A protocol has been developed for rapid large scale clonal propagation of an aromatic endangered medicinal plant, Hemidesmus indicus R. Br. with the elimination of the problems such as premature leaf fall and callus formation during caulogenesis and rhizogenesis. Multiple shoots were induced from shoot tip and nodal explants on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 1 mg/L Benzylaminopurine (BAP) and 0.5 mg/L Napthaleneaceticacid (NAA). Addition of 15 mg/L adenine sulphate to the above medium checked leaf abscission completely, reduced the time required for caulogenesis and restored morphogenetic potential after several subcultures. The in vitro grown propagules were rooted in 1/2 MS medium supplemented with 2 mg/L Indolebutyric acid (IBA) +1 mg/L NAA and sucrose 0.7% (w/v). Addition of charcoal at 100 mg/L to the rooting medium quickened root initiation with a complete check on callus formation. The effect of sucrose concentration on both caulogenesis and rhizogenesis was also studied. The resultant plantlets were acclimatized and grown in fields where ninety eight percent of the rooted shoots survived and grew normally. The estimation of the secondary metabolite content in the shoots of the regenerated plant and the mother plant indicated that the concentration of the three secondary metabolites lupeol, vanillin and rutin was similar.
Allium hookeri L. (Alliaceae family) is an important ethnomedicinal plant native to the Himalayan region of Asia. The aim of this research was to establish a high-frequency plant regeneration system for in vitro propagation of A. hookeri. Among the tissue types examined, receptacle explants derived from immature flower buds showed the highest regeneration rate of shoots ($93.33{\pm}4.63%$), roots ($76.67{\pm}7.85%$), and calli ($80.00{\pm}7.43%$) when cultured on Gamborg B5 (B5) medium containing $10{\mu}M$ 6-benzylaminopurine (BA) + $1{\mu}M$ naphthalene acetic acid (NAA), $0.5{\mu}M$ BA + $5{\mu}M$ NAA, and $1{\mu}M$ BA + $10{\mu}M$ NAA, respectively. Shoot multiplication was superior when cultured in liquid rather than on solid medium and relatively high concentrations of BA, ranging from 5 to $10{\mu}M$. Efficient bulblet formation following root induction from shoot clumps was achieved with culture in liquid B5 medium containing 7% (w/v) sucrose. Regenerated bulblets were successfully acclimatized to ex vitro conditions with a greater than 95% survival rate. By this method, a maximum of 62 plantlets per receptacle could be propagated within 9 weeks of initial culture. The in vitro propagation system established in this study will promote A. hookeri biotechnology, including large-scale production of healthy and aseptic clones, preserving parental genotypes with desirable traits, and genetic manipulation to enhance medicinal value.
Kwon, Soo Jeong;Hwang, Ha Nule;Moon, Young Ja;Cho, Gab Yeon;Boo, Hee Ock;Lee, Moon Soon;Woo, Sun Hee;Kim, Hag Hyun
Proceedings of the Korean Society of Crop Science Conference
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2017.06a
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pp.169-169
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2017
Medium composition plays a key role on influencing organogenesis in plant tissue culture. This study was carried out to examine the effects of medium composition on organogenesis in diploid and tetraploid Codonopsis lanceolata and obtain in-vitro mass propagation of superior species of C. lanceolata. Diploid C. lanceolata was found to be declined regarding MS medium composition for each concentration. However, shoot and adventitious root formation were suppressed with higher mineral salt concentration, and active growth of shoot and adventitious root was exhibited as 4.9 cm and 3.2 cm respectively in 1/2 MS medium. While in tetraploid C. lanceolata, it showed 2.9 cm and 3.2 cm respectively in 1/4 MS medium. In the case of sucrose concentration, no consistent decrease was observed for growth of shoot and the adventitious root of diploid both at high and low concentration. The growth of shoot (at 3% concentration) and adventitious root (at 7% concentration) was 2.3 cm and 2.0 cm respectively. Although there was no difference in shoot formation of tetraploid C. lanceolata in all concentrations with the range of 1.7~1.8, there was a slight decrease in shoot growth at high concentration. Results revealed that the adventitious root formation was suppressed at high concentration. The concentration of agar exhibited no significant difference in shoot formation of diploid C. lanceolata at all concentrations. The maximum result of adventitious growth (4.1 cm) was observed at 0.8% concentration. Slight inhibition of shoot formation and root formation of tetraploid C. lanceolata was observed at higher concentration. Shoot formation of diploid C. lanceolata also exhibited inhibition at higher concentration. Shoot formation of diploid C. lanceolata was increased at lower pH and shoot growth was the highest (2.3 cm) at pH 3.8. Adventitious root formation was higher at lower pH. However, both the adventitious root formation and growth exhibited comparatively higher result at pH 5.8. Taken together, the levels of pH had an effect on shoot and root formation in diploid and tetraploid of C. lanceolata
Kang Gwan-Ho;Oh Owel-Sun;Goo Dae-Hoe;Eun Jong-Seon;Kim Hyung-Moo
Journal of Plant Biotechnology
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v.32
no.4
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pp.281-285
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2005
To establish the mass proliferation system of Ardisia pusilla DC, the shoot tips of Ardisia pusilla DC were cultured on the MS and half-strength MS medium supplemented with $0{\sim}5.0$ mg/L BA or $0{\sim}0.5$ mg/L thidiazuron(TDZ), respectively. A few multiple shoot formation observed when the shoots were cultured on MS medium containing TDZ. However, the frequency of multiple shoot formation was reached up to 82.4%, when the shoots were cultured on half-strength MS medium supplemented with 0.5 mg/L BA. Also the number of shoot per explant was 7.1. To promote rooting from multiple shoot, newly formed shoots were transferred to half-strength MS medium containing 0.5 mg/L IBA or 0.5 mg/L NAA, respectively. Regenerated plantlets were grown to normal mature plants in soil.
This study was conducted to investigate the efficient propagation method of Cyrtomium caryoptideum var. coreanum by sporophyte culture. The influence of origin of explant sources (rhizome, blade, or stipe) and homogenization of culture materials on shoot regeneration were investigated. As a result, only rhizome explant exhibited the organogenic capacity and the shoot regeneration was promoted by homogenization of culture material. Vigorous and excellent growth of multiple shoots was induced on the half-strength of inorganic salts containing MS medium. It was appeared that optimum nitrogen content of shoot regeneration was half-strength of nitrogen containing MS medium (30mM) and optimum sucrose concentration was 1%. Addition of $NaH_2PO_4$ to culture medium generally enhanced shoot multiplication and promoted growth of the regenerants. The organogenic capacity of homogenized rhizomes was especially promoted on medium supplemented with $5{\mu}M$ kinetin plus $5{\mu}M$ IBA. The incorporation of $0.1\sim0.2%$ activated charcoal on medium supplemented with growth regulators prevented the formation of multiple bud primordia - nodule-like bud clusters and improved the normal morphogenesis of sporophytes.
This study was conducted to obtain some basic information needed for the propagational system of high quality garlic trough the culture of healthy tissues. non shoot-tips of bulbil obtained in mid May were cultured on MS medium containing 8% sucrose supplemented with 0.1 mg/L NAA, in vitro bulbli were formed, but the shoots were formed at the early to middle in June. Multiple shoots were induced by the culture of receptacles on MS medium supplemented with 0.1 mg/L NAA and 10mg/L BA..Among the flower bud, bulbil and receptacle, receptacle showed most suitable in terms of shoot formation efficiency, More than 50 shoots per single involucre were produced under the optimum condition. Results indicate that in vitro culture of involucre has a high potential for the micropropagation of high quality seed bulbs.
Kim, Tae-Dong;Kim, Ji-Ah;Lee, Na-Nyum;Choi, Chang-Ho
Journal of Plant Biotechnology
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v.47
no.1
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pp.40-45
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2020
An efficient protocol for multiple shoot induction and plant regeneration from axillary bud culture of Magnolia 'Vulcan' was developed in the present study. Primary shoots were obtained from axillary bud explants cultured on Murashige and Skoog (MS) medium containing 1.0 mg/L 6-benzylaminopurine (BA). To induce multiple shoots effectively, primary shoot tips were cultured on MS medium supplemented with different concentrations of BA and zeatin at 0, 0.2, 0.5, and 1.0 mg/L. Of these treatments, the MS medium with 0.5 mg/L BA resulted in the highest number of shoots per explant with an average value of 5.9, and it produced the greatest shoot height at 4.8 cm after 12 weeks of culturing. In the rooting of in vitro produced shoots, the greatest percentage of explants forming roots (91.3%), number of roots per explant (9.7), and root length (2.8 cm) were obtained in half-strength MS medium supplemented with 6.0 mg/L indole-3-butyric acid (IBA). Regenerated plantlets were successfully acclimatized and hardened off inside the culture room with 87.5% survival rate. Plants were transferred to a greenhouse with a 97.2% survival rate. The highly efficient shoot multiplication and plant regeneration system reported herein can be used for large-scale clonal propagation of valuable Magnolia species or cultivars.
Kwon, Young Hee;Jeong, Jae Hyun;Lee, Jae Sun;Jeon, Jong Ok;Park, Young Uk;Min, Ji Hyun;Chang, Who Bong;Lee, Sang Young;Youn, Cheol Ku;Kim, Ki Hyun
Korean Journal of Plant Resources
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v.31
no.4
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pp.355-362
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2018
This study was performed to develop the mass propagation system using tissue culture technique to supply the seeds of Elephant garlic (Allium ampeloprasum L.) which has difficulty in propagation. Immature spathe of Elephant garlic was cultured on Murashige & Skoog (MS) medium supplemented with two plant growth regulators, naphthaleneacetic acid (NAA) and kinetin. After 6 weeks of culture, the highest number of shoot (14.9/explant) was obtained when the immature spathe with 10 cm length was cultured right after harvesting. In MS medium supplemented with 2 mg/L kinetin and 0.5 mg/L NAA, the most vigorous growth characteristics was observed, the shoot number was 14.9/explant, its length was 11.3 cm, and its fresh weight was 2.5 g. When the bulblets were cultured in MS medium with 2 mg/L kinetin and 0.5 mg/L NAA, the addition of 30 mg/L adenine improved their proliferation and growth significantly, the highest bulblet formation rate (48%) was obtained. The addition of 7% sucrose also increased the bulblet formation rate at the highest frequency of 98.2%. The shoots were shown be more vigorously proliferated at the secondary subculture stage rather than primary culture stage, their propagation rate was 80% after subculture.
Iris dichotoma Pall. is an important endangered plant belonging to the family Iridaceae. A method was developed for the rapid micropropagation of I. dichotoma through plant regeneration from leaf, rhizome, and root explant-derived calli. Leaf, rhizome, and root segments were cultured on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D; $0-3.0mg{\cdot}L^{-1}$) for callus induction. Callus production was highest at $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ 2,4-D, where 73.8% and 45.5% of cultured rhizome and root cuttings, respectively, produced calli. The viable calli were maintained at an induced concentration of 2,4-D ($3.0mg{\cdot}L^{-1}$). They were then transferred to MS medium supplemented with various concentrations of 2,4-D ($0-3.0mg{\cdot}L^{-1}$) in combination with 6-benzyladenine (BA: 0, 1.0 and $3.0mg{\cdot}L^{-1}$) for adventitious shoot regeneration. The addition of a low concentration of 2,4-D into BA-containing medium significantly increased the frequency of shoot regeneration in leaf, rhizome, and root-derived calli. The highest number of adventitious shoots (26.4 per callus) formed at $0.5mg{\cdot}L^{-1}$ 2,4-D and 1.0 mg/l BA. For rooting of the shoots, half- strength MS medium supplemented with different concentrations of indole 3-butyric acid (IBA) $0-3.0mg{\cdot}L^{-1}$ was tested. The optimal results were observed using half-strength MS medium supplemented with $1.0mg{\cdot}L^{-1}$ IBA, on which 98% of the regenerated shoots developed roots with an average of 3.5 roots per shoot within 45 days. The plantlets raised in vitro were acclimatized and transferred to soil with 95% success. This in vitro propagation protocol will be useful for conservation and mass propagation of this endangered plant.
Park, Chung-Heon;Seong, Nak-Sul;Lee, Seung-Tack;Youn, Kyu-Bok;Son, Su-Gyu
Korean Journal of Medicinal Crop Science
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v.1
no.1
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pp.63-69
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1993
Present experiment were attempted to examine in vitro multiplication throughbud culture of Cornus officinalis. Bud derived shoot formation was established successfully on Murashige and Skoog's medium supplemented with $0.5mg\;/\;{\ell}$ BAP(N-benzyl amino purine). The shoot proliferation increased on the Driver Kuniyuki Walnut medium containing $0.5mg\;/\;{\ell}$ NAA(Napthalene acetic acid) and $0.5mg\;/\;{\ell}$ BAP. Addition of 2,4-D(2,4-Dichlorophenoxy acetic acid) to the media produced excessive callus inducton. IAA(Indole-3-acetic acid) and IBA (Indole-3-bu-tyric acid) enhanced multple shooting, and NAA showed callus induction and multiple shooting. Shoot growth was enhanced supplemented with 3% sucrose, $2g\;/\;{\ell}$ activated charcoal, and 1 / 4MS in organic salts. However, root formation of proliferated shoots was low about 5%
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