Purpose of the present study was to investigate the factors affecting the production of antibacterial substances and histamine in rennet curd prepared by inoculation of histamine-producing lactic acid bacteria (LAB) and probiotic LAB. Probiotic Lactobacillus sakei PIL52 and Lactobacillus plantarum FIL20 produced strong antimicrobial agents against histamine-producing bacteria Lactobacillus brevis LAS129, Enterococcus faecium SBP12, and Enterococcus faecalis SBP58. The lactic acid and crude bacteriocin produced from the probiotic LAB inhibited histamine-producing bacteria in a concentration-dependent manner. As the number of probiotic LAB inoculated for the production of rennet curd increased, the antibacterial activity against histamine-producing bacteria was elevated due to the increased amount of lactic acid and crude bacteriocin in the sample. The growth of probiotic LAB as well as histamine-producing bacteria was inhibited by addition of 10% NaCl, thus the antibacterial substances and histamine contents in rennet curd were significantly lower than those of the control (P < 0.05). Meanwhile, the histamine content was not significantly increased when the rennet curd prepared by mixing probiotic LAB and histamine-producing bacteria was stored at $25^{\circ}C$ for 5 days. However, the amount of histamine detected in the rennet curd was significantly (P < 0.05) increased because the antibacterial activity of the bacteriocin produced by the probiotic LAB was decreased at $20^{\circ}C$ for 20 days.
We have studied on characterization and cheese making like mineral contents, protein composition and coagulation pattern on equine milk. At first, for contents of mineral on equine milk, It was lower in equine than bovine milk Contents of Na, Mg, P, Ca and K the major minerals, were indicated as 18.3 mg, 0.4 mg, 33.3 mg, 80.9 mg and 134.9 mg respectively by 100 g. In the distribution of nitrogen, the ratio NPN to Nt was indicated as 9.8% while that of bovine milk was 7%. And In NCN, its percentage was indicated as 45.6% shelving that Equine casein was lower than bovine. From these results, equine milk could not be applicable to cheese production since there are no coagulable nitrogen fraction such as ${\kappa}$-casein, as there aye with bovine milk. Equine milk will be more acceptable if we accept that the phylogenic affinity is near to human. It is the same as equine from the view points that monogastric, which did not contain ruminant's casein. For the rennet coagulation, equine milk was different than bovine milk. Equine milk did not coagulated by rennet after the addition of $Ca^{2+}$. But when bovine ${\kappa}$-casein was added in the presece of rennet, and $Ca^{2+}$ to equine milk, coagulation occurred. Such phenomenon was also observed by the use SEM. Verification of ${\kappa}$-casein by SDS-PACE did not existed in equine milk. The Casein of equine milk(54.4%) is similar to human milk in that casein/whey is about 1. For equine milt this can be explained because distance between casein and Ca is great, casein being lower, which result in reaction of casein with $Ca^{2+}$ because it could not activated which lasting time of coagulation is too long.
A potent fungus producing milk clotting enzyme with fairly weak proteolytic activity was isolated from various soil and sewage, which the selected strain, SA-101, was identified as Mucor sp. with microbiological characteristics. Its milk clotting enzyme production was maximized when grown on 10g of wheat bran media added to 8ml of tap water containing 0.1M HCl for 60hrs at $30^{\circ}C$. This enzyme production was stimulated by addition of 6% lactose, 0.05% NaCl and reached a maximal level of 9810 unit/g wheat bran. The crude enzyme product could be produced effectively by salting out with ammonium sulfate fractionation and lyophilization. The ratio of milk clotting activity to proteolytic activity of crude enzyme product was lower than Hansen rennet, but resembled to Meito rennet. The optimal temperature of milk clotting activity of crude enzyme product was abound $60^{\circ}C$ on a substrate of 10% reconstituted skim milk containing 1/100M $CaCl_2$.
To see the possibility of irradiation as an alternative to ultra high temperature (UHT) sterilization, the quality characteristics of milk were analyzed. Milk treated by UHT ($135^{\circ}C$ for 4 sec) and irradiation at higher than 3 kGy showed no viable counts after 7 days of storage at $4^{\circ}C$. The contents of certain amino acids of milk, such as Arg, Asp, Glu, Ile, Leu, Lys, Pro, Ser, Thr, and Tyr, were lower in irradiated groups at 10 kGy than in UHT-treated one, but no difference was observed between irradiated milks at less than 5 kGy and UHT. The capillary electrophoresis (CE) patterns of the milk irradiated at 10 kGy showed a similar trend to the raw milk, low temperature long time (LTLT, $63^{\circ}C$ for 30 min), and high temperature short time (HTST, $72^{\circ}C$ for 15 sec) treated. However, the CE pattern of UHT-treated milk was different. Rennet coagulation test agreed with the CE results, showing that all milk samples were coagulated by rennet addition except for UHT-treated milk after 1 hr. These results suggest that irradiation of milk reduce the content of individual amino acids but it may not induce severe conformational change at a protein level when compared with UHT treatment.
Fifty-two Holstein cows with different phenotypes of $\kappa$-casein ($\kappa$-CN) and $\beta$-lactoglobulin ($\beta$-LG) were selected to provide weekly milk samples for heating at 30, 70, 75 and $80^{\circ}C$ for 2 min. Coagulating properties of heated milk samples measured as rennet clotting time, rate of curd firming and curd firmness at cutting were determined by a Formagraph. Milk samples were analysed for fat and casein. Least squares analyses of data, after adjustments were made for effect of milk casein and fat contents, indicated that although an increase in heating temperatures resulted in less desirable coagulating properties, the effect of milk types was inherent irrespective of heating temperatures. The shortest rennet clotting time (6.06 min), fastest rate of curd firming (5.61 min) and firmest curd (38.05 mm) were obtained from milk with the B variant for $\kappa$-CN and B variant for $\beta$ -LG when preheated at $30^{\circ}C$. It appears that milk bearing $\kappa$-CN B is more resistant to heat perturbation. All milk samples having the $\kappa$-casein AA (milk types AA/AA, AA/AB, AA/BB) did not have a measurable K20 value when preheated at $70^{\circ}C$. This effect was observed for $\kappa$-casein AB (milk types AB/AA, AB/AB, AB/BB) at $75^{\circ}C$ and $\kappa$-casein BB (milk types BB/AA, BB/AB, BB/BB) at $80^{\circ}C$.
Luo, Fan;Jiang, Wei Hua;Yang, Yuan Xiao;Li, Jiang;Jiang, Ming Feng
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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v.29
no.9
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pp.1363-1370
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2016
Rennet, a complex of enzymes found in the stomachs of ruminants, is an important component for cheese production. In our study, we described that yak chymosin gene recombinant Pichia pastoris strain could serve as a novel source for rennet production. Yaks total RNA was extracted from the abomasum of an unweaned yak. The yak preprochymosin, prochymosin, and chymosin genes from total RNA were isolated using gene specific primers based on cattle chymosin gene sequence respectively and analyzed their expression pattern byreal time-polymerase chain reaction. The result showed that the chymosin gene expression level of the sucking yaks was 11.45 times higher than one of adult yaks and yak chymosin belongs to Bovidae family in phylogenetic analysis. To express each, the preprochymosin, prochymosin, and chymosin genes were ligated into the expression vector $pPICZ{\alpha}A$, respectively, and were expressed in Pichia pastoris X33. The results showed that all the recombinant clones of P. pastoris containing the preprochymosin, prochymosin or chymosin genes could produce the active form of recombinant chymosin into the culture supernatant. Heterologous expressed prochymosin (14.55 Soxhlet unit/mL) had the highest enzyme activity of the three expressed chymosin enzymes. Therefore, we suggest that the yak chymosin gene recombinant Pichia pastoris strain could provide an alternative source of rennet production.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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