목초액의 첨가가 고체 및 액체배지에서의 표고 균사생장에 미치는 영향을 조사한 결과, 고체배지에서는 첨가한 목초액의 종류와 표고 균주들간에 다소 차이가 있었는데, 전통식 목초액은 대체로 희석농도 500배 이하에서 균사생장을 억제하였고 1000~2000배에서는 균사생장을 촉진하였으나 기계식 목초액의 경우는 대체로 1000배 이하에서 균사생장을 억제하였고 2000배에서는 촉진하였다. 액체배지의 경우에는 전통식, 기계식 목초액 모두 희석농도 2000배에서 균사생장을 촉진하였고 500배 농도에서 억제하였다. 목초액을 농도별로 첨가한 배지에서 배양한 표고 균주를 참나무 원목에 접종하였을 경우, 산조302호는 2000배, 산림2호 및 3호는 4000배의 희석농도 배지에서 배양한 균주가 목재부후력과 침투력에서 우수하였고, 목재부후력과 침투력의 정도는 비례하였다. 목초액의 처리가 표고재배시 문제가 되는 병원성 균주에 미치는 영향을 비교한 결과, 전통식 목초액은 50배 희석농도에서 푸른곰팡이 균주의 생장을 모두 억제하였고, 기계식 목초액은 균주에 따라 50배~500배 이하에서 균사생장을 억제하였다. 주홍꼬리버섯에 대하여 전통식 목초액은 500배 이하에서 균사생장을 억제하였고, 기계식 목초액은 500배 이하에서 억제하였으며 100배 희석농도에서 80%, 50배에서 100% 억제하였다. 골목의 목초액 농도별 침수처리에 의한 표고 자실체의 생중량 및 건중량은 모든 처리에서 무처리에 비하여 유의적 증가를 보였으나 특히 250배 희석농도에서 가장 효과가 우수하였다. 목초액을 희석 농도별로 처리하여 생산한 버섯을 $10^{\circ}C$에서 10일간 저장한 후에 조직분석기(Texture analyzer)를 사용하여 전단력을 측정한 결과, 250배 희석농도 처리에 의하여 생산된 버섯이 조직감이 가장 우수하였다. 저장 전후의 버섯함수율은 희석농도별로 유의적 변화가 없었다.
Neoagaro-oligosaccharides are produced only by enzymatic degradation of agarose by ${\beta}-agarase.^{1)}$ Neoagaro-oligosaccharides inhibit the growth of bacteria, slow the rate of degradation of starch, are used as low-calorie additives to improve food quality, and have macrophage-stimulating activity. Furthermore, neoagarobiose is a rare reagent that has both moisturizing effect on skin and whitening effect on melanoma $cells.^{2)}$ An agar-degrading marine bacterium was isolated from the sea water at the northeast coast in Cheju island, Korea. The strain was gram negative, aerobic, and motile rod. The 16S rRNA of the strain had the closest match of 98% homology, with that from Agarivorans albus. On the basis of several phenotypic characters and a phylogenetic analysis, this strain was designated Agarivorans sp. JA-1. In solid agar plate, Agarivorans sp. JA-1 produced a diffusible agarase that caused agar softening around the colonies. Agarivorans sp. JA-1 was cultured for 36 hr in marine broth 2216 (Difco, USA) and the supernatant that containing an extracellular ${\beta}-agarase$ was prepared by centrifugation of culture media. The enzyme exhibited relatively strong activity at $40^{\circ}C$ and was stable up to $60^{\circ}C$. Using PCR primers derived from the ${\beta}-agarase$ gene of Vibrio sp., the gene encoding ${\beta}-agarase$ from Agarivorans sp. JA-1 was cloned and sequenced. The structural gene consists of 2931 bp encoding 976 amino acids with a predicted molecular weight of 107,360 Da. The deduced amino acid sequence showed 99% and 34% homology to $agaA^{2)}$ and $agaB^{2)}$ genes for ${\beta}-agarase$ from Vibrio sp., respectively. The expression plasmid for ${\beta}-agarase$ gene of Agarivorans sp. JA-1 is being constructed and the recombinant enzyme will be biochemically characterized.
Enzyme linked-immunosorbent assay (ELISA) for a rapid detection of fungi, Aspergillus and Penicillium genera in food, were developed and their efficiencies were approved by detecting artificially contaminated agricultural commodities. Mice were immunized with partially purified Aspergillus flavus extracellualr polysaccharide (EPS) and lymph node cells of the mice were fused with the myeloma cells for production of monoclonal antibodies. Mab 1G11, one of the antibodies, was selected and purified. A sandwich ELISA was established and its detection limit toward A. flavus EPS was 1mg/ml. Among the 59 strains tested (including 18 species of Aspergillus, 16 of Penicillium, 11 of Fusarium, 1 of Absidia, 2 of Alternaria, 2 of Candida, 2 of Cladosporium, 2 of Geotrichum, 2 of Mucor, 2 of Rhizopus, 1 of Trichoderma), species of Aspergillus and penicillium had a high reactivity with Mab 1G11 even up to 10,000 times dilution of culture broths. The other genera except Cladosporium resinae showed no reactivity, thus Mab 1G11 was specific to the genera of Aspergillus and Penicillium. The epitope of A. flavus EPS against monoclonal Mab 1G11 was on the carbohydrate moiety when 1 to 100$\mu g/g$ A. flavus EPS were put into rice, potato, and mandarin orange, the average recoveries detected by sandwich ELIA were 123, 59, and 76%, respectively. Correlation was found to be linear between the EPS, and mycelium of A. flavus and Penicillium citrinum grown in a liquid medium (r=0.87 and 0.96), and also between the EPS and colony forming unit in solid media of rice of potato (r=0.91-0.99).
가시오갈피의 꽃봉오리 엽병, 줄기, 줄기마디, 뿌리, 꽃대, 잎 등 조직으로 부터 캘러스가 유기 되었으며 캘러스 유기재료로는 꽃봉오리, 엽병, 줄기, 줄기 마디, 뿌리 등이 적합하였다. 캘러스 유기율은 한국산 가시오갈피가 일본산과 러시아산보나 높게 나타났다. 캘러스유기에는 2.4-D와 TDZ조합처리가 효과적이었으며 한국가시오갈피의 엽병, 줄기, 액아, 뿌리절편으로부터 형성된 캘러스에서 배발생 캘러스가 형성되었으며 줄기에서 형성된 캘러스로부터 한국, 일본, 러시아산 가시오갈피 모두에서 배발생캘러스가 형성되었다. 엽병에서 형성된 캘러스로부터 배발생캘러스의 유기율이 가장 높았으며 2.4-D 1mg/l 처리가 가장 효과적이었다. 액체배지에서의 체세포배의 생장에는 생장조절물질을 첨가하지 않은 MS기본배지가 적합하였다. 기내에서 잎과 뿌리 분화가 이루어지고 건실하게 자란 식물체를 온실에 옮겨 순화하였을 경우 99.1%의 생존율을 보였다.
상수공급계 모래여과수에 존재하는 종속영양 호기성 세균을 NA 및 TSBA 고체배지로 분리하고 군체의 형태 및 색체로 구분 정량하여 우점종 8종을 선정, 정제하고 Sherlock System으로 동정하였다. 이들 각 종류의 세균에 대하여 액체배양한 후 세정하여 $10^6{\sim}10^7\;cells/mL$ 증류수 현탁액을 조제하여 CBD 중압 자외선 램프로 0, 5, 16, 40, $60\;mJ/cm^2$ 조사량으로 조사한 후 희석, 평판배지에 접종 배양하여 생존 세균농도를 정량하여 불활성화율을 평가하였다. Gram 양성균으로 Bacillus subtillis, Bacillus megaterium, Rhodococcus erythropolis, Microbacterium laevaniformans 등이 Gram 음성균으로 Pseudomonas pseudoflava, Pseudomonas vesicularis, Alcaligenes paradoxus, Zooglea ramigera 등이 동정되었다. 분리된 세균종들은 중압 자외선 조사에 높은 저항성을 나타내었으며, 표준균주보다 강하였다. 또한 Gram 양성세균이 Gram 음성세균에 비해 월등히 강한 내성을 나타내었다. 중압 자외선 램프를 상수처리장의 소독목적으로 도입할 경우 $60{\sim}100\;mJ/cm^2$의 조사량으로 높여 조사하여야 할 것으로 판단된다.
In vitro phosphorylation experiments with a cell extract of Streptomyces coelicolor A3(2) M130 in the presence of ${\gamma}-[^32P]$]ATP revealed the presence of multiple phosphorylated proteins, including the AfsR/AfsK kinases which control the biosynthesis of A-factor, actinorhodin, and undecylprodigiosin. Phosphorylation of AfsR by a cell extract as an AfsK source was significantly inhibited by Ser/Thr protein kinase inhibitors, staurosporine and K-252a, at concentrations giving 50% inhibition ($IC_50$) of $1{\mu}M\;and\;0.1{\mu}M$, respectively. Further in vitro experiments with the cell extracts showed that phosphorylation of multiple proteins was inhibited by various protein kinase inhibitors with different inhibitory profiles. Manganese and calcium ions in the reaction mixture also modulate phosphorylation of multiple proteins. Manganese at 10 mM greatly enhanced the phosphorylation and partially circumvented the inhibition caused by staurosporine and K-252a. A calcium-activated protein kinase(s) was little affected by these inhibitors. Herbimycin and radicicol, which are known as tyrosine kinase inhibitors, did not show any significant inhibition of AfsR phosphorylation. Consistent with the in vitro effect of the kinase inhibitors, they inhibited aerial mycelium formation and pigmented antibiotic production on solid media. On the contrary, when assayed in liquid culture, the amount of actinorhodin produced was increased by staurosporine and K-252a and greatly decreased by manganese. All of these data clearly show that the genus Streptomyces possesses several protein kinases of eukaryotic types which are involved in the regulatory network for morphogenesis and secondary metabolism.
새로운 식용버섯 자원인 개암버섯(N. sublateritium)의 균사생장에 관한 배양적 조건을 구명하고자 시험을 수행한 결과는 다음과 같다. 1. 균사배양에 적합한 온도 및 pH는 각각 $25^{\circ}C$, 5.0-6.0의 범위였다. 2.균사배양시 양호한 탄소원으로서 단당류는 sorbitol, d-ribose 다당류는 starch, inulin, dextrin등이 있다. 3. 질소원으로 양호한 것은 무기태 질소인 질산칼륨, 암모니아태 질소인 asparagine, leucine, phenylalanine 등이었다. 4. 탄소원인 sorbitol 농도를 1-2%로 고정했을 때 적합한 C/N 비는 50이었고 질소원 농도가 높아질수록 균사생장은 부진하였다. 5. 개암버섯 균사생장에 필요한 무기염류는 비교적 다양하였고 $KH_2PO_4,\;MgSO_4{\cdot}7H_2O,\;CaCl_2{\cdot}2H_2O$의 최적농도는 각각 0.08%, 0.03%, 0.01%로 낮은 경향이었다. 6. 유기산으로 양호한 것은 fumaric, maleic, tartaric, gallic acid 등이었다.
Cellulomonas sp. CS1-1의 셀룰라아제 생산에 있어서 분해생성물에 의한 저해 기구를 연구하고 아울러 효소 작용시 생성물의 저해 작용 여부를 구명하기 위하여 각종 함량의 셀로비오스를 함유한 아비셀 중층 한천배지시험, 셀로비오스의 공급을 극소화함으로써 세포외 셀룰라아제의 증산을 목적으로 한 연속배양 시험, 그리고 효소기질에 각기 다른 농도의 셀로비오스가 존재할 때의 활성도에 대한 저해 시험을 시도한 결과 i) 효소반응 혼액중 셀로바오스의 농도가 10mM 이하에서는 셀룰라아제의 작용이 저해되지 않았으나 20mM에서 30%, 50mM에서 약 55% 저해됨이 인정되었다 ii) 아비셀 중층 배지 시험에서 셀룰라아제의 분해 작용은 글루코오스및 셀로비오스에 의해 크게 저해되었다 iii ) 연속 배양에 의하여 배지중의 셀로비오스의 잔존량을 극히 적게 한 경우(희석율 0.05 및 $0.1hr^{-1}$)에도 세포내외 효소가 증산되지 않았다.
Angiogenesis is crucial for solid tumor growth. By secreting angiogenic factors, tumor cells induce angiogenesis. However, targeting these angiogenic factors for cancer therapy is not always successful, suggesting that other factors may be involved in tumor angiogenesis. This work shows that 25 protein spots were differentially expressed by two-dimensional gel electrophoretic analysis when HepG2 cells induced endothelial cell differentiation to tube in vitro, and most of them were upregulated. Twenty-one proteins were identified with MALDITOF-MS, and the other four were identified by LTQ-MS/MS. Keratins were identified as one class of these upregulated proteins. Further study indicated that the expression of keratin 17 in cultured endothelial cells is likely microenvironment regulated, because its expression can be induced by HepG2 cells and bFGF as well as serum in culture media. Increased expression of keratins in endothelial cells, such as keratin 17, may contribute to the angiogenesis induced by HepG2 cells.
인삼의 뿌리절편, 줄기, 엽병에 Agrobacterium을 접종하여 고생장 모상근을 선발하고자 수행하였다. 인삼 뿌리 절편에서 A. rhizogenes R1000과 A. rhizogenes $A_4$에 의하여 모상근이 유도되었으며, 인삼의 줄기 및 엽병에서도 모상근이 유도되었다. 유도된 모상근은 rolC및 virC DNA절편의 확인으로 형질전환체임을 확인하였으며, 균이 제거된 모상근을 선발하였다. 선발된 모상근 300 세포주중 성장과 형태적 특징이 뚜렷한 11 모상근을 선발하였다. 이들 모상근은 주근이 비후된 것, 주근이 가는 것, 측근의 돌기가 많은 것, 측근의 생장이 높은 것 등의 특징을 나타내었다. 이들 11 모상근중 주근이 가늘고 측근의 생장이 왕성한 형태가 모상근의 생장이 좋았으며, 주근이 비후되고 측근의 돌기가 많은 형태는 생장이 낮았다. 본 연구에서 인삼 뿌리절편으로부터 고생장 모상근인 KGHR-1, KGHR-5, KGHR-8을 선발하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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