• Archives of Pharmacal Research
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• 제28권8호
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• pp.988-994
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• 2005

The purpose of the present study was to prepare multivesicular liposomes with a high drug loading capacity and to investigate its potential applicability in the oral delivery of a peptide, human epidermal growth factor (rhEGF). The multivesicular liposomes containing rhEGF was prepared by a two-step water-in-oil-in-water double emulsification process. The loading efficiency was increased as rhEGF concentration increased from 1 to 5mg/mL, reaching approximately $60\%$ at 5 mg/mL. Approximately $47\%$ and $35\%$ of rhEGF was released from the multivesicular liposomes within 6 h in simulated intra-gastric fluid (pH 1.2) and intra-intestinal fluid (pH 7.4), respectively. rhEGF-loaded multivesicular liposomes markedly suppressed the enzymatic degradation of the peptide in an incubation with the Caco-2 cell homogenate. However, the transport of rhEGF from the multivesicular liposomes to the basolateral side of Caco­2 cells was two times lower than that of the rhEGF in aqueous solution. The gastric ulcer healing effect of rhEGF-loaded multivesicular liposomes was significantly enhanced compared with that of rhEGF in aqueous solution; the healing effect of the liposomes was comparable to that of the cimetidine in rats. Collectively, these results indicate that rhEGF-loaded multivesicular liposomes may be used as a new strategy for the development of an oral delivery system in the treatment of peptic ulcer diseases.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제26권8호
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• pp.659-665
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• 2003

We have studied the effect of rhEGF on the buccal mucosal ulcer healing. rhEGF was rapidly degraded upon incubation with the hamster buccal mucosal homogenates; The degradation of rhEGF was significantly inhibited by sodium lauryl sulfate (SLS). Eudispert hv hydrogel and Polycarbophil 974P hydrogel were prepared for rhEGF delivery and their mucoadhesiveness was measured by the $Instron^R$ method. The mucoadhesive force of Eudispert hv was significantly greater than that of Polycarbophil 974P. Moreover, rhEGF in Eudispert hv hydrogel remained stable for about 2 months. To evaluate the ulcer healing effect of rhEGF, the buccal mucosal ulcer was induced in golden hamsters using acetic acid. At 24 h after administration of rhEGF/Eudispert hv hydrogel, the ulcerous area was decreased compared with rhEGF solution and, as a result, the curative ratio was $36.8\pm5.68$%. By the addition of SLS (0.5%) to Eudispert hv hydrogel, the curative ratio increased 1.5 times. The mechanism of the action was probably due to a combination of protection of the drug against proteases present in mucosa and prolongation of the release of rhEGF from the formulation at the site of action.

• Journal of Pharmaceutical Investigation
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• 제28권2호
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• pp.99-107
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• 1998

The objective of this study was to develop effective oral formulations of rhEGF for gastric ulcer healing using polycarbophil. hydroxypropylcellulose(HPC) and sucralfate as its bioadhesive bases. Cytoprotective effects of rhEGF, cell proliferation and differentiation. on the ulcers induced by ethanol or acetic acid in rats were studied. rhEGF release from HPC formulation was much faster than that from polycarbophil formulation. HPC formulation combined with small amount of sucralfate showed much slower release of rhEGF than only HPC base only. rhEGF preparations with bioadhesive polymers showed better effects on the healing of gastric ulcers than EGF solution when administered orally. When rhEGF preparations were administered at once and the animals were under starvation, polycarbophil formulation showed better effect on gastric ulcers than HPC formulation. Otherwise, when rhEGF preparations were given more than three times and the rats were fed normally, HPC formulation showed good healing efficacy of ulcers compared to polycarbophil formulation. rhEGF showed dose-dependent effect on the healing of both chronic and acute ulcers.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제20권1호
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• pp.34-38
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• 1997

Recombinant human epidermal growth factor (rhEGF), a polypeptide of 53 amino acid residues, is subject to degradation by numerous enzymes, especially proteases, when it is applied on the skin for the treatment of open wound. Amastatin, aprotinin, bestatin, EDTA, EGTA, gabexate, gentamicin, leupeptin, and TPCK were investigated for the possible protease inhibitors, which may use to protect rhEGF from degradation by the enzymes in the skin. Skin homogenates containing protease inhibitors and rhEGF were incubated at $37^{\circ}C$ for 30 minutes. After the reaction was stopped with trifluoroacetic acid, the amount of rhEGF remaining in the sample was determined with an HPLC method. The percentages of rhEGF degraded, at the skin/PBS ratio of 0.25, in the mouse, rat, and human skin homogenate were 85%, 70%, and 46%, respectively. The degree of degradation of rhEGF in the cytosolic fraction was higher than that in the membrane fraction and these enzyme reactions were completed in 30 minutes. Bestatin, EGTA, and TPCK showed significant inhibitory effects on the degradation of rhEGF in the two fractions (p<0.05), while the other protease inhibitors had no significant inhibitory effects or, even resulted in deleterious effects. Therefore, the formulation containing one or several inhibitors among these effective inhibitors would be a promising topical preparation of rhEGF for the treatment of open wound.

• Radiation Oncology Journal
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• 제24권3호
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• pp.179-184
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• 2006

목 적: 재조합 표피성장인자는(rhEGF) 다양한 표피와 상피 세포의 증식을 자극하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 방사선이 조사된 섬유아세포의 증식에 rhEGF의 효과를 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 인간에서 기원한 섬유아세포를 초대배양(primary culture)한 세포를 이용하였다. 대웅제약에서 유전자 재조합하여 대장균에서 발현하여 생산한 rhEGF를 제공 받아 사용하였다. 방사선 조사는 4 MV 선형가속기(CLINAC 600C, Varian, Palo Alto, CA, USA)를 이용하여 분당 2 Gy 내외의 선량률로 균일하게 조사하였다. 조사된 방사선량은 8 Gy이었다. 생존세포수는 trypan blue 염색법을 이용하였고, rhEGF에 의한 세포주기의 변화를 관찰하기 위하여 유세포 분석법을 시행하였다. 결 과: 4 Gy의 방사선을 조사한 후 7일째까지 생존 세포수를 trypan blue 염색법을 이용하여 측정한 결과 모든 rhEGF 농도(1.0 nM, 10 nM, 100 nM, 1,000 nM )에서 방사선 조사 단독군보다 생존세포 수가 많았다. 방사선을 조사하지 않은 섬유아세포에서 rhEGF를 10 nM처리한 후 FACS scan을 시행한 결과 세포주기 중에서 S기 비율이 증가하였다. 결 론: 방사선이 조사된 섬유아세포에서 rhEGF를 투여하면 rhEGF를 투여하지 않은 섬유아세포에 비해서 세포증식이 가속됨을 확인할 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권1호
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• pp.61-67
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• 1998

재조합 인간상피세포 성장인자(rhEGF)가 E. coli BL21(pYHB101) 균주를 사용하여 발현되었다. 10g/L glucose를 첨가한 변형된 MBL 배지를 사용하여 10 $\mu\textrm{m}$ IPTG/lactose로 2시간 동안 유도배양한 후 27$^{\circ}C$에서 48시간 동안 배양하였을 때 44.5 mg/L의 rhEGF가 발현되었다. 상기의 결과는 E. coli BL2l(pYHB101)를 사용하여 rhEGF를 발현시 lactose를 IPTG와 동일한 유도 물질로 사용 가능하다는 것을 시사하는 것이다. 회분식 배양에서 glucose를 10 g/L 첨가한 변형된 MBL 배지에 유도물질로 10 $\mu\textrm{m}$ lactose를 사용하였으며 28시간 동안 배양하였을 때 최대 45 mg/L의 rhEGF가 발현되었다. 유가식 배양에서 정지기에 0.5%(w/v) lactose와 0.25%(w/v) yeast extract를 첨가하였을 때 160mg/L의 rhEGF가 발현되었으며 94.3%가 분비되었다. 이에 비하여 유도기에 lactose를 첨가한 경우는 120 mg/L의 rhEGF가 발현되었으며 cytoplasm으로 발현된 불용성 봉입체의 비율은 20.9%에 달하였다. 이것은 lactose의 첨가시기가 E. coli BL2l(pYHB101)로부터 soluble rhEGF의 생성에 중요하다는 것을 확인한 결과이다.

• Radiation Oncology Journal
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• 제24권1호
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• pp.67-76
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• 2006

목적 : 구내염은 두경부종양이 있는 암환자에게 방사선 및 항암제 치료 시술 시 매우 흔하게 발생하는 합병증이다. 본 연구는 Rat 의 방사선성 구내염 모델에서 recombinant human epidermal growth factor (rhEGF)의 효과를 평가하고자 하였다. 대상 및 방법: 25 Gy의 방사선량으로 두부에 단회 조사한 Rat를 무작위로 7마리씩 무처치군, 부형제 처치군, rhEGF 15 또는 $30{\mu}g/day$ 구강 내 처치군으로 나누었으며, 방사선을 조사하지 않은 7 마리의 Rat를 정상시험군으로 나누었다 rhEGF 시료 및 부형제는 1일 3회 Rat 의 구강점막에 매일 도포하였다. Rat의 생존율, 체중변화 및 사료섭취량을 18일 동안 관찰하였으며, 방사선 조사 후 7 일 및 18 일째에 Rat의 구강점막을 조직학적으로 평가하였다. 결과 : 실험종료 시점에서 rhEGF 15 또는 $30{\mu}g/day$ 구강 내 처치군이 모두 33%의 생존율을 보인 것에 비하여, 무처치군 및 부형제 처치군은 모두 0%의 생존율을 보였다. 체중변화에서도 rhEGF 처치군은 방사선 조사 후 2일부터 7일까지 부형제 처치군에 비하여 Rat 의 평균체중이 통계적으로 더욱 무거웠다 사료섭취율은 모든 시험군에서 방사선 조사 후 4 일까지 감소하는 양상을 보이다가, rhEGF 15 또는 $30{\mu}g/day$ 구강 내 처치군에서 14일째에 뚜렷한 사료섭취율의 증가가 관찰되었다. 방사선 조사 후 7 일째의 조직학적 분석 결과, rhEGF 15 또는 $30{\mu}g/day$ 구강 내 처치군의 Rat 에서는 점막 표피층의 각질세포의 종창 및 변성만이 관찰되었던 것에 비하여, 무처치군 및 부형제 처치군에서는 심한 위막성 또는 궤양성 구내염이 관찰되었다. 결론; rhEGF (15 또는 $30{\mu}g/day$ 구강 내 처치군) 처치에서 방사선 조사로 유발시킨 Rat의 구내염 모델에서 유의성 있는 치유 효과를 확인하였으며, 본 시험결과로 rhEGF가 방사선에 의해 유발된 구내염을 치료할 수 있는 임상 제제로써의 가능성을 볼 수 있었다.

• Radiation Oncology Journal
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• 제25권4호
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• pp.242-248
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• 2007

목적: 마우스 모델에서 cisplatin과 방사선조사로 구내염을 유발시킨 후 재조합 표피성장인자 (recombinant human epidermal growth factor, rhEGF)을 처치하여 그 효과를 알아보고자 하였다. 대상 및 방법: 마우스 24마리를 대상으로 정상대조군 8마리와 실험군은 각각 rhEGF 처치군과 미처치군으로 8마리씩 분류하였으며 실험군은 10 mg/kg의 cisplatin을 방사선조사 첫날 동시에 1회 복강 내 투여하였고, 방사선조사는 5일간 1회 5 Gy씩, 5일간 25 Gy를 조사하였다. RhEGF 처치군은 방사선조사 2일 전부터 2일간 1 mg/kg의 rhEGF를 피하주사하였으며 방사선조사3일째부터 3일간 1 mg/kg를 피하주사하여 총 5 mg/kg의 rhEGF를 투여하였다. 마우스의 체중변화, 먹이섭취 및 조직학적 변화를 평가하였다. 결 과: 마우스 체중변화는 rhEG F처치군이 실험 3일째부터 5일간 rhEGF 미처치군과 비교하여 통계적으로 유의한 체중의 차이를 관찰할 수 있었다. 먹이섭취는 실험군(rhEGF 처치군과 미처치군)에서 실험 5일째까지 감소하였다가 13일째부터 먹이섭취의 증가를 보여주었다. Cisplatin과 방사선조사 후 7일째의 조직학적 검사에서는 rhEGF 처치군에서 마우스의 점막 표피층의 변성이 관찰되었으나 rhEGF 미처치군에서는 점막층의 염증 반응이 관찰되었다. 결 론: Cisplatin과 방사선 조사로 마우스에서 발생한 구내염에서 rhEGF를 투여한 경우 체중 변화와 먹이섭취의 유의한 개선을 관찰하였으며 조직학적 검사에서 점막 손상의 회복을 확인하였다. 향후 임상적으로 rhEGF가 항암화학요법과 방사선치료로 인한 구내염을 줄일 수 있는 가능성을 확인하였다.값은 11개월이었고 2년, 3년 생존율은 31.5%, 15.8%였다. 결 론: 2기 췌장암 환자들은 국소 재발 및 원격 전이의 가능성이 높은 고위험군으로 국소 제어율 및 전체 생존율의 향상을 위해서 수술 후 효과적인 방사선치료의 적극적인 시행 및 이후의 보조적인 전신 항암화학요법을 권고하여 시행하는 것이 바람직하다. 평가 검사는 모두 제조사의 시험지침서에 부합하였다. 결론적으로, 이는 본 GE $Advance^{TM}$ PET 시스템이 임상에의 적용에 적합함을 보여주었다.mens사의 상용 분석 프로그램에는 해당 기능이 없어 계산값의 비교를 통한 검증은 수행하지 못하였고, 수화(hydration)와 탈수(dehydration) 각각의 조건에 따른 신장기능 분석에 적용하였을 때, 판별 기준이 되는 유의미한 값을 산출하여 타당성 검증을 대신하였다. 결론: 이 연구에서 개발한 핵의학 영상의 정량적 분석을 통한 신장기능 분석 프로그램을 사용하여 신장 기능을 분석한 결과, 타당성 있는 결과를 도출하여 그 유용성을 입증하였다. 이 개발 프로그램은 좀 더 다양한 임상응용 목적의 분석기능을 사용자가 직접 개발, 추가하기가 용이하여 기존 상용 프로그램보다 연구적 활용범위가 크다고 사료된다.2.2{\pm}0.4\;(1.6{\sim}3.2){\mu}g/ml$와 $1.4{\pm}0.2\;(0.8{\sim}1.6){\mu}g/ml$로서(p=0.16), 표준균주 3종 모두에서 Infecton의 MBC 또한 ciprofloxacin에 비해 $2{\sim}4$배가 높았다. 결론: Tc-99m Infecton은 ciprofloxacin 보다는 약하였지만 표준균주에 대해 생체외 항균력을 보였다.를

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권4호
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• pp.478-484
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• 1996

Recombinant human epidermal growth factor (rhEGF) was produced by E. coli BL21 harboring a plasmid pYHB101. The maximum production was 68.7 mg/l when the E. coli strain was cultured at 25$\circ$C for 48 hours in the modified MBL medium containing 10 g/l glucose with 1 mM IPTG induction at 2 hours after inoculation. The rhEGF was purified upto 267 folds by Amberlite XAD- 7 chromatography, ultrafiltration, and DEAE Sepharose fast flow ion exchange chromatography with an overall yield of 66.6%. The purified rhEGF was further separated into two fractions by HPLC. The N-terminal amino acid sequence of the second fraction was Asn-Ser-Asp-Ser-Glu-Cys-Pro-Leu-Ser-His. The effect of rhEGF on the DNA synthesis was examined using in vitro biological assay based on the incorporation of 5'-bromo-2'- deoxy-uridine (BrdU). The purified rhEGF shows no difference with natural human epidermal growth factor (nhEGF) in N-terminal amino acids residues and biological activity. From the results, we concluded that rhEGF produced from E. coli harboring the plasmid pYHB101 was apparently the same as nhEGF.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제35권8호
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• pp.2290-2294
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• 2014

For the present study, rhEGF was encapsulated into solid lipid nanoparticles (SLNs). The SLNs were prepared by the $W_1/O/W_2$ double emulsification method combined with the high pressure homogenization method and the physical properties such as particle size, zeta-potential and encapsulation efficiency were measured. The overall particle morphology of SLNs was investigated using a transmission electron microscopy (TEM). The percutaneous skin permeation and accumulation property of rhEGF was evaluated using Franz diffusion cell system along with confocal laser scanning microscopy (CLSM). The mean particle size of rhEGF-loaded SLNs was $104.00{\pm}3.99nm$ and the zeta-potential value was in the range of -$36.99{\pm}0.54mV$, providing a good colloidal stability. The TEM image revealed a spherical shape of SLNs about 100 nm and the encapsulation efficiency was $18.47{\pm}0.22%$. The skin accumulation of rhEGF was enhanced by SLNs. CLSM image analysis provided that the rhEGF rat skin accumulation is facilitated by an entry of SLNs through the pores of skin.