rbcL 유전자 발현조절에 관한 연구의 일환으로 Cp DNA로부터 분리한 rbcL 유전자를 클로닝하였다. 옥수수의 엽록체로부터 DNA를 분리한 후 제한효소 BamHI으로 절단하여 rbcL 유전자가 포함된 BamHI 9 절편을 pUC19에 클로닝하여 재조합 플라스미드 pRLYS1을 만들었다. 쌀의 rbcL 유전자 일부를 probe로 사용하여 pRLYS1과 Southern hybridization한 결과와 제한효소 BamHI, HindIII, 그리고 PstI으로 절단된 pRLYS1 절편의 전기영동 결과로부터 재조합 플라스미드의 내부에 완전한 rbcL 유전자의 존재를 확인하였고 삽입방향을 결정하였다.
To know the changes of rbcL mRNA level by illumination, Northern hybridization analysis was performed with maize (Zea mays L.cv. Golden X Bantam). The average level of rbcL. mRNA in the light-grown shoots was 3.1 times higher than that of the dark-grown shoots after 6 to 10 growth days. The maximum difference of rbcL mRNA level between the dark-grown and the light-grown shoots was 5.1 folds. These results indicate that accumulation of rbcL mRNAin maize shoots is induced by light. Since the transcriptional DNA binding proteins and their cognate promoter elements, we carried out gel-retardation assays to elucidate the specific binding proteins on the rbcL promoter. It was found that plastid proteins of light-grown shoots bound to the R2 DNA fragment (-33 to -229) and R3 DNA fragment (-230 to -418 from ATG) of the rbcL promoter. From the results of competitive binding assays and heat or protease treatments, it was demonstrated that the bindings were sequence-specific DNA-protein interactions. Therefore, it could be concluded that the rbcL promoter region has at least two specific recognition sites for plastid proteins.
In order to investigate the effects of plant hormones on the quantitative changes in mRNA of maize (Zea mays L.) rbcL, we used GA3, IAA, ABA and BAP. GA3 at the concentration of 10-4M resulted in decrease in rbcL gene transcript to 62%. IAA decreased the amount of rbcL transcript to about 70% at all the hormone concentrations tested. ABA did not cause a noticeable change in the amount of rbcL transcript, but BAP increased the amount of rbcL transcript to 153% at 10-8M and 123% at 10-5M, respectively. Thus, it appears that BAP is related to the increase in the amount of rbcL transcript by light.
고농도 유가공폐수의 유기물 및 질소, 인의 제거효율을 비교하기 위하여 두 개의 반응 시스템을 구성하였다. 하나는 하나의 RBC 반응조와 3단 점감포기조로 구성한 시스템이며 다른 하나는 RBC 반응조 2개를 연속으로 구성하고 3단 점감포기조로 구성한 시스템이다. 본 연구에 적용한 바실러스 미생물은 RBC의 끈상미생물접촉재에 부착하여 수행하였다. 각 시스템으로 유입되는 유가공폐수의 BOD 평균농도는 988mg/L, 1,046mg/L이었으며, 유출수 BOD 농도는 21.4mg/L, 15.9mg/L로 제거율은 97.8%, 98.5%의 결과를 보였다. RBC 단일공정 유입수의 평균 $COD_{cr}$ 농도는 1,837mg/L, 유출수는 53.0mg/L로 96.7%의 제거 효율을 보였으며 RBC 연속공정 유입수의 평균 $COD_{cr}$ 농도는 1,852mg/L, 유출수는 평균 27.8mg/L로 98.5%의 제거효율을 보였다. 유입수 T-N 분석결과 RBC 단일공정은 평균 51.9mg/L로 측정되었고, RBC 연속반응공정에서의 유입수 평균은 54.3mg/L이었으며, 유출수는 각각 6.6mg/L, 4.7mg/L로 87.2%, 91.3%의 제거효율을 보였다. T-P에 대한 RBC 단일공정과 RBC 연속공정에서의 분석 결과 유입수 평균농도는 각각 8.9mg/L, 9.1mg/L로 측정되었고, 유출수 농도는 1.6mg/L, 1.0mg/L로 T-P 제거율은 82%, 89%로 나타났다.
The DNA fragment containing ginseng ribulose-1,5-bisphosphate carboxytase/oxygenase large subunit(rbcL) gene was cloned from the ginseng chloroplast EcoRl library by colony lift hybridization with tobacco rbcL gene probe. From the screened clone, the DNA fragment containing ginseng rbcL gene was digested with several restriction enzyme and analyzed by Southern blot hybridization for the construction of restriction map. The ginseng rbcL gene fragment was subcloned in pBluescript II SK + vector and sequence analysis was performed. The nucleotide sequence of ginseng rbcL gene was compared with those of petunia, tobacco, alfalfa, rice and barley, which showed a homology of 93.1%, 95.2%, 90.5%, 85.5% and 84.3%, respectively.
Morphology and molecular phylogeny of a red algal species, Hypnea flexicaulis that is recently described from Japan, were investigated based on 23 collections from Korea (21), Taiwan (1), and the Philippines (1). Hypnea flexicaulis has percurrent axes with flexuous, antler-like branches which have wide branching angles, and abaxially curved ultimate branchlets. In order to study DNA divergence and phylogenetic relationships of the species, we determined plastid rbcL and mitochondrial cox1 sequences from the 23 collections. All 21 specimens from five different locations in Korea were almost identical to H. flexicaulis from Japan in rbcL sequences. Although there was a difference of three to five base pairs (bp) between samples from Korea and the Philippines or between the Philippines and Taiwan, Bayesian analyses of the rbcL data showed that all specimens from Korea, Japan, the Philippines, and Taiwan were strongly monophyletic. However, it is interesting that specimens from the Philippines differed by 31-34 base pairs in mitochondrial cox1 gene from those of materials from Korea and Taiwan, which differed by one to seven bp in rbcL between them. Although H. boergesenii is different from H. flexicaulis in having many antler-like branchlets, both appeared as sisters in all analyses of the rbcL data. This is the first report of H. flexicaulis from Korea based on morphology, rbcL, and cox1 gene sequences.
DNA 바코드는 게놈 DNA의 단편을 이용해 형태적 지식없이 종을 동정하는 방법으로 전 세계적으로 최근에 많이 이용하고 있으며 고등식물에서는 엽록체 rbcL과 matK 유전자를 이용하고 있다. 본 연구에서는 표준 식물 바코드마커와 핵 ITS 부위를 이용하여 국내 포아풀아과 잡초 16속 29종 163생태형의 바코드 데이터를 생산하는 것을 목적으로 하였다. 더불어 포아풀아과의 바코드에서 각 마커의 효율성도 조사하였다. 바코드 결과 PCR 증폭과 염기서열 분석성공률은 rbcL에서 가장 높았으며 matK에서 가장 낮았다. 반대로 바코드 갭은 matK에서 가장 높은 반면 rbcL에서 가장 낮았으며, 종 식별 해상력은 matK에서 가장 높고, ITS에서 가장 낮았다. 그러나 바코드 갭과 종 식별 해상력이 가장 높은 matK를 포아풀아과에서 바코드 마커로 이용하는 것은 너무 낮은 PCR 증폭과 염기서열 분석성공률(58.3%) 때문에 고려해야할 것으로 생각된다. 단일마커로 rbcL과 ITS는 포아풀아과의 바코드에 적절하게 이용될 수 있으며, 두 마커를 조합으로 이용하면 공통으로 분석된 샘플에 따라 바코드 갭과 종 식별 해상력을 높일 수 있었다. 포아풀아과의 바코드데이터는 미국의 국립생물공학정보센터에 기탁하여 genbank 번호를 부여받아 공개하였다.
한국산 옻나무속 6종에 대하여 분자식물학적 방법으로 계통유연관계를 확인하기 위하여, nrDNA의 ITS 구간과 cpDNA rbcL 염기서열을 사용하여 계통분석한 결과 ITS 1의 길이는 $246{\sim}253\;bp$이었고, ITS 2는 $234{\sim}244\;bp$이었다. ITS 1의 길이는 Rhus sylvestris와 R. succedanea에서 246 bp로 가장 작았으며, R. verniciflua에서 253 bp로 가장 긴 것으로 나타났다. ITS 2의 길이는 R. verniciflua가 234 bp로 가장 짧았으며, R. trichocarpr가 244 bp로 가장 길게 나타났다. 이들 분류군의 G+C Content는 ITS 1에서는 $58.0{\sim}68.13%$의 범위를 나타냈고, ITS 2에서는 $59.75{\sim}68.46%$로 나타나 두 구간이 비슷한 비율을 보이고 있었다. ITS 1에서의 G+C content는 R. sylvestris가 58.0%로 가장 낮았으며, 가장 높은 값은 R. ambigua가 68.13%로 확인되었다. ITS 2에서는 외군인 Cotinus coggygria가 59.75%로 가장 낮았으며, R. ambigua가 68.46%로 가장 높게 나타났다. 한국산 옻나무 속에서 ITS 염기서열은 일반적으로 피자식물이 갖는 G+C content 범위 안에 포함되는 것으로 확인되었다. 한편, rbcL의 길이는 1,428 bp로 모든 종에서 동일하였다. 또한 rbcL의 G+C content는 $43.56%{\sim}43.77%$로 나타나 종간에 거의 차이가 없음을 확인하였다. 연구결과 rbcL gene은 옻나무속의 종간 계통유연관계를 해석하는데 유용하지 않았으며, ITS 1 구간의 염기서열 변이는 향후 옻나무속을 분류할 때 신속하게 분류할 수 있는 분류 marker로 이용할 수 있다고 판단되었다.
Using rotating biological contactor(RBC) with artificial endogenous stage and aerobic fixed biofilm reactor(AFBR), organic material removal and biological nitrification of piggery wastewater has been studied at a pilot plant. RBC was operated in the endogenous phase at a interval of every 25 days. The concentration of COD, BOD and TKN in influent wastewater were from 2,940 to 3,800 mg/L, from 1,190 to 1,850 mg/L and from 486 to 754 mg/L respectively. The maximum active biomass content represented as VSS per unit aera was $2.0mg/cm$^{2}$ and biofilm dry density of $17mg/cm^{3}$ was observed at biofilm thickness of $900{\;}{\mu}m$. It was observed that the pilot scale RBC/AFBR process exhibited 72 percentage to 93 percentage of BOD removal, In order to obtain more than 90 percentage of BOD removal, the organic loading rate to the RBC/AFBR process should be maintained less than $0.09{\;}m^{3}/m^{2}{\cdot}day(125.9g{;\}BOD/m^{3}{\cdot}d$. The TKN removal efficiencies was from 45.5 to 90.9 percentage according to vary influent loading rate, It was estimated that the RBC/AFBR process consumed approximately 6.2 mg/L(as $CaCO_{3}$) of alkalinity per 1 mg/L of $NH_{3}$-N oxidized as the nitrification took piace.
Objectives : Pinelliae Tuber has been used as a typical unauthentic herbal medicines. Due to the morphological similarity between Pinelliae Tuber and adulterants, the correct authentication is very difficult. Therefore, we introduced DNA barcode to establish a powerful tool for the authentication of Pinelliae Tuner from adulterants. Methods : To obtain DNA barcode regions, genomic DNA was extracted from nineteen specimens of Pinellia ternata, Pinellia pedatisecta, Pinellia tripartita, and Typhonium flagelliforme, and matK and rbcL genes were amplified. For identification of species specific sequences and analysis phylogenetic relationship, a comparative analysis were performed by the ClastalW and UPGMA based on entire sequences of matK and rbcL genes, respectively. Results : In comparison of two DNA barcode sequences, we elucidated the phylogenetic relationship showing distinct four groups depending on species and identified 40 and 20 species specific nucleotides enough to distinguish each species from matK and rbcL gene, respectively. The sequence differences at the corresponding positions were avaliable genetic marker nulceotides to discriminate the correct species among analyzed four species. These results indicated that phylogentic and comparative analysis of matK and rbcL genes are useful genetic markers to authenticate Pinelliae Tubers. Conclusions : The marker nucleotides enough to distinguish P. ternata, P. tripatrita, P. peditisecta, and T. flagelliform, were observed at 40 positions in matK gene and 20 positions in rbcL gene sequence, respectively. These differences can be used to authenticate Pinelliae Tuber from adulterants as well as discriminate each four species.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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