Decrease in the amount of cotyledonary spermidine in Glycine max under anaerobic conditions related to an increase in spermidine dehydrogenase. Under the same conditions, no enzymatic activity of diamine oxidase was observed. Exposure of Glycine max both to spermidine and 1,3-diaminopropane under anaerobic conditions resulted in a decrease in spermidine contents. Correlated with the decrease in spermidine contents, there was a drastic increase in spermidine dehydrogenase. The molecular weight of the purified enzyme estimated by Sephacryl S-300 gel column and SDS gel electrophoresis were 130,000 dalton and 65,000 dalton, respectively, indicating that the enzyme is a dimer. The optimal pH for activity was 9.3. The $K_m$ value for spermidine was 0.61 mM. Neither metal ions nor polyamine and derivatives affected enzymatic activity, but the enzyme was inhibited by DTNB, NEM and PCMB, suggesting that a cysteine residue of the enzyme is associated with or involved in enzyme activity. To our knowledge, this is the first report describing properties of the enzyme from plants. Considered together, the data in this paper indicate that both spermidine and 1,3-diaminopropane, novel activators, enhance the spermidine dehydrogenase activity and control the intracellular spermidine contents.
The transport of spermidine into a cyanobacterium, Synechocystis sp. pec 6803, was characterized by measuring the uptake of $^{14}C$-spermidine. Spermidine transport was shown to be saturable with an apparent affinity constant ($K_m$) value of $67{\mu}M$ and a maximal velocity ($V_{max}$) value of 0.45 nmol/min/mg protein. Spermidine uptake was pH-dependent with the pH optimum being 8.0. The competition experiment showed strong inhibition of spermidine uptake by putrescine and spermine, whereas amino acids were hardly inhibitory. The inhibition kinetics of spermidine transport by putrescine and spermine was found to be noncompetitive with $K_i$ values of 292 and $432{\mu}M$, respectively. The inhibition of spermidine transport by various metabolic inhibitors and ionophores suggests that spermidine uptake is energy-dependent. The diminution of cell growth was observed in cells grown at a high concentration of NaCl. Addition of a low concentration of spermidine at 0.5 mM relieved growth inhibition by salt stress. Upshift of the external osmolality generated by either NaCl or sorbitol caused an increased spermidine transport with about 30-40% increase at 10 mosmol/kg upshift.
Spermidine은 spermine의 전구체로 역할을 하는 putrescine로부터 합성되는 polycation의 한 형태이다. 최근에 spermidine는 수명연장에 중요한 역할을 하는 하나의 polyamine으로 알려져 있다. Hydroxyl radical, superoxide 및 hydrogen peroxide와 같은 활성산소(ROS)는 노화뿐만 아니라 다양한 병원성 과정에서 관여한다고 보고되고 있다. DPPH radical, $H_2O_2$ 및 hydroxyl radical에 대한 spermidine의 소거활성과 산화적 스트레스와 관련된 DNA oxidation에 대한 보호 효과가 in-vitro에서 평가되었다. Spermidine은 500 ${\mu}M$ 이상에서 DPPH radical와 $H_2O_2$에 대한 소거 효과를 보여주었다. 특히 활성산소종 중에서 spermidine는 hydroxyl radical에 대한 효과가 탁월하였다. 뿐만 아니라, spermidine는 500 ${\mu}M$에서 DNA oxidation에 대해서도 뚜렷한 보호 효과를 나타내었다. 더욱이 사람피부섬유아세포에서 superoxide dismutase와 같은 항산화 관련 단백질의 발현이 대조군과 비교시 spermidine 존재 하에 증가하였다. 이상의 결과로부터 spermidine은 암, 노화 및 염증을 포함하는 활성산소와 관련 있는 질병들을 예방하기 위한 항산화제로 이용될 수 있을 것이다.
Auranofin is a US Food and Drug Administration (FDA)-approved anti-arthritis medication that functions as a thioredoxin reductase inhibitor. Spermidine, a polyamine present in marine algae, can exert various physiological functions. Herein, we examined the synergistic anticancer activity of auranofin and spermidine in hepatocellular carcinoma (HCC). Combined treatment with auranofin and spermidine suppressed cell viability more efficiently than either treatment alone in HCC Hep3B cells. The isobologram plotted by calculating the half maximal inhibitory concentration (IC50) values of each drug indicated that the two drugs exhibited a synergistic effect. Based on the analysis of annexin V and cell cycle distribution, auranofin and spermidine markedly induced apoptosis in Hep3B cells. Moreover, auranofin and spermidine increased mitochondria-mediated apoptosis by promoting mitochondrial membrane potential (Δψm) loss. Auranofin and spermidine significantly increased reactive oxygen species (ROS) production in Hep3B cells, and the blocking ROS suppressed apoptosis induced by spermidine and auranofin. In addition, auranofin and spermidine reduced the expression of phosphorylated phosphatidylinositol-3 kinase (PI3K) and protein kinase B (Akt), and PI3K inhibitor accelerated auranofin- and spermidine-induced apoptosis. Using ROS scavenger and PI3K inhibitor, we revealed that ROS acts upstream of auranofin- and spermidine-induced apoptosis. Collectively, our study suggests that combination treatment with auranofin and spermidine could afford synergistic anticancer activity via ROS overproduction and reduced PI3K/Akt signaling pathway.
The rapid senescence of detached Chinese cabbage leaf discs in darkness is first manifested by a sharp rise in malondialdehyde content (indicated by distruption of membrane structure), then by a rise in peroxidase activity and a decrease in catalase activity, and ultimately by chlorophyll degradation. These changes in parameters besides the catalase activity during senescence were delayed by application of spermidine. Especially, 10-4M spermidine almost completely arrested chlorophyll degradation after incubaton over 5 days. Spermidine reduced the amount of ethylene produced by senescing leaf discs. Additionally, it also reduced IAA-induced ethylene production. Calcium ion (1mM, 10mM) supplied together with the spermidine diminished the spermidine action, indicating probable involvement of an initial ionic attachment mechanism. These results suggest that spermidine can be used as an anti-senescence agent for plants and that this agent may stabilize membrane structure through interaction with the negatively charged loci on the membrane and exert the influence during senescence.
뇨 중에 Putrescine, Spermidine 및 Spermine benzoyl chloride를 유도체화제로 처리한 다음 HPLC법으로 정량하였다. ${\mu}$-Bondapak $C_{18}$ 컬럼과 methanol/$H_2O$(50/50v/v)를 사용하여 정상인 및 자궁암 환자의 뇨 중에서 Putrescine, Spermidine 및 Spermine을 역상법으로 분석한 결과 암환자의 경우 정상인에 비해 이들 polyamine이 현저한 증가를 보였다.
Kim, Young-Chul;Sim, Jae-Hoon;Choi, Woong;Kim, Chan-Hyung;You, Ra-Young;Xu, Wen-Xie;Lee, Sang-Jin
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제12권2호
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pp.59-64
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2008
In our previous study, we found that spermine and putrescine inhibited spontaneous and acetylcholine (ACh)-induced contractions of guinea-pig stomach via inhibition of L-type voltage- dependent calcium current ($VDCC_L$). In this study, we also studied the effect of spermidine on mechanical contractions and calcium channel current ($I_{Ba}$), and then compared its effects to those by spermine and putrescine. Spermidine inhibited spontaneous contraction of the gastric smooth muscle in a concentration-dependent manner ($IC_{50}=1.1{\pm}0.11mM$). Relationship between inhibition of contraction and calcium current by spermidine was studied using 50 mM high $K^+$-induced contraction: Spermidine (5 mM) significantly reduced high $K^+$ (50 mM)-induced contraction to 37${\pm}$4.7% of the control (p<0.05), and inhibitory effect of spermidine on $I_{Ba}$ was also observed at a wide range of test potential in current/voltage (I/V) relationship. Pre- and post-application of spermidine (5 mM) also significantly inhibited carbachol (CCh) and ACh-induced initial and phasic contractions. Finally, caffeine (10 mM)-induced contraction which is activated by $Ca^{2+}$-induced $Ca^{2+}$ release (CICR), was also inhibited by pretreatment of spermidine (5 mM). These findings suggest that spermidine inhibits spontaneous and CCh-induced contraction via inhibition of $VDCC_L$ and $Ca^{2+}$ releasing mechanism in guinea-pig stomach.
To study e(feces of Korean Binseng (Parfax ginseff C. A. hfeyer) total saponin fraction on spermidine and spermine metabolism in rat reproductive systems, we administrated the saponin fractation to rats for 2 years. Then, we determined the activities of S-adenosylmethionine decarboxylase (SAMDC), the quantitation of the enzyme protein and the amounts of spermidine and spermine contents In prostate and testis. In young sexually immature stage, administration of Korean ginseng saponin fraction showed no effect on SAMDC activities. The stimulatory effect on the activities of SAMDC gradually increased and reached maximal activities in test groups of prostate and testis at sexually mature stage. The amounts of SAMDC protein in test groups were paralleled by the changes of SAMDC activities in test groups, indicating that all of the increased activity occurring in administration of ginseng saponin fraction was not due to the activation of SAMDC activity but to the Increase in enzyme protein. However, the spermidine and spermine contents of test groups showed small increase in compared to that of control groups. From these results, we suggest that administration of ginseng saponin fraction alter the spermidine and spermine metabolism in sexually mature and aged reproductive systems in rats.
에틸렌 생합성 효소인 ACC oxidase 유전자인 CAO cDNA가 antisense 방향으로 도입된 형질전환 담배 식물체는 endogenous한 NtACO의 발현 및 에틸렌 생합성이 모두 억제되었다. 또한 폴리아민 생합성 효소인 SAMDC의 유전자 발현 및 효소 활성이 증가하였고 spermidine 함량이 증가하였다. 이러한 결과는 에틸렌 생합성의 감소로 인하여 세포 내 폴리아민 함량의 변화가 유도되는 경쟁적 관계로 spermidine이 증가하였고 이것은 SAMDC의 발현 및 활성 증가를 유도하였다고 여겨진다. 또한 이들 형질전환 식물체는 담배 역병균에 대한 저항 효과 뿐만 아니라 PR 단백질의 유전자들의 발현양이 증가하였는데 이는 에틸렌 감소에 유도되는 폴리아민 중에서도 spermidine의 증가가 PR 단백질의 유전자들의 발현을 촉진시키고 그 결과 병원균 감염에 대한 저항성을 유도하는 기작이 작동한 것으로 여겨진다. Spermidine을 합성하는데 중요하게 작용하는 SAMDC의 활성을 억제하는 MGBG를 처리한 경우에는 PR1a 발현이 억제된 경우에서 이 기작의 가능성을 확인하였다. 결론적으로 병원균 감염에 대한 과정에서 spermidine의 생합성이 증가하게 되면 PR 단백질 등 스트레스 저항성 관련 단백질들이 유도되어 스트레스 저항성을 높일 수 있을 것으로 사료된다.
인삼에서의 polyamine의 함량과 그 합셩효소에 대해서 관찰하였다. 종자의 경우 주된 polyamine은 putrescine이며, 성장하면서 putrescine이 증가되고 있다. ADC는 putrescine의 증가와 같은 경향으로 활성도가 증가되고 있다. ADC는 활성도는 putrescine에 의해서는 별 영향을 안 받았으나, spermidine은 10%내외, spermine은 20% 정도의 inhibition을 받았다. 주로 많았으며, spermidine도 상당히 많았다. 오히려 putrescine이 상대적으로 적었다. 부위별로는 잎이 가장 많고 엽병, 뿌리 그리고 줄기 순으로 분포한다. ADC의 활성도 polyamine 함량과 같은 경향을 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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