Jeon, Hyeong-Kyu;Park, Hansol;Lee, Dongmin;Choe, Seongjun;Kang, Yeseul;Bia, Mohammed Mebarek;Lee, Sang-Hwa;Sohn, Woon-Mok;Hong, Sung-Jong;Chai, Jong-Yil;Eom, Keeseon S.
Parasites, Hosts and Diseases
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제56권3호
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pp.275-280
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2018
In the present study, we identified a Spirometra species of Myanmar origin (plerocercoid) by molecular analysis using mitochondrial cox1 and nad1 genes, as well as by morphological observations of an adult tapeworm. Spargana specimens were collected from a paddy-field in Taik Kyi Township Tarkwa Village, Yangon, Myanmar in December 2017. A total of 5 spargana were obtained from 20 frogs Hoplobatrachus rugulosus; syn: Rana rugulosa (Wiegmann, 1834) or R. tigrina (Steindachner, 1867). The plerocercoids were used for experimental infection of a dog. After 4 weeks of infection, an adult tapeworm was recovered from the intestine of the dog. Morphologically, the distinct features of Spirometra sp. (Myanmar origin) relative to S. erinaceieuropaei and S. decipiens include a uterine morphology comprising posterior uterine coils that larger than the terminal uterine ball and coiling of the uteri diagonally (swirling) rather than spirally. The cox1 sequences (1,566 bp) of the Myanmar-origin Spirometra species showed 97.9% similarity to a reference sequence of S. decipiens (GenBank no. KJ599679) and 90.5% similarity to a reference sequence of S. erinaceieuropaei (GenBank no. KJ599680). Phylogenetic tree topologies were identical and presented high confidence level of values for the 3 major branches of the 3 Spirometra species in cox1 and nad1 genes. These results indicated that Myanmar-origin Spirometra species coincided with those of S. ranarum and may be considered as a valid species.
자연감염된 뱀의 체내조직에서 적출한 스파르가눔(5-스파르가눔)을 흰쥐와 고양이에 인공 경구감염시켜 12주 후에 흰쥐의 피하조직에서 적출한 스파르가눔(r-스파르가눔)과 고양이의 소장에서 회수한 성충(adult)을 재료로 하여 alkaline phosphatase(Alp)와 acid phosphatase(Acp)의 충체조직내 분포 및 동위효소의 특성을 조사하기 위하여 효소조직화학적 방법과 전기영동법 등을 이용하였다 Alp와 Acp의 조직내 분포는 성충과 유충 모두 외피층과 외피하근층에 많이 분포하였으며 실질근층에서는 거의 분포하지 않았다. 이들 phosphatase는 Acp에 비해 Alp가 더 강하게 양성반응이 나타났다. Alp의 동위효소유형이 5-스파르가눔, r-스파르가눔 성충에서 각각 2개, 2개, 4개가 분리되었고. 이중 분자량 66 kDa 분획이 유충과 성충에서 공통적으로 존재하는 동위효소였다. Acp 동위효소는 s-스파르가눔, r-스파펀가눔, 성충에서 각각 2개. 2개. 3개가 분리되었다. 이 중 130 kDa 분획이 유충과 성충에 공통적으로 존재하는 동위효소이면서 유충의 주분획이었다 IEF에 의해 성충에서 등전점 5.3, 6.5, 7.7, 7.9인 동위효소가 분리되었고. 스파펄가눔에서는 등 전점 7.7, 7.9인 동위효소가 분리되었다. 열에 대한 안정도는 Alp가 $90^{\circ}C$에서 40초경과 후에 완전히 불활성화 되었다 스파르가눔과 성충에 존재하는 Alp 활성의 최적 pH는 10이나 활성범위가 pH 9~10이었고. 최적 온도 활성범위는 40~50$^{\circ}C$이며 $50^{\circ}C$ 이상에서는 활성이 급격히 감소하였다. Alp의 최대활성도(unit)는 5-스파르가눔. r-스파르가눔, 성충에서 각각 22.0, 25.0, 215.0으로 나타났으며. Alp는 유충에 비해 성충의 조직에 존재하는 동위효소들의 활성도라 월등히 높게 나타났다 만손열두조충의 스파르가눔과 성충이 숙주와 기생장소를 달리하지만 phosphatase는 외피층과 외피하근층에 주로 분포하고 있어 기생환경의 변화에 따라 Alp와 Acp의 동위효소들의 활성을 달리하딘로서 숙주환경에 적응한다는 사실을 알 수 있다.
만손열두조충의 스파르가눔(흰쥐에서 적출한 r-스파르가눔, 뱀에서 적출한 s-스파르가눔)과 성충을 재료로 하여 젖산탈수소효소와 말산탈수소효소의 조직내 분포 및 동위효소의 특징을 효소조직화학적 방법과 전기영동뎁으로 조사하였다. LDH와 WH는 외피하근층에서 강한 활성이 나타났으며, 실질조직(parenchyma)에서는 약하게 나타났다. 그러나 nH는 스파르가눔의 외피조직 에서도 활성이 나타났으나 성충의 외피조직에는 나타나지 않았다. LDH의 동위효소 유형은 5-스파르가눔, s-스파르가눔과 성충에서 각각 2개, 4개, 2개가 분리되었고, 45 kDa의 분회이 공통적으로 주분획이었으며 sinH의 동위효소는 5-스파르가눔, r-스파르가눔과 성충에서 각각 2개, 3개 4개의 분획이 분리되었고, IEF에 의해 성충에 존재하는 4개의 tmH 동위효소 분획의 등전점(Pl)은 각각 6.0, 6.5, 6.7, 7.1이었으며, 이 중 6.0이 주분획이었다. 또 최적 pH는 7이나 활성 범위가 pH 6 ~8이었고. 최적온도는 $40^{\circ}C$였으며, $50^{\circ}C$ 이상에서는 활성이 급격히 감소하였다 mH의 최적 활성도는 s-스파르가눔, r-스파르가눔과 성충에서 각각 19.4, 24.5, 108.0이었다. 위의 결과로 보아, 외피하근층으로 흡수된 양분은 충체 중앙으로 이동하면서 산화분해되며 유충에 비해 성충에서 물질 대사가 활발함을 알 수 있고, 또한 만손열두조충의 스파르가눔과 성충이 숙주와 기생 장소를 달리하지만 기생 환경에 따라 젖산탈수소효소와 말산탈수소효소의 동위효소들이 활성을 달리하므로써 숙주 환경에 적응한다는 사실을 알 수 있다.
The author reported previously on separation of the outer tegument of the spargana (plerocercoids of Spirometra mansoni) using high concentration of urea solution. To determine which layer of the tegument is separated by this method, an electron microscopic analysis has been processed in this study. It was confirmed that the basement layer of the tegument is separated from the parenchyme of the sparganum. In addition, the antigenicity of the separated outer tegument against the human sparganosis patient sera was evaluated. Numerous antigenic proteins, including 16 and 55 kDa proteins, were noticed in the separated tegument; however, there were no diagnostic 31/36 kDa molecules in this tegument. The molecules reactive with the patient sera in the tegument are to be characterized in future studies.
The tegument of tapeworms is known to be composed of an outer syncytial cytoplasm layer which includes microtriches and cytoplasmic organelles (= syncytial layer), and a parenchymatous cytoplasm layer that contains subtegumental cell nuclei (= subtegumental layer) and organelles. In the present study, separation of the syncytial layer of the sparganum, the plerocercoid stage of Spirometra mansoni, was tried using urea as the chemical reagent. Histological sections were prepared to visualize the status of separation after staining with hematoxylin and eosin. The results showed that the syncytial layer of the sparganum tegument which includes microtriches and cytoplasmic organelles were successfully separated from the parenchyma using 3 M urea.
스파르가눔을 흰쥐와 흰생쥐에게 인긍 구강감염을 시켜 감염 2주후부터 숙주의 기생부위에서 충체와 함께 둘레의 조직을 적출하여 동결절편을 만들고 이것을 ABC면역효소표지법과 간접형광항체법 (IFA)으로 항원성분의 분포와 그 추이를 추구한 결과, IgG 항체에 의한 면역반응이 충체의 망상유조직에서 인지되었으며 특히 ABC면역효소표지법에 의하면 유조직 중 수질에서 보다 피질층에서 강한 반응성을 나타났다. 이 중에서도 석회소체가 있는 곳에 염색 반응성이 강하였다. 감염후기에서는 스파르가눔의 외피 (tegument) 내외면과 충체를 둘러 싸고 있는 피낭의 막면, 피막 밖에 있는 섬유성 결합조직과 근조직의 간극에서도 항원성분을 관찰할 수 있다. 특히 결합조직 사이에 분포된 소혈관의 둘레와 현관 외벽에 강한 반응이 나타났다. IgM 항체에 인지된 항원성분도 충체의 유조직층중 피질충에서 강한 반응이 나타났다. 스파르가눔의 추출 조항원성분과 배설분비 항원성분을 SDS-PAGE한 후 nitrocellulose 막에 영동전이하여 IgG, IgM 항체를 유도하는 항원성분을 ABC효소표지 항체 법으로 조사하였다. 스파르가눔의 추출 조항원 성분 중 흰쥐의 IgG 항체에 인지된 항원 성분은 23개이고 IsM 항체에는 15개의 항원성분이 인지되었다. 흰생쥐에서는 IgG 항체로 I6개 항원성분이, IgM 항체에 9개의 항원성분이 인지되었다. 배설분비 항원성분 중 횐쥐의 IgG 항체에 20개 항원성분이, IgM 항체에는 5개의 항원 성분이 인지되었다. 횐생쥐의 IgG 항체에 18개, IgM 항체에 11개의 항원성분이 인지되었다. 조창원성분 중 15개 항원성분과 배설분비 항원성분중 13개의 항원 성분이 흰쥐, 흰생쥐의 IgG 항체에 모두 교차반응이 일어났으며 IgM 항체에 반응한 항원성분중 IgG 항체와도 교차반응이 있었다.
실험적으로 스파르가눔을 프라지콴텔 처치, 감마선 조사 및 기계적 절단을 시행하고 마우스에 경구감염시켜 감염력을 관찰하였다. 스파르가눔은 유혈목이(Rhabdophis tigrina)로 부터 분리 수집한 것 또는 실험감염 마우스로 부터 회수한 것이었으며 마우스는 서울대학교 동물실험실로 부터 공급받은 ICR계이었다. 스파르가눔은 $10{\;}\mu\textrm{g}/ml$ 농도의 프라지콴텔용액(대조군: Tyrode용액에서 4시간 배양)에 넣어 $36^{\circ}C$ 배양기에서 30분, 1, 2 및 4시간 동안 배양한 다음 각 실험군당 4들마리의 마우스에 각각 5마리씩 경구감염시키고 1개월 후에 충체를 회수하였던 바, 각각 평균 80%(대조군), 100%, 80%, 80% 및 76%의 회수율을 나타내었다. 스파르가눔을 $Cs^{l37}$ 감마선으로 10, 30, 50, 75, 100, 150 및 1000 Gy로 조사한 다음 각 군당 2틱마리의 마우스에 각각 5마리씩 경구감염시키고 1개월 후에 충체를 회수하였던 바, 각각 평균 96%(대조군), 100%, 76%, 93%, 77%, 69%, 56% 및 5%의 회수율을 나타내었다. 두절의 전단으로 부터 각각 0.5, 1, 2 및 3 mm 부위를 잘라서 각 군당 4-5마리의 마우스에 각각 5마리씩 경구감염시키고 1개월 후에 충체를 회수하였던 바, 80%, 90%, 70%, 88% 및 90%(대조군)의 회수율을 나타내었다. 이상의 결과로 스파르가눔이 프라지콴텔, 감마선 및 기계적 절단에 대하여 매우 저항성이 높으며 마우스에서의 감염력 및 재생력을 나타내는 부위가 스파르가눔의 두절 앞 끝에 위치함을 알 수 있었다.
A 59-year-old Korean man complained of a painless scrotal hard nodule and weak urine stream. The ultrasound scan revealed a 2.2-cm sized round heteroechogenic nodule located in the extratesticular area. Microscopic hematuria was detected in routine laboratory examinations. On scrotal exploration, multiple spargana were incidentally found in the mass and along the left spermatic cord. On cystoscopy, a 10-mm sized mucosal elevation was found in the right side of the bladder dome. After transurethral resection of the covered mucosa, larval tapeworms were removed from inside of the nodule by forceps. Plerocercoids of Spirometra erinacei was confirmed morphologically and also by PCR-sequencing analysis from the extracted tissue of the urinary bladder. So far as the literature is concerned, this is the first worm (PCR)-proven case of sparganosis in the urinary bladder.
Kim, Jeung Il;Kim, Tae Wan;Hong, Sung Min;Moon, Tae Yong;Lee, In Sook;Choi, Kyung Un;Yu, Hak Sun
Parasites, Hosts and Diseases
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제52권1호
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pp.69-73
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2014
Sparganosis is a parasitic infection caused by the plerocercoid tapeworm larva of the genus Spirometra. Although the destination of the larva is often a tissue or muscle in the chest, abdominal wall, extremities, eyes, brain, urinary tract, spinal canal, and scrotum, intramuscular sparganosis is uncommon and therefore is difficult to distinguish from a soft tissue tumor. We report a case of intramuscular sparganosis involving the gastrocnemius muscle in an elderly patient who was diagnosed using ultrasonography and MRI and treated by surgical excision. At approximately 1 cm near the schwannoma at the right distal sciatic nerve, several spargana worms were detected and removed.
Antigenic components in the crude extracts of Spirometra mansoni plerocercoid were analyzed in early experimental infections and in IgG subclass observed in clinical sparganosis. By IgG immunoblot, sera obtained serially from experimental mice, fed 5 spargana each, were reacted with the crude extracts. Protein bands at 36-26 kDa and 103 kDa showed positive reactions since two weeks after infection. In a differential immunoblot, in which a monospecific antibody against sparganum chymase at 36 kDa was pre-treated, the reactions at 36-26 kDa disappeared, indicating that the sparganum chymase and its degradation products invoked IgG antibody reactions. When 69 patients sera of human sparganosis were examined for their IgG subclass responses, IgG4 levels showed the highest reaction which was followed by IgG 1 The IgG4 antibody also reacted mainly with 36-31 kDa protease. These results indicate that 36 kDa chymase of 5. nansoni plerocercoid is the main antigenic component inducing Ige antibody response in early stage of experimental sparganosis and for specific IgG subclass reactions in human sparganosis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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