느타리 버섯 No. 42균주를 5가지 배지에서 연구한 결과, 리그닌 분해효소인 Lac와 MnP는 생산되었으나 LiP는 생산되지 않았다. 실험한 본 균주의 경우 리그닌 분해효소인 Lac와 MnP의 생산에 밀기울이 관여하는 것을 확인 할 수 있었다. 액체배지에서는 GPYW에서 Lac(2.4 U/ml)와 MnP(3.6 U/ml)가 최대 생산됨을 알 수 있었으며 고체배지에서는 WMW에서 MnP(4.0 U/ml)가 최대 생산되었으며 W에서는 Lac(11.0 U/ml)가 최대 생산되었다.
쌀의 쌀눈은 배유에 비해 단백질, 지방, 비타민 B1 등의 영양분을 더 많이 함유하고 있다. 본 연구에서는 식물에서 발현 할 수 있는 p53 플라스미드를 제작하였으며, 여러가지의 배지에서 쌀눈 발아의 최적조건을 확립하였다. p53 플라스미드는 pcDNA-p53 플라스미드에서 p53을 얻어내어 TA 벡터에 subcloning을 한 후 식물 플라스미드인 pGEM-CaMV에 p53을 삽입하여 식물에서 발현 가능한 pGEM-CaMV-p53 플라스미드를 제작하였다. 그리고 효율적인 p53 유전자의 도입을 위하여 최적의 팽윤버퍼의 조성 및 배지의 조건을 확립하였다. 팽윤방법을 통한 유전자의 도입에서 팽윤버퍼는 염과 detergent의 서로 다른 농도로 조성하였지만, 이 버퍼조성 사이에서의 쌀눈 발아율의 유의한 차이는 확인되지 않았다. 또한 팽윤된 쌀눈의 발아를 극대화 시키기 위하여 고체한천배지, 액체 배지, 페이퍼 타올 배지의 3가지 조건에 대해서 발아실험을 진행하였다. 그 결과 고체배지에서의 발아율은 70% 정도로 가장 높고 액체배지에서의 발아율은 20% 정도로 가장 낮았으며, 페이퍼 타올배지에서의 발아율은 60% 정도였다. 앞서 확인한 최적의 발아조건에서 쌀눈에 p53 플라스미드를 도입하였고, 그 결과 쌀눈에서의 human p53 발현을 확인 할 수 있었다. 따라서, 팽윤방법에 의한 쌀눈에서의 효율적인 유전자 발현은 쌀의 새로운 부가가 치를 창출할 수 있을 것이다.
The isolation and culture of protoplasts from hypocotyl-derived calluses of Glycine max (L.) Merr. cv. Jangyeop were obtained by digestion for 6 hrs in an enzyme solution containing 3.5% cellulase, 1.5% macerozyme, 10% sorbitol and 0.1% CaCl2.2H2O at pH 5.8. Newly formed cell wall of protoplasts cultured in MS agar medium containing 10 $\mu$M $\alpha$-naphthaleneacetic acid (NAA) and 32 $\mu$M N6-benzylaminopurine (BAP) could be observed after 24 hrs culture. The first cell division of the protoplasts was observed after 3 days of culture; cell clusters after 2 weeks of culture. When transferred to solid media, the protoplasts formed cell clusters gave rise to proliferating calluses.
Effects of various concentrations of copper in solid fibrous form and methylglyoxal (MG) on phosphorus uptake and growth change of green algae Scenedesmus obliquus were studied. There was significant differences among cultures treated with various concentrations of copper and MG in growth of algae with parameters of cell numbers, photosynthetic rate and cellular morphology, and phosphorus uptake by cell. When the copper in media is treated with 25 mg or 50 mg per 100 ml of Bristol solution, the mean cell number of algae was 15.642${\times}$10$\^$6/ cells$.$ml$\^$-1/ and 12.986${\times}$10$\^$6/ cells$.$ml$\^$-1/, respectively, while those of algae in culture without copper was 18.486${\times}$10$\^$6/ cells$.$ml$\^$-1/. The mean cell area of 2450 ${\mu}$m$^2$, 1894 ${\mu}$m$^2$and 1697 ${\mu}$m$^2$in basic media, basic media with 25 mg of copper and basic media with 50 mg of copper was showed the inhibitory effect of copper on algal growth. The algal growth was stimulated by MG when the culture was treated with 25 mg of copper or without copper, while it was inhibited when the culture was treated with 50 mg of copper. It was considered that there was significant interaction between copper and MG on algal growth. The phosphorus concentration in algal medium treated with 25 mg or 50 mg of copper was 29.435 ppm and 26.224 ppm, respectively, while those of algae in culture without copper was 52.8 ppm, which shows that the application of copper in algal medium can prevent the availability of phosphorus to algal cell.
This study was carried out to reveal optimum conditions for in vitro propagation of 3 Korean native azalea species, Rhododendron mucronulatum, R. yedonese var. poukhanense, and R. shlippenbachii, which are useful for landscape proposes. Seeds and meristems from three azalea species were cultured on 1/2MS, Hyponex, and Anderson media containing growth of regulators benzyladenine(BA) and 2-isopentenyadenosine(2ip). The results were as follows. 1. In the culture of R. schlippenbachii and R. mucronulatum seeds, in vitro seedlings germinated and grew well on he 1/2MS and Anderson media, while R. yedoense var. poukhanense on Hyponex media containing 6.0mg/$\ell$ 2ip. 2. When the meristems of R. mucronulatum were cultured on Andeson media containing 9.0mg/$\ell$ 2ip, the survival rate of meristems was 23.0% in 6 weeks after culture, and the survival rate of R. schlippenbachii was 46.0% o nthe same media containing 12.0mg/$\ell$ 2ip. The survial rate of R. yedoense var. poukhanense was 92.0% onHyponex media containing 0.5mg/$\ell$ BA and 9.0mg/$\ell$ 2ip. When the meristems of R. mucronulatum and R. yedoense var. poukhanense were cultured on Hyponex media containing 12.0mg/$\ell$ 2ip, they showed the most excellent growth. R. schlippenbachii grew well on Anderson media containing 9.0mg/$\ell$ 2ip. When in vitro shoots of R. yedoense var. poukhanense were subcultured to solid medium, they grew well in shoot growth on Hyponex media containing 6.0mg/$\ell$ 2ip.
The rate of growth and production of bioactive substances from Rehmannia glutinosa Liboschitz (Scrophulariaceae) were studied with the variation on the constituents of the culture media. The best growth was observed from MS basal medium containing 3.0 ppm NAA and 2.0 ppm kinetin. Carbohydrates (fructose, glucose and sucrose), phytosterols(${\beta}-sitosterol$, campesterol and stigmasterol) and carotenoid like substances were identified by GC-MS and TLC from the callus mass. However, catalpol was not detected from both solid and cell suspension cultures containing geraniol. Callus cultured Rehmannia glutinosa in the MS basal medium containing 0.1 ppm NAA and 0.1 ppm kinetin become differentiated to root.
This study was carried out to determine the effects of plant growth regulators on cell culture and organogenesis from Sicyos angulatus L. using explants of leaves, stems and cotyledons. Optimal callus induction for S. angulatus was obtained on MS medium with 0.1mg/$\ell$ BA and 2.0mg/$\ell$ 2,4 -D from cotyledons, 0.1mg/$\ell$ BA and 5.0mg/$\ell$ NAA from leaves explants, Optimal media for subculture and growth of S. angulatus callus were 1/2 MS medium with 0.1mg/$\ell$ BA and 1.0mg/$\ell$ 2,4 -D for solid culture, and 0.1mg/$\ell$ 2,4-D for suspension culture. Many adventitious roots with some shoots were formed were formed from leaf and cotyledon explants of S. angulatus during callus induction with optimal combinations of plants growth regulators.
송이균의 환경조건에 따른 생장특성을 구명하고자 송이균을 고체매질을 이용하여 배양하였다. 고체매질에서의 송이균의 생장량은 에르고스테롤 함량을 분석하여 비교하였다. 송이균의 배양에 적합한 고체매질은 펄라이트와 마사토로 나타났으며 곡물 영양분으로는 보리가 우수하였다. 적정화된 고체배지에서 송이균의 생장은 송이균의 접종 후 2주부터 급격히 생장하였으며 8주 경에 최고의 생장량을 나타냈다. 송이균 배양에 적합한 수분함량은 30~70%였으며 부엽토 첨가(10%)가 생장에 더욱 양호하였다. 이러한 결과는 송이산지에서 토양유기물이 적절히 있고 토양수분이 높을 때에 송이균의 생장이 왕성할 것으로 추정할 수 있다. 고체배지에서 송이균사체를 접종 후 2주부터 급격히 생장하였으며 8주 경에 최고의 생장량을 나타냈다. 이러한 고체매질은 앞으로 송이 균사체의 생리연구에 이용될 수 있을 것이다.
균체 생산성 실험과 chitinase 생산성 실험을 비교해 볼 때, chitinase만을 생산하는 조건 에서는 배지성분에 chitin을 첨가해 주는 것이 좋으나, 해충 방제용으로 살균력을 증진시키기 위하여 균체량과 chitinase의 생성량 및 산업적, 경제적 사용이 용이한 배지를 고려할 때에는 쌀겨와 밀기울이 첨가된 배지가 좋은 배지임을 알 수 있었다. 또한 이 배지를 이용하였을 경우 균체는 1X$10^8$ cfu/g, chitinase는 370mU/g로 생산되었으며 생물검정결과 53-64%의 탁월한 살충효과를 확인 할 수 있었다.
본 연구에서는 야생에서 분리한 눈꽃동충하초균의 배양적 특성을 알아보기 위해 배양특성 시험을 수행하였다. $25^{\circ}C$, 습도 60%에서 눈꽃동충하초균을 고체배양한 결과 초기 균사의 직경 12 mm에서 4일차에 균사체 직경이 36 mm 이었으며, 배양 5일차부터 급격한 균사신장이 일어나다가 8일차 이후부터는 생육속도가 서서히 감소되는 경향을 보였다. PDB 액체배지에서 종균배양의 상태와 생육도를 검토한 결과, PMV가 배양일차에 따라 1일차에 1%, 3일차에 4%로 증가하다가 7일차 이후부터는 11%로서 최대의 생육을 나타내었다. 따라서, 균의 질(quality)과 양(quantity)적인 측면에서 7일차 생육이 가장 양호함을 알 수 있었다. GPA, PDA, YM, MCM, Czapek 총 5가지 배지를 사용하여 고체배양을 실시한 결과 균사체 생육이 가장 양호한 배지는 PDA로 나타났다. pH에 따른 눈꽃동충하초 버섯의 생육정도를 알아보기 위해 배지의 pH를 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0으로 달리하여 10일간 배양한 결과 균사체의 직경이 pH 6.0에서 85.0 mm/10일로 가장 양호하였으며, 중성영역보다는 산성영역인 pH 6.0 이하에서는 균사생장과 밀도가 감소하는 경향을 보였다. 동충하초버섯균의 균사생장에 미치는 온도의 영향을 조사한 결과, $25^{\circ}C$에서 균사생장과 밀도가 가장 양호하였다. 접종량에 따른 종균배양의 상태와 생육도를 검토한 결과 접종량 10% 사용시 가장 양호한 결과를 나타내었다. 비이드 첨가에 따른 균사체의 생육 및 형태를 알아보기 위하여 비이드의 크기를 직경 3 mm와 5 mm로 다르게 하여 PDB 배지에서 액체배양한 결과, 3 mm의 비드로 실험한 결과 비이드 첨가 개수가 0개에서 50개로 증가할수록 SED (%)가 31%에서 56%로 증가하여 균체의 생육이 양호한 것으로 나타났다. 비이드 크기는 3 mm보다 큰 5 mm를 첨가하여 배양하였을 때 SED와 PMV 값이 모두 높은 결과를 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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