To investigate the possibility of using alkalophilic Bacillus sp. K-11 as a host for molecular cloning, plasmid pUB110 and pBD64 were introduced into alkalophilic Bacillus sp. K-17 by protoplast transformation system. Protoplasts of Bacillus sp. K-11 were prepared by treatment with 200 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ Iysozyme in SMM buffer containing 0.4M sucrose. Optimal temperature, pH and culture time for protoplast formation were 4$0^{\circ}C$, 7.0 and 4hrs, respectively. Cell wall was regenerated efficiently on DM3 medium containing 0.8% agar and 0.5M sodium succinate. Under these conditions for protoplast formation and regeneration, the highest transformation efficiency was obtained with cells incubated for 4hrs, and using 30%(V/V) of 40%(W/V) PEG6,000, In characteristics of transfer-mants, plasmid pUB110 was more stable than plasmid pBD64 in Bacillus sp. K-17. Maximum xylanase production of both transformants carrying pUB110 and pBD64, respectively was similar, but under the same conditions, enzyme secretion by transformant carrying pUB110 was earlier than that of transformant carrying pBD64.
This paper reports an improved protocol for isolation, culture and regeneration of Lotus corniculatus protoplasts. A range of parameters which influence the isolation of L. corniculatus protoplasts were investigated, i.e., enzyme combination, tissue type, incubation period and osmolarity level. Of three enzyme combinations tested, the highest yield of viable protoplasts was achieved with the combination of 2% Cellulase Onozuka RS, 1% Macerozyme R-10, 0.5% Driselase and 0.2% Pectolyase. The use of etiolated cotyledon tissue as a source for protoplast isolation proved vital in obtaining substantially higher protoplast yields than previously reported. Culture of the protoplasts on a nitrocellulose membrane with a Lolium perenne feeder-layer on the sequential series of PEL medium was highly successful in the formation of microcolonies with plating efficiencies 3-10 times greater than previous studies. Shoot regeneration and intact plants were achieved from 46% of protoplast-derived cell colonies.
Acetaminophen, a widely used analgesic, can be formed by N-acetylation and p-hydroxylation of aniline. Interspecific protoplast fusion technique was used to get acetaminophen directly from aniline and to increase the productivity of acetaminophen. Three auxotrophic mutants were obtained from S. griseus(ATCC 13273) and S. hygroscopicus(KCTC 1089) by N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(NTG) treatment. Regeneration frequencies of S. griseus$(his^-)$, S. griseus$(lys^-)$, S. hygroscopicus$(arg^-)$ were 42%, 45%, and 31%, respectively. Fusion of protoplasts carrying different auxotrophic markers was achieved by treatment with polyethylene glycol. When protoplasts were treated with 50% polyethylene glycol for 3 minutes, the fusion frequency between S. griseus$(his^-)$ and S. hygroscopicus$(arg^-)$ was $3.8{\times}10^{-5}$. The fusion frequency between S. griseus$(lys^-)$ and S. hygroscopicus$(arg^-)$ was $5.6{\times}10^{-4}$. When we checked the production of acetaminophen, thirty-four out of the fifty-six fusants produced larger amounts of acetaminophen than the parent strains did. Nine fusants produced twice more and twenty-five fusants produced one to two times more of acetaminophen than their parents.
Protoplast formation and regeneration from wild-type and auxotrophic mutants of Candida pseudotropicalis CBS 607 as well as fusion between complementary mutants were carried out. Frequencies of protoplast formation from wild-type and histidine or adenine requiring mutants ranged from 96 to 100% whereas those from methionine or tryptophan auxotrophs were 52 and 72%, respectively. When bovine serum albumin(4mg/ml, BSA) was added to protoplasting buffer for cells of methionine or tryptophan auxotrophs grown in a medium supplemented with myoinositol(0.5mg/ml), 96-99 % of cells were converted to protoplasts. Protoplasts were regenerated at the frequencies ranging from 18 to 20%. However, the addition of BSA to protoplasting buffer and the supplement of myoinositol to a medium of cell growth doubled the regeneration rate except adenine auxotroph in which such an improvement was not observed. It was found that optimal concentrations of polyethylene glycol and $CaCl_2$ are 20% and 100mM while optimal pH and exposure time are 6.0 and 30min. The fusion frequencies between complementary mutants ranged from $1.5{\times}10^{-3}\;to\;8.8{\times}10^{-3}$ and were enhanced by the improvement in the rate of protoplast regeneration. When histidine auxotroph was fused with tryptophan mutant, several fusion products were obtained which were found to be in the state of aneuploid or diploid, judging from DNA content and the presence of a large nucleus in the products.
In order to investigate physiological characteristics of fusants by interspecific protoplast fusion of the genus Cellulomonas, protoplasts of Cellulomonas flavigena NCIB 12901 and Cellulomonas bibula NCIB 8142 were fused and cell wall regenerated. To give gene maker, C. bibula was treated with 500 ug/ml NTG for 1 hr and arginine requiring auxotrophic mutants were isolated. Protoplasts of the genus Cellulomonas were obtained by treatment with $600{\mu}{\textrm{g}}$/ml lysozyme, and 0.5M sorbitol was optimal for osmotic stabilizer on protoplast fromation. Protoplast fusion was enhanced by 40% PEG)M.W.6,000) containing 25 mM $CaCl_{2}$ at $30^{\circ}C$ for 30 min and fusion frequency between C. bibula and C. flavigena was $5\times 10^{-4}$. Processes of protoplast formation, cell wall regeneration and protoplast fusion were obsdrved by scanning electron microscope. By comparing enzyme activities of cellulase, exocellobiohydrolase, .betha.-glucosidase of the parent strains of Cellulomonas with those of thier mutants and fusants, fusants with increased enzyme activity were obtained. By the studies on nutritional requirement, antibiotic resistance, cellulolytic enzyme activities, type of peptidoglycan and motility of two mutants and fusants, fusants were proved to be recombinant of both mutant strains.
Forniation ancl ~regcncration oi' conitlial pro1oplast of Pc, ti~i.rlli~in~~~ c~rr~~culo.hryupmel.- - czllulolytic Ihngus. were examined. By using Novozyme 134(1'!/0 w/c) as a cell wall lytic enzyme. the highest yield of protopl;~sts exceeding 501%, war obtained from the qwollen conidiosporcs preincubatrd in the minimal medium containing 2-tleoxy-D-glucose(2-UC;. 75 pglml) for 10-11 11. No protoplast were obtained horn dormant spores. The regeneration frequency of the protoplasts was 49.2'!11. which was higher than that of mycclium originated protoplast (4.6-17.X1X, . in 0.6 M MgS04. pH 5.6). 'l'lie best osmotic stahilizcr ror the isoaltion and regcueration of thc protoplast was 0.6 M iimmonium sulfatc and 0.6 M magnesiuni sulfhte. respectively. 'I'lie process of the protoplast isolaiton l'ro~n swollen cnnirliospore ancl regeneration ha\, ing two pattcrns from protoplast were obsen'etl through light microscope.
The conditions for the protoplast fusion of auxotrophic mutants of Penicillium verruculosum were determined. A preparation of commercial enzyme Novozym 234 was used to successfully isolate protoplast from the 20hr old mycelium of P. verruculosum. Under optimal condition, the protoplast yield ranged from 2.4$\times$10$^7$ to 3.0$\times$10$^7$ protoplasts from 400mg of damp mycelia of various auxotrophic mutant strains. The regeneration frequency ranged from 26.6 to 42.4% and the spontaneous reversion frequency of the protoplasts on the regeneration minimal medium was less than 10$^7$. The optimal concentration of PEG 6000 was 20%, and exposure of protoplasts to PEG for 10 min was found to be sufficient for protoplast fusion. Optimal pH of fusion mixture was deter-mined as 5.5 and l0mM of calcium chloride in fusion mixture effectively enhanced the protoplast fusion frequency. Under optimal condition, the fusion frequency between various auxotrophs ranged from 1.8$\times$10$^{-3}$ to 3.5$\times$0$^{-3}$.
Streptomyces actuosus DMCJ-49 and Streptomyces minoensis DMCJ-144 produce the .alpha.-amylase inhibitor. Inerspecific protoplast fusion technique was used to increase the productivity of .alpha.-amylase inhibitor. Four auxotrophic mutants were obtained respectively from two strains by N-methyl-N'-nitor-N-nitrosoguanidine(3mg/ml) treatment. The optimum conditions for the protoplast formation of Streptomyces actuosus DMCJ-49 ade was as follows; 1.2% w/v of glycine, 3mg/ml of lysozyme, and 30 min of lysozyme treatment followed by 36 hr. incubation in the protop-last formation medium. In case of DMCJ-144-his those were 1.2%w/v, 3 mg/ml, 30 minutes and 60 hours, respectively. Regeneration was accomplished with hypertonic soft agar medium that contained 0.4M sucrose, 20mM CaCl$_2$, 50 mM MgCl$_2$ and low levels of phosphate. Fusion of protoplasts carrying different auxotrophic markers was achieved by treatment with polyethylene glycol. The optimum concentration of polyethylene glycol 1450 for the production of recombinants was 40%w/v. When the protoplasts was treated with 40% polyethylene glycol for 30 minutes, the frequency of recombinants was 6.5$\times$$10^{-3}$ and the $\alpha$-amylase inhibition activity of $ade^-his^-$ No. 4, which is the fusant with the most improved activity increased from 33 to 125 I.U./ml.
A system was established for induction of multi-shoots and plant regeneration from mesophyll protoplasts of alfalfa, Medicago sativa L. cv. Vernal. Different hormonal effects were tested at each step of protoplast culture, i.e. cell division in modified Kao's liquid medium (K566-7). calli formation on SH semi solid medium, and multi-shoot regeneration from calli on SHa and SHb solid media. Frequency of multi-shoots and plant regeneration was affected by various combinations of phytohormones in final step. The evaluation of multi-shoots induction systems via protoplast culture was discused.
Protoplasts of palisade cells were aseptically isolated from leaves of Nicotiono apicona Merxm. by the one step enzymatic method. Efficiency of colony formation were depended on cell density and light condition during incubation, but an intensity of 47 ft-c during a period of 2 weeks after isolation of the protoplasts in the Nagata and Takebe's medium promoted the planting efficiency. Protoplast - derived calli of N. africana can be differentiated into shoot when cultured on Murashige and skoog's medium containing IAA(0.Smg/$\ell$) and zeatin(5.0mg/$\ell$).
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.