포와 항생제 내성을 분석하여 보육시설 실내공기에 의한 식중독 발생을 사전 예방하고 식중독 발생 시 적절한 치료를 위한 기초자료를 제공하고자 하였다. 어린이집 실내공기에서 분리된 Staphylococcus aureus 16주, Bacillus cereus 37주를 실험대상으로 하였다. S. aureus와 B. cereus 독소 유전자는 PCR 방법으로 검출하였다. 항생제 감수성 실험은 Clinical and Laboratory Standard Institute의 디스크 확산법에 따라 실험하였다. S. aureus 16 균주 중 11 균주(68.6%)에서 seg와 sei 독소 유전자가 검출되었다. B. cereus 37 균주 모두에서 nheA와 nheB 독소 유전자가 검출되었다. B. cereus 독소 유전자 패턴은 총 12개로 나타났으며 nheA-nheB-nheC 독소 유전자가 가장 중요한 패턴으로 나타났다. S. aureus 16 균주의 항생제 감수성실험 결과 ampicillin과 penicillin 항생제에 93.8%, 87.5% 내성을 나타내었으나 methicillin resistance Staphylococcus aureus와 vacomycin resistance Staphylococcus aureus는 검출되지 않았다. B. cereus 37 균주의 항생제 감수성 실험 결과 ampicillin과 penicillin 항생제에 100% 내성을 나타냈었다. 이러한 결과를 종합하여 볼 때 보육시설 실내공기에 오염된 S. aureus와 B. cereus에 의한 식중독을 발생을 예방하기 위하여 주기적인 환기와 공기 질 관리가 필요한 것으로 판단되었다.
1994년에서 2005년 사이 부산지역의 임상검체와 건강인의 비강에서 분리된 Staphylococcus aureus의 coagulase 혈청형의 변화를 조사하였다. 총 715균주에서 methicillin 내성 S. aureus (MRSA)는 임상균주로 408주였으며, 나머지 307주는 methicillin 감수성(MSSA) 균주로서, 8종(I-VIII)의 coagulase 혈청형이 분리되었다. MRSA 균주에서 가장 분리율이 높은 coagulase 혈청형은 II형(54.3%, 222/408)이었으며, 다음으로 IV형(24.7%), III형(10.9%), V형(5.2%)순으로 나타났으며, MSSA 균주에서는 VII형(30.9%, 95/307), IV형(22.2%), V형(22.2%), II형(7.1%)의 순으로, 균주간에 큰 차이를 나타내었다. 분석 연도별 coagulase 혈청형을 비교한 결과 큰 변화가 관찰되었다. MRSA 균주에서 혈청형 V형은 1997년까지 분리되지 않았으나, 2005년에는 18.5% (20/108)로 증가되었고, III형은 1994년 27.0% (31/115)에서 2005년 0.9% (1/108)로 감소되었다. 또한 MSSA 균주에서도 유사한 경향을 나타내었으나, II형의 경우 2005년도 균주에서는 분리되지 않았다. 이와 같은 결과에서 S. aureus의 coagulase 항원성 전이에 따른 혈청형의 변화를 확인하였다.
본 연구에서는 붉나무 열매 Ethanol extract(ET)과 Ethyl acetate fraction(EA) 및 Butanol fraction(BT)을 천연보존제로서의 활용 가능성을 평가하기 위하여 항균활성을 측정 하였다. 항균활성은 Staphylococcus aureus(S. aureus), Staphylococcus epidermidis(S. epidermidis), Escherichia coli(E. coli), Pseudomonas aeruginosa(P. aeruginosa), Candida Albicans(Candida. A)에 대하여 Paper disc법으로 생육저해환과 최소저해농도(MIC)를 평가하였다. Paper disc법으로 생육저해환을 측정한 결과 ET, EA, BT 모든 시료에서 S. aureus, S. epidermidis, E. coli, P. aeruginosa 균주에서 생육저해환이 관찰되었고 BT에서는 Candida. A 균주에 대한 생육저해환이 추가로 관찰 되었다. MIC 측정결과 EA 시료가 S. aureus, S. epidermidis, E. coli, P. aeruginosa 대하여 가장 낮은 농도를 보였다. 따라서 본 연구의 결과는 붉나무 열매 추출물이 다양한 항균스펙트럼을 가지고 있어 화장품에서 천연보존제로 활용 가능성이 높다고 사료 된다.
This study was carried out to investigate the antibiotic resistance pattern of Enterococcus spp. and Staphylococcus aureus (S. aureus) isolated from chicken feces. All isolates showed high resistance to erythromycin (E) and tetracycline (TE). Of the 63 Enterococcus faecalis (E. faecalis) isolates, 73.0% were resistant to E and 98.4% to TE. Of the 44 Enterococcus faecium (E. faecium) isolates, 50.0% were resistant to E and 95.5% to TE. Of the 52 S. aureus isolates, 57.6% were resistant to E and 96.2% to TE. The prevalence of two and three drugs resistance pattern were 28.6% and 17.5% of E. faecalis, 40.9% and 25.0% of E. faecium and 38.5% and 23.1% of S. aureus, respectively. The multiple resistance pattern to six drugs was observed in 1 E. faecalis isolates, and five drugs resistance pattern were seen in 1 E. faecalis, 1 E. faecium and 1 S. aureus isolates. The prevalence of resistant organisms in Korea probably reflects lack of proper antibiotic policy resulting in prolonged and indiscriminate use of antimicrobial agents.
국내에서 사육중인 말에서 채취한 시료로부터 Stapylococcus aureus를 분리 동정한 결과 39.2%(58/148)의 분리율을 나타내었다. S. aureus의 혈장응고효소 생산능 시험에서는 98.3%가 양성반응을 나타내었고 신선 혈장의 희석농도는 1:2에서 가장 높은 양성반응을 나타내었다. 본 연구에서 최종 동정된 S. aureus의 기본적인 생화학 성상은 일반적으로 알려져 있는 S. aureus의 특성과 유사한 결과를 얻을 수 있었으나, urease test의 경우 전체 균주의 73% 만이 양성 결과를 나타내어 균주별로 다양한 반응 양상을 관찰 할 수 있었다. 또한 34종의 substrate에 대한 분해 양상에 대한 검사 결과 fructose, maltose, ${\alpha}$-hydroxy butyric acid, thymidine-5'-mono phosphate, uridine-5'-mono phosphate 등의 substrate에 대해서는 모든 균주가 이용능력을 가지고 있었지만 ribose, sorbitol, xylose, xylitol 등의 substrate에 대해서는 모든 균주가 기질 이용능력을 가지고 있지 않는 것으로 확인되었다. 그리고 PCR에 의한 S. aureus를 동정한 결과 108bp 크기의 band를 확인하였다. 국내 말에서 분리한 58주의 S. aureus에 대한 약제 내성 양상을 조사한 결과 spectinomycin, sulfonamides, erythromycin, tetracyclin, ciprofloxacin, neomycin, enofloxacin, penicillin 등의 약제에 높은 저항성을 나타내었다.
Objectives : This experimental study was performed to investigate the continuous anti-bacterial potency of Jinpi-san on cultivation of Staphylococcus species(S. aureus, S. epidermidis) that induce eye disease. Methods : Minimal inhibitory concentration(MIC) was measured by dropping to 50${\mu}$l diluted Jinpi-san(100%, 10%, 1%, 0.1%) on S. aureus, S. epidermidis that were cultivated from 2 to 6 days. Anti-bacterial potency was measured by the size of inhibition zone with change of volume(20${\mu}$l, 30${\mu}$l, 40${\mu}$l, 50${\mu}$l). Results : 1. Anti-bacterial potency of Jinpi-san on S. aureus was appeared in 100% and increased on 6 days. Anti-bacterial potency with change of volume was increased in propotion to increase volume. Anti-bacterial potency of Jinpi-san on S. aureus was appeared continuous. 2. Anti-bacterial potency of Jinpi-san on S. epidermidis was appeared in 100%, 10%, 1% on 2 days and in 100%, 10% on 6 days. In 100% Jinpi-san, Anti-bacterial potency of 6 days was increased, in 10%, Anti-bacterial potency of 2 days was increased, in 1%, Anti-bacterial potency of 6 days was disappear. Anti-bacterial potency with change of volume was increased in propotion to increase volume except for 20${\mu}$l of 6days and increased on 6 days, but bacteria was increased. Anti-bacterial potency of Jinpi-san on S. epidermidis wasn't appeared continuous. Conclusions : Anti-bacterial potency of Jinpi-san on cultivation of S. aureus was showed continuous, but on cultivation of S. epidermidis was not showed continuous.
본 연구에서는, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)와 면역크로마토그래픽 기법을 결합하여 Staphylococcus aureus 검출을 위한 면역스트립을 제작하였다. 면역스트립은 4개의 서로 다른 기능을 가진 멤브레인을 이용하여 만들어졌다. 니트로셀룰로오스 멤브레인은 항체와의 결합력이 높기 때문에, 포획항체를 고정화하였고, 다공성 멤브레인들을 통하여 모세관 현상으로 인해 시료흐름을 유도하였다. 효소반응에 의해 생성된 발색신호는 디지털카메라와 자체 제작된 소프트웨어를 이용하여 정성, 정량분석 하였다. 최적의 분석조건 하에서 30 min 이내에 $2.7{\times}10^4{\sim}2.7{\times}10^7CFU/mL$ 범위의 S. aureus 농도를 측정할 수 있었다.
본 연구는 S. aureus에 대한 tuberostemonine의 항균 및 항생물막 효과에 대하여 확인하였다. S. aureus에 대한 tuberostemonine의 생장 저해 효과가 없음을 확인하였으나, crystal violet 염색법과 CLSM 이미지 측정을 통해 tuberostemonine이 유의한 S. aureus 항생물막 효과 가지는 것을 알 수 있었다. S. aureus의 생물막 형성과 분해 관련 유전자인 icaA와 agrA의 발현은 tuberostemonine를 처리하였을 때 유의미하게 각각 감소 또는 증가하는 것으로 나타났다. 따라서 본 연구에서 생물막 형성 저해 및 분해 효과가 확인된 천연화합물인 tuberostemonine은 S. aureus의 내성 발생 위험이 적은 새로운 항생물막제제로서 사용가능 할 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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