In spite of the powerfulness for the simultaneous study of proteome expression and post-translational modification, 2-D PAGE has inevitable limitation on detect low aboundant proteins. Since many of the low abundant proteins are likely to have very important regulatiory functions in cells, separation and analysis of low copy number proteins is an important issue in proteome studies and challenge for 2-D techniques. Among various methods developed to detect low abundant proteins, electrophoretic protein prefractionation, chromatographic protein prefractionation, and subcellular fractionation are explained in this paper. Their practical strengths and weaknesses are also explained with current research trends.
한국농업기계학회 2000년도 THE THIRD INTERNATIONAL CONFERENCE ON AGRICULTURAL MACHINERY ENGINEERING. V.III
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pp.792-802
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2000
The coagulation of Chinese cabbage juice can be accomplished by applying the combine method of the formic acid with rate of 3% and in four hours the propionic acid with rate of 1 % in the juice. The separation of coagulation into the protein paste and the brown juice completed in 6.5 hours by set up method in special storage. The protein paste can be stored safely for 30 days in anaerobic condition.
대량발효 후 미세여과막과 MWCO 100K, 50K의 한외여과막을 이용한 막분리시스템을 적용하여 MTGase를 분리한 결과 pore size 1.6, $0.7\;{\mu}m$의 cellulose fiber 재질의 예비여과막과 $0.45\;{\mu}m$ cellulose acetate재질의 미세여과막을 이용하여 얻어진 분리액을 MWCO 100K와 50K를이용하여 농축시킨 결과 enzyme의 농도가 1.29 units/ml, 효소 비활성도는 약 0.2 units/mg protein 으로 나타났으며 초기 배양액에 비해 3.7배의 농축효과를 보였다.
본 연구는 크로마토그래피적 방법에 의한 단백질 분리를 규모화시키기 위한 기초적인 실험을 행한 것이다. 단백질 분리를 위해서 화학적 처리된 폴리에틸렌섬유를 미국 Millipore사의 여과 Cartridge에 장착시키고, 그 시스템에서 단백질인 5%의 Bovine Serum Albumin을 통과시켜 섬유 표면의 단백질 흡착능력과 결합 가역성 등을 관찰하였다. 또한 실험자료들을 Omega 프로그램이 내장된 컴퓨터와 맥킨토시의 Kaleidagraph로 자료처리 한 것을 보여주었다.
Recent advances in recombinant DNA technology have resulted in development of many new protein drugs. Due to the unique properties of protein druges, they have to be delivered by parenteral injection Although delivery of protein drugs by other routes, such as pulmonary and nasal routes, has shown some promises, to date most protein drugs are administered by par-enteral routs. For long-term delivery of protein drugs by parenteral administration, they have been formulated into biodegradable microspheres. A number of microencapsulation methods have been developed, and the currently used microencapsulation methods are reviewed here, The microen-capsulation methods have been divided based on the method used. They are: solvent evapora-tion/extraction; phase separation (coacervation);spray drying; ionotropic gelation/polyelectrolyte complexation; interfacial polyumerization and supercritical fluid precipitation. Each method is de-scribed fro its applications, advantages, and limitations.
The calyx extract of Campsis grandiflora displayed inhibitory activity against protein kinase C from the bovine brain. Separation guided by protein kinase C enzyme assay and bleb forming assay led to isolation of a potent protein kinase C inhibitor that was identified as a known phenylpropanoid glycoside, verbascoside. It suppressed completely bleb-formation of K562 cell surface induced by phorbol 12,13-dibutylate at the concentration of 60 $\mu\textrm{g}$/ml and IC$_{50}$ of the protein kinase C occured at 20 $\mu{M}$. This compound was tested for cytotoxic activity against ten human tumor cell lines in vitro. it exhibited moderate cytotoxic activity against skin tumor cell line M14 (IC$_{50}$ 2.2 $\mu\textrm{g}$/ml) and very weak cytotoxicity against other cell lines (IC$_{50}$>10 $\mu\textrm{g}$/ml)
본 실험에서는 한우초유를 33% ammonium sulfate 포화용액으로 처리하여 조면역글로블린을 얻은 후 gel filtration, ion-exchange chromatography를 이용하여 조면역글로블린의 분리 정도를 조사하고 affinity chromatography column을 이용하여 조면역글로블린으로 부터 Ig G의 결합정도를 알아보고 Protein G Sepharose fast flow system을 이용하여 신속하게 대량으로 Ig G의 분리를 꾀하여 얻어진 Ig G를 이용하여 ELISA방법으로 항체 생성유무를 측정하였으며, 그 결과는 다음과 같다. 1. HPLC상에서 Superose 12 column을 이 용하여 한우초유의 조면역글로블린을 분리한 결과 Holstein초유의 조면역글로블린과 유사한 분리정도를 나타냈지만 약 84%의 Ig G를 한우초유의 조면역글로블린으로 부터 분리할 수 있었다. 2. Mono Q를 이용하여 HPLC에서 한우초유의 조면역글로블린을 gel filtration방법보다 짧은 시간에 분리할 수 있었지만 그다지 분리 정도가 좋지 않은 것으로 나타났다. 3. Hi-trap protein G column이 protein A sepharose CL-4B column보다 더 많은 양의 Ig G를 한우초유의 조면역글로블린으로 부터 얻을 수가 있었다. 4. Protein G Sepharose fast flow system을 이용하여 20mg의 sample양을 주입하여도 충분히 Ig G를 분리할 수 있었으며, ml 당 약 1.25mg의 Ig G를 얻을 수가 있었다. 5. ELISA방법을 이용하여 한우초유의 Ig G에 대한 항체 생성 유무를 측정한 결과, 면역화된 토끼에서 정상 토끼의 혈청에서보다 titer가 높게 나타났으므로 항체생성이 확인되었다.
난포액내 함유되어 있는 단백질성분 중에서 sucrose 층으로부터 정자의 swim-up 이동을 자 극하는 성분을 분리하기 위하여 paper chromatography (PC) 및 reverse phase column (RPC) 과 superose column (SC)를 이용한 액체 chromatography의 분리효과를 조사하였던 바 결과는 다음과 같다. 1. Chromatography용 paper로 분리한 각 band 의 성분은 첨가농도가 증가할수록 정자의 이동과 운동을 자극하였으며, 특히 band 1 성분은 정자의 이동을 유의하게 증가시켰다. 그러나, 동일 첨가수준에서 bands 성분의 정자 이동과 운동자극효과는 난포액의 효과에 비하여 유의하게 낮았다. 2. $\mu$RPC를 이용 2~5mm 난포로 부터 분리한 성분중 RT3.33, RT7.00, RTl3.87 및 RTl6.6A 성분은 정자의 이동을 자극하였으나, 자극효과는 매우 적었다. 3. $\mu$RPC를 이용 10mm 난포로 부터 분리한 성분은 정자의 이동과 활력을 자극하지 않았다. 4. SC를 이용 2-5mm 난포로 부터 분리한 성분 중 RVI.35 성분과 RV0.82 성분은 정자의 이동과 운동을 유의하게 자극하였다. 결론적으로 난포액내 정자의 이동과 운동을 자극하는 단백질 성분은 superose column을 이용하여 효과적으로 분리할 수 있으며, 분리된 RVI.35 성분과 RV0.82 성분은 정자의 swim-up 분리를 자극하였다.
단백질 분리를 위한 한외여과에서의 전기장의 영향에 대하여 조사하였다. 실험은 균일한 막간압력차(2.5 bar)에서 알부민과 라이소자임 용액을 이용하여 이루어졌으며 분리막으로는 셀룰로즈 재질의 분획분자량(MWCO) 30 kDa 한외여과막을 사용하였다. 실험결과 전기장은 알부민 용액을 여과할 때의 투과유속(permeation flux)을 크게 증가시키는데에 도움이 되었다. 투과유속의 개선 이외에도 전기장은 또 다른 흥미로운 효과를 보였다. 단백질 분자의 하전 부호에 따라 전기장은 단백질의 투과를 촉진시키기도 하고 저하시키기도 하였다. 이러한 전기장의 효과를 이용하여 한외여과에서의 용액 투과유속뿐만 아니라 투과선택도도 개선할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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