Agrocybe cylindracea의 톱밥배양 균사체로부터 항암효과가 있는 것으로 알려진 단백다당류를 분리, 정제하였으며 그 특성을 조사하였다. Agrocybe cylindracea 균사체로부터 열수추출한 조단백다당류(Fr.CB)의 수율은 ethanol 농도가 95%일 때 2.974 g으로서 원재료인 톱밥균사체를 기준으로 0.74%였다. 이 조단백다당류(Fr.CB)를 박막여과, ion exchange chromatography, 그리고 gel filtration에 의해 정제하였다. 조단백다당류 Fr.CB를 박막여과하여 분획한 결과 분자량 30만 이상의 분획(Fr.B)이 38.6%를 차지하여 고분자 단백다당류가 주성분임을 알 수 있었다. Fr.B를 ion exchange chromatography로 분리한 결과 2개의 분획이 17.4%(Fr.B-1), 10.3%(Fr.B-2)의 수율로 얻어졌다. 이들 분획을 농축한 다음 gel filtration한 결과 거의 순수한 단일 단백다당류의 peak를 얻을 수 있었다. Fr.B-1을 분리하여 얻은 $Fr.B-1-{\beta}$ 분획의 수율은 Fr.B-1을 기준으로 42.5%였다. 항암효과의 가능성이 가장 높은 것으로 판단되는 최종 정제된 분획인 $Fr.B-1-{\beta}$의 분자량은 710 KDa 부근이었으며 단당류의 조성을 HPLC로 분석한 결과, glucose가 주성분이었고 그외 fucose, galactose도 검출되었다. 또한 아미노산 조성을 분석한 결과 glutamic acid, alanine이 비교적 많이 검출되었고 cysteine은 검출되지 않았다.
Crude polysaccharides from rapeseed meal (PRM) were extracted with 0.3% NaOH aqueous solution, followed by further purifications and 2 fractions, namely PRM1 and PRM2, were separated with a DEAE-cellulose DE-52 column. Their primary compositions were analysed and antioxidant activity was determined, including scavenging activity toward superoxide anion radicals, hydroxyl radicals, and nitric oxide radicals, reducing power, and inhibitory effects against the microsomal lipid peroxidation, compared to that of L-ascorbic acid. The results indicated that PRM1 and PRM2 exhibited not only good reducing power and inhibitory effects on the microsomal lipid peroxidation, but also strong scavenging activity toward superoxide anion radicals, nitric oxide radicals, and hydroxyl radicals. In addition, positive correlations were also observed between the superoxide anion radical scavenging activity and the protein contents of the polysaccharides, and the reducing power and the sulfate contents. These findings thus clearly suggest the polysaccharides possess direct and potent antioxidant activity.
The behavior and influence of EPS on membrane fouling by changing of hydraulic retention time was investigated, using lab. scale submerged membrane bio-reactor, which was operated with gravitational filtration and fed supernatant of primary sedimentation in waste water treatment plant as influent. The membrane was adopted micro-filter of polyethylene hollow fiber. EPS was analysed as polysaccharides and protein especially, into soluble and bound EPS separately. The concentration of soluble EPS was increased at short HRT, then membrane fouling was rapidly progressed and flux was depressed. The most of EPS clogged membrane pore were polysaccharides, while protein was important parameter affected on membrane fouling because of it's more accumulating in the more term operating.
구름버섯 배양균사체와 야생 구름버섯 자실체로부터 얻은 protein-bound polysaccharide의 당과 단백질 함량을 비교하였을 때 배양균사체인 경우보다 야생 자실체의 경우가 당 함량이 더 높게 나타났으며 단백질 함량은 더 적게 나타났다. 구름버섯에서 부터 얻은 시료를 methanolysis시킨 후 HPLC로 분석하였을 때 배양균사체인 경우 4종류의 단당이 경출되었고 그중 mannose가 가장 함량이 많은 반면 야생 자실체인 경우 3종류의 단당이 경출되었으며 그중 glucose가 가장 많이 존재하였다. 구름버섯에서부터 얻은 시료에 lactose가 혼합되었을 경우 HPLC로 구별할 수 있었다. 구름버섯에서 얻은 시료의 구성 아미노산을 분석하였을 때 시료 모두에서동일한 17종의 아미노산이 검출되었다.
To investigate constituents of Russula pseudodelica Lange and Microporus affinis(Blume et Nees) Kuntze, quantitative analyses of free and total amino acids were carried out with G. L.C. and an amino acid autoanalyzer. Polysaccharides of the two mushrooms were extracted with hot water and the filtrate was concentrated. The addition of three volumes of ethanol to the concentrate formed precipitation of crude polysaccharides which were analyzed by G.L.C. and H.P.L.C. Sixteen amino acids and four monosaccharides were identified in the protein-bound polysaccharides of the two mushrooms. The polysaccharides of M. affinis showed antineoplastic activity against sarcoma 180 implanted in mice.
The possibility of solid-substrate fermentation of Lentinus edoes for the productin of protein-boud polysaccharides (PBP) was studied. Zeolite and orchid-pot soil were used as solid materials for the culture because of the desirable physical properties. Sucrose and starch were good carbon sources for the production of PBP by the solid-substrate fermentatin of L. edodes. Among the nitrogen source, bactosoyton was very effective for the PBP production. The optimum pH for solid-substrate fementation for the production of PBP was at pH of 5.5. The PBP production reached to 5∼5.5mg per 100g solid-substrate.
한국산 표고버섯(Lentinus edodes SR-1) 균사체를 액체배양한 후 균사체로부터 추출, 정제한 PBP의 항암효과 및 면역학적 특성에 대하여 실험하였다. PBP의 항암효과는 in vitro 배양에서 암세포의 배수시간을 2배로 연장하는 활성단위 1 unit은 mouse leukemic cell인 $P_{388}$과 $L_{1210}$의 경우 1 mg 정도였으며, 인체의 장암세포인 HCT-48, HRT-18, HT-29 및 간암세포인 Hep G2의 경우 각각 4.4, 3.6, 6.6, 2.6 mg이었다. 그리고 $P_{388}$과 $L_{1210}$의 경우 배지 1 mL당 4 mg 정도, HRT-18 및 HT-29, Hep G2의 경우 9 mg의 PBP를 첨가했을 때 암세포를 사멸시키는 것으로 나타났다. $P_{388}$과 $L_{1210}$, HCT-48, Hep G-2의 PBP 처리에 따른 암세포의 크기 분포도 변화는 PBP를 처리하지 않은 대조군에 비하여 시간이 경과함에 따라, 그리고 PBP의 농도가 증가함에 따라 비례적으로 적은 쪽으로 이동하였다. In vivo 실험에서 대조군보다 PBP를 첨가한 군에서 비장의 무게가 증가하였으며, 용혈반 형성실험에서 PBP를 투여한 군이 대조군에 비하여 항체 형성세포가 2배로 증가하였다.
구름 버섯균(C. versicolor)를 고체배양(solid-substrate culture)하여 단백다당류를 생산하기 위한 각종조건을 검토하였다. 여러가지 고체재료가 이용될 수 있으나 배양 후 단백다당류의 열수추출 과정에서의 부적합성 등의 이유로 인하여 실질적으로 zeolite나 난 재배용 토양이 이용 가능한 천연고체 재료라고 볼 수 있다. Zeolite와 난 재배용 토양을 이용한 고체발효에서 단백다당류 생산에 미치는 탄소원의 영향을 검토한 결과 glucose, sucrose 및 starch에서 단백다당류 생산량이 높게 나타났으며, 질소원중에서는 bactosoytone과 peptone이 고체발효에 의한 단백다당류 생산에 가장 적합한 질소원으로 확인되었다. 단백다당류 생산을 위한 고체발효에서 최적 pH범위는 5-6이었고, 고체재료 100 g당 조단백다당류 생산량이 5-6 mg에 이르렀다. 배지조성별 단백다당류의 생산성 시험의 결과 C. versicolor의 최적배지 조성인 CVM에서 최고의 생산성을 보였으며, 종합적으로 균사성장에 적합한 조건에서 단백다당류의 생산성도 높다고 하겠다.
고등균류 균사체에 대한 면역조절기능과 항알레르기성 물질을 탐색하기 위해서 우선 단백다당류를 추출 회수해서 몇 가지 관련된 실험을 수행하였다. 면역감수성이 우수한 BALB/C 마우스를 통해서 적혈구 응집과 용혈반응, 항체생산능을 확인하기 위해서 PFC와 RFC실험, 마크로파아지와 임파구 세포들의 탐식능력 실험을 수행한바 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 탐식능의 결과는 상황버섯(Phellinus igniarius), 장수버섯(Fomitella fraxinea), 버들송이(Agrocybe cylindracea), 균사다당체 모두가 복강탐식세포, 말초임파구, 비장의 식세포에 대해서 유의성 있는 식작용을 확인했다 상황은 복강식세포, 버들송이는 비장식세포에 대해서 식작용을 활성화시키는 결과를 나타냈다. 2. PFC와 RFC의 실험결과에서도 대조군에 비해 시료를 투여한 실험군에서 면역세포가 상황 130%, 장수 90%, 버들송이 70% 정도로 증강된 활성을 보였다. 3. 용혈소가와 응집소가는 전반적으로 대조군에 비해 균사단백다당체가 $2{\sim}3$배의 높은 값을 보였다.
To find antitumor components from higher fungi, the mycelia of Collybia confluens (Pers. ex Fr.) Kummer were cultured in artificial media. For efficient production of the mycelia, the influences of various modifications of culture conditions were examined. A water-soluble protein-bound polysaccharide fraction, Fr. A, was obtained from the mycelia by hot water extraction. When Fr. A was purified and fractionated by DEAE-cellulose and Sepbadex G-200 gel filtration chromatographies into four fractions which were designated B, C, C-I and C-II. The tumor inhibition ratios of these fractions ranged from 46% to 75% against the solid forms of sarcoma 180 in ICR mice at doses of 20 and 50 mg/kg/day when given intraperitoneally. Especially, Fr. C which was named Collyban(CB) exhibited a marked life-prolonging effect of the mice against ascitic forms of sarcoma 180 at a dose of 50 mg via i.p. administration. To extend spectra of the antitumor activities and eliminate the effects of allograft rejection, the characterization of antitumor effects of CB was performed in syngeneic host-tumor systems. It did not show any antitumor activity against L1210 murine leukemia in $CD_2Fl$ mice but prolonged their life span against ascitic forms of $MM_{46}$ carcinoma in $C_3H/He$ mice. Also it exhibited antitumor activity against human cervical cancer HeLa cells that were xenografted into nude mice having BALB/c genetic backgrounds by the i.p. injection at a dose of 100 mg/kg/day. In order to characterize the antitumor components, CB was examined by chemical analysis. It was acidic protein-bound polysaccharides composed of 31% polysaccharide, 27% protein and 3% hexosamine. CB was fractionated into two fractions, Fr. C-I(M.W.: 500 Kd) and Fr. C-II(M.W.:30 and 8 Kd) by Sephadex G-200 gel filtration chromatography.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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