Kim, Haeng-Hoon;Cho, Gyu-Taek;Yoon, Mun-Sup;Yoon, Ju-Won;Cho, Eun-Gi
Journal of Plant Biotechnology
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v.30
no.2
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pp.189-194
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2003
Contamination of bacterial infection is one of serious problems in in vitro culture system of root crops. From the contaminated tubes over 140 of petiole cultures of Pinellia ternata, a medicinal plant, 4 genera 8species 48 strains of bacteria, including Aeromonas and Pseudomonas, were isolated and identified and another 8 strains were not fully identified. Most of them were motile Gram positive bacteria as in common in early stage of in vitro cultures. Six strains of bacteria, 5 of Gram negative, including Enterobacter, and 1 of Gram positive, were identified from the embryonic axes cultures of tea plant. From the susceptibility test to pre-screened 5 antibiotics, all of the bacteria except for 2 species of Pseudomonas were susceptible to cefotaxime 60∼100mg/L. While 60mg/L erythromycin only was effective to Pseudomonas. Combination of erythromycin 20mg/L and cefotaxime 60mg/L totally suppressed the growth of all bacterial strains tested. Susceptibility test of bacteria from tea embryonic axes cultures showed similar results. Combination of erythromycin 35mg/L and cefotaxime 60mg/L was effective to 15 bacterial strains and partially effective to 1 unidentified.
In order to study the role of polyamines on the formation of adventitious roots, trichomes and calli, the effects of putrescine, spermidine, spermine, cyclohexylamine (CHA) and methylglyoxal-bis(guanylhydrazone) (MGBG) were investigated in the leaf segment cultures from ecotype Columbia of Arabidopsis thaliana. When the leaf segments were cultured on the media for forming adventitious roots (0.1 mg/L NAA), trichomes (2.0 mg/L NAA) and calli (10.0 mg/L NAA), and then each cultures was treated with 1-100 mg/L of putrescine, spermidine and spermine, respectively. On the adventitious root-forming medium treated with polyamines the trichomes were induced with adventitious roots. And on the trichome-forming medium with polyamines calli were induced with trichomes. In orther hand each cultures was treated with 1-100 mg/L of CHA and MGBG, respectively. CHA promoted adventitious roots on the medium for adventitious roots, was not effected on media for trichomes and calli. MGBG inhibited adventitious roots, trichomes and calli in all cultures, and induced adventitious roots on medium for trichomes in high concentration.
When cultured soybean immature seed on 15th days after flowering, suitable temperature in formation of callus were $24{\sim}27^{\circ}C$, and embryogenic callus(EC) were generated at medium containing NAA with growth regulators, and then, results were subcultured the EC, a plenty of shoots and roots were formed at medium supplemented BA 2mg/1 and IAA 2mg/1, respectively, however when used at medium the same time supplemented BA 2mg/1 and IAA 2mg/1, formation of cullus was energetic, and a symptom of organization was not showed , Total lipid contents include in each cultures were increased at low temperature of cultural conditions as much as possible, but glycolipid, phospholipid, free sterol contents were a little increased at $24{\sim}27^{\circ}C$, and free sterol content was increased at a case of embryogenic structure were generated. In fatty acid compositions in each cultures, the contents of unsaturated fatty acid were plenty in EC, and unsaturation rate was 0.837. Besides, in sterol compositions, cholesterol content was remarkably high in EC than that of other cultures.
In this study, we established a novel somatic embryogenesis and plant regeneration system through cell suspension culture of white dandelion (Taraxacum coreanum NAKAI.). Embryogenic calli could be initiated from leaf and root explants of sterile seedlings on solid Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 1.0 mg/L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) after 3-week cultures. To proliferate embryogenic calli rapidly, cell suspension culture was performed with transferred to liquid MS medium with various combinations of plant growth regulators (PGRs) including 2,4-D, ${\alpha}$-naphthalene acetic acid (NAA), indole-3-acetic acid (IAA), $N^6$-benzylamino purine (BAP), thidiazuron (TDZ), and kinetin. During suspension cultures, embryogenic calli not only greatly proliferated, but shoot organogenesis also simultaneously occurred from the surface of somatic embryos. Among them, TDZ at lower concentration, 0.1 mg/L produced the highest efficiency of somatic embryo formation and shoot organogenesis. Rooting of embryogenic calli with adventitious shoots was done on solid MS medium containing 0.1 mg/L NAA and 0.3% activated carbon. Nearly 80% of embryogenic calli with shoot organogenesis could be rooted normal. Well-rooted plantlets were transferred into pots under a greenhouse condition, and plants derived from this system appeared phenotypically normal.
An effective rapid propagation method was established through in vitro cultures of the medicinal plant, Cudrania tricuspidata. In vitro plantlets were obtained from in vitro germinated seeds. The various levels of cytokinins (BAP, Kinetin and TDZ) were tested on multiple shoot formation from plantlets. BAP (1.0 mg/l) treatment induced highest number of multiple shoots. Single shoot cultures gave higher initial shoot numbers than 5 shoots per culture. Among the various culture media, the shoot elongation was optimal on 2 MS basal medium without growth regulators. The IAA (2.0 mg/l) treatment induced highest number of roots. IBA (2.0 mg/l) treatment more promoted in vitro root growth than other concentrations. Rooted shoots were transferred directly to small pots with an artificial soil and successfully acclimatized.
In order to survey anthraquinone productivity from in vitro root culture, transformed hairy roots of Rumex crispus were induced from leaf segments by infection with Agrobacterium rhizogenes strain $A_4$ and compared with adventitious roots. The optimum condition of adventitious root formation from leaf segments was 5 $\mu$M NAA added to MS medium. Mannopine was detected in the extract of hairy roots by paper electrophoresis, but not in adventitious roots. Secondary root tips of both adventitious roots and hairy roots elongated without lateral root branching in hormone free MS medium, but primary root tips showed more rapid growth with extensive lateral root branching. MS basal medium was the best for growth of the adventious roots and hairy roots for anthraquinone content. Adventitious root tips and hairy root tips cultured in liquid MS medium supplemented with 0.05 $\mu$M NAA and 0.1 $\mu$M kinetin (contained 5% sucrose) showed the maximal growth and anthraquinone content. Anthraquinone content of hairy roots was increased by the culture periods, but was reduced after 25 days of culture.
Simple, reproducible, high frequency, improved plant regeneration protocol in Eastern Cottonwood (Populus deltoides) clones, WIMCO199 and L34, has been reported. Initially, aseptic cultures established from axillary buds of nodal segments from mature plus trees on MS liquid medium supplemented with $0.25mg\;1^{-1}$ KIN and $0.25mg\;1^{-1}$ IAA. Nodal and internodal segments were found to be extra-prolific over shoot apices during course of aseptic culture establishment, while $0.25mg\;1^{-1}$ KIN concentration played a stimulatory role in high frequency plant regeneration. Diverse explants, such as various leaf segments, internodes, and roots from in vitro raised cultures, were employed. Direct plant regeneration was at high frequency of 92% in internodes, 88% in leaf segments, and 43% in root segments. This led to the formation of multiple shoot clusters on established culture media with rapid proliferation rates. Many-fold enhanced shoot elongation and growth of the clusters could be achieved on liquid MS medium supplemented with borosilicate glass beads, which offer physical support for proliferating shoots leading to faster growth in comparison to semi-solid agar or direct liquid medium. SEM examination of initial cultures confirmed direct plant regeneration events without intervening calli. In vitro regenerated plants induced roots on half-strength MS medium with $0.15mg\;1^{-1}$ IAA. Rooted 5- to 6-week-old in vitro regenerated plants were transferred into a transgenic greenhouse in pots containing 1:1 mixture of vermicompost and soil at $27{\pm}2^{\circ}C$ for hardening and acclimatization. 14- to 15-week-old well-established hardened plants were transplanted to the field and grown to maturity. The mature in vitro raised poplar trees exhibited a high survival rate of 85%; 4-year-old healthy trees attained an average height of 8 m and an average trunk diameter of 25 cm and have performed well under field conditions. The regeneration protocol presented here will be very useful for undertaking genetic manipulation, providing a value addition to Eastern Cottonwood propagation in future.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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