An efficient in vitro regeneration protocol for moth bean [Vigna aconitifolia (Jacq.) Marechal] via somatic embryogenesis has been developed. Embryogenic callus cultures were established from the cotyledonary node as explant on semi-solid Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with $0.75mg\;1^{-1}$ 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and $1.5mg\;1^{-1}$ 6-benzylaminopurine (BA) and with various additives ($50mg\;1^{-1}$ ascorbic acid and $25mg\;1^{-1}$ each of adenine sulphate, citric acid and $_L-arginine$). Numerous somatic embryos differentiated on MS basal nutrient medium supplemented with $0.25mg\;1^{-1}$ 2,4-D and $0.5mg\;1^{-1}$ of kinetin (Kin). Sustained cell division resulted in the formation of cell aggregates, which progressed to the globular- and heart-shaped somatic embryos and then, if they differentiated properly, to the torpedo shape and cotyledonary stages. The transfer of embryos onto fresh MS basal medium containing $0.2mg\;1^{-1}$ BA and $2.0mg\;1^{-1}$ gibberellic acid enabled the embryos to achieve complete maturation and germination. More than 80% of somatic embryos were converted into true-to-type fertile plants. In vitro-regenerated plantlets with well-developed roots were successfully hardened in a greenhouse and established in soil.
Somatic embryos were formed from calli obtained from axillary shoots (raised from nodal segments of glasshouse-grown plants under aseptic conditions), internodal segments (from in vitro-raised plants), and root and coty-ledonary leaf segments (from in vitro-raised seedlings) after 8 weeks of initial culture. Embryo formation was the highest (97.33%) from cotyledonary leaf callus on Mura-shige and Skoog's (MS) medium containing kinetin (KN) (3 mg/L). Somatic embryo induction was lesser with different combinations of auxins while it increased to 100% in internodal segment and cotyledonary leaf calli with 6-benzyladenine (BA) (2mg/L) along with 2,3,5-triiodobenzoic acid (TIBA) (2mg/L). The shoots were induced from somatic embryos raised from root, coty-ledonary leaf and internodal segment calli grown on MS medium containing BA in combination with indole-3-acetic acid (IAA). Maximum of 66.67% cultures formed shoots on MS medium containing BA (1mg/L) in combination with IAA (2mg/L). The shoots raised from somatic embryos were rooted on MS medium supplemented with indole-3-butyric acid (IBA) (2mg/L). The plantlets transferred to the field showed 70% survival rate after one year.
Lee, Su Young;Shin, Ju Young;Lee, Young Ah;Ahn, Chang Ho;Kim, Yae Jin;Park, Pil Man;An, Hye Ryun;Lee, Ka Youn;Jung, Hyun Hwan
Korean Journal of Plant Resources
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v.35
no.5
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pp.652-658
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2022
This study was conducted to induce somatic embryogenic callus (SEC) derived from petals in rose. The petal explants of 3 cultivars ('Ice Wing', 'Orange Eye' and 'Pink Beauty') with different flower colors were placed on three types media (MS, SH and WPM) supplemented with 11 mg/L 2,4-D, respectively, and then cultured in the dark for 47 days. Calluses were formed at explants of all three cultivars. Also, 'Ice Wing', which were cultured in the SH as the basal medium, showed the highest callus formation rate. However, somatic embryos were generated from only petal-derived callus of 'Ice Wing', which were induced on the WPM as the basal medium, transferred it to SH basal medium supplemented with 3 mg/L 2,4-D, and 300 mg/L L-proline, and cultured for 5 weeks. The SEC has been proliferated every four weeks at the subculture interval. In addition, as a results of making a comparison of expression of RhSERK3 and RhSERK4, which is used as signal for generation of somatic embryo from callus in rose, between the SEC and petal-derived callus from 'Ice Wing' by RT-qPCR, the former showed 10 times higher RhSERK3 expression and 700 times higher RhSERK4 expression than the latter.
Immature zygotic embryos from immature seeds of Wasabia japonica (cv Dalma) were isolated and cultured on modified MS medium supplemented with 2,4-D, IAA, and BA. Immature zygotic embryos were classified into torpedo shape and cotyledon stage. The highest rates of callus formation were obtained of 1.0mg/L IAA(torpedo stage, 90.0%)and 1.0mg/L 2,4D plus 0.1mg/L BA(cotyledany stage,84.3%). Somatic embryos after 60 days of culture. These numerous somatic embryo could be seperated and subcultured on the same media for further propagation. After 90 days of culture, most somatic embryos were developed well organized embryos which were able to produce into whole plants.
Immature flower buds of 'Desio' carnation were cultured on MS agar medium supplemented with 1 ㎎/L 2,L-D. Embryogenic calli were formed from 5-10% of the buds less than 20 ㎜ in length, but only non-embryogenic calli were produced from explants of shoot apex leaf, internode, and flowere buds larger than 20 ㎜. The same method was applied to 16 cultivars of cut Sower carnation and embryogenic calli were obtained in 7 cultivars. Several embryogenic callus lines were selected and maintained through subcultures over 120 weeks without loss of embryogenic competence. The embryogenic cultures were also proliferated rapidly in liquid agitation cultures using MS medium supplemented with 1mg/L 2,4-D. Numerous embryos were formed on the periphery of the cell aggregates upon transfer to auxin-free MS agar medium. Plantlets were transplanted in potting soil and grown to bloom in six months.
Effective micropropagation system via somatic embryognesis was established for a Phytophthora resistant Aralia elata cultivar. Different kinds of growth regulators were needed to induce embryogenic callus with different explant sources. When leaf explants were used, a combination of 2,4-D, TDZ and L-glutamine was needed, whereas when petiole and root explants needed only 1.0 mg/L 2,4-D. Embryogenic callus induction rate under the optimum culture condition was 75.0%, 67.0% and 83.0% from leaf, petiole and root segment, respectively. Somatic embryo germination and plantlet conversion rate appeared to be influenced greatly by various osmoticums. More than 90% of embryos germinated when treated with sucrose, glucose and maltose. However, the highest conversion rate (72%) was recorded on medium with 2% sucrose only. The converted plantlets grew normally on 1/2MS basal medium, were acclimatized on artificial soil mixture and survived more than 95% in the greenhouse condition. The results suggest that the species can be clonally propagated through in vitro culture system via somatic embryogenesis.
The objective of this study is to establish an efficient celll culture system for somatic embryogenesis in Ostericum koreanum and Angelica purpuraefolia. The highest frequency of embryogenic callus on immature seeds of O. konanum and A, purpuraefolia. was obtained when seeds were cultured on MS medium containing 0.1 mg/L 2,4-D and 0.1 mg/L BA. However somatic embryos were formed directly from the edge of cotyledon and hypocotyl of plant which regenerated on medium supplemented with 0.1-3.0 mg/L NAA. Immature seed explane cultured at 25$\pm$2$^{\circ}C$ after 10 days treatment at 5$^{\circ}C$ produced embryogenic callus and somatic embryos, and these differentiated into whole plane. Addition of glutamine and coconut milk to media did not enhance the frequency of somatic embryogenesis in immature seed cultures of A. purpuraefolia. However in immature seed culture of O. koreanum, the frequency of somatic embryogenesis were increased on media supplemented with glutamine and 10% coconut milk. Especially addition of glutamine to the medium substituted effect of NH$_4$N0$_3$ in constast to coconut milk. The highest frequency of conversion somatic embryos into plantlet was 89.1% on MS basal medium Embryogenic calli were grown vigorously when maintained on medium with 0.01 mg/L 2,4-D and 0.01 mg/L BA.
Kim, Dong-Gun;Kantayos, Vipada;Kim, Dong-Kwan;Park, Heung-Gyu;Kim, Haeng-Hoon;Rha, Eui-Shik;Lee, Sheong Chun;Bae, Chang-Hyu
Korean Journal of Plant Resources
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v.29
no.1
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pp.143-153
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2016
Plant regeneration via organogenesis and somatic embryogenesis was investigated in Korean soybean cultivars including Cheongja 3, Jinpumkong 2, Taekwangkong and Uram. Cotyledon, cotyledon+hypocotyl and hypocotyl segments of 7-day-old seedlings were cultured on MS medium containing various concentration (0, 1, 2 and 4 ㎎/L) of BA and TDZ. The results showed that MS medium supplemented with BA 2.0 ㎎/L yielded the highest shoot formation ratio of 83.3%. In 4 cultivars, Taekwangkong showed the highest ratio of shoot formation. When various sizes of immature cotyledons (S: 1∼ 2 ㎜, M: 3∼5 ㎜, L: 6∼8 ㎜) were tested on MS medium containing 2,4-D 40 ㎎/L for somatic embryogenesis, the optimum size for embryogenic callus induction was 3∼5 ㎜ in length of immature cotyledons. In 4 cultivars, Taekwangkong showed the highest percentage of embryogenic callus induction. The results indicate that Taekwangkong is the best soybean cultivar for plant regeneration via organogenesis and embryogenic callus induction among the 4 cultivars.
Immature ovule of intergeneric $F_1$ hybrid between Platycodon grandiflorum x Codonopsis lanceolata for producing embryogenic callus. somatic embryos and plant regeneration were cultured in vitro on various medium as well as MT(Murashige Tucker)medium treated with different concentration of plant growth regulators. Embryogenic callus induction was highest in the treatment of NAA 0.5 $mg/{\ell}$ and zeatin 0.01 $mg/{\ell}$ added on MT medium, whereas it was lower in treatments with auxins alone. MT medium were more effective in production of somatic embryos from incubated embryogenic callus. Most favorable plant growgh regulator for producing somatic embryos was 2. 4-D 0.5 $mg/{\ell}$ and zeation. BAP 0.01$mg/{\ell}$, but hormone-free and auxins alone were less effective. NAA 0.01$mg/{\ell}$ added with zeation 0.5 $mg/{\ell}$ was effective as high as NAA 0.01 $mg/{\ell}$ alone in normal plant regeneration from somatic embryo.
Ion-pair reverse phase HPLC techniques were used to compare the contents of IAA and IAAsp in the embryogenic and non-embryogenic calli derived from ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) root tissues. The contents of IAA and IAAsp of the embryogenic callus were much higher (7 to 18 X respectively) than those of non-embryogenic callus. There is a distinct fluorescent peak of an unknown component in the HPLC profile of the extract for indolic compounds from non-embryo-genic callus. This distinct difference may be employed as a promising parameter to screen the culture pieces for obtaining the calli with high potential for embryoid formation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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