A substrate specificity of cabbage phospholipase D (PLD) was studied using the synthetic phospholipids having different head groups. The phospholipids were synthesized from phosphatidylcholine and appropriate bases by transphosphatidylation of PLD. The bases used were ethanolamine, serine, ethanol and γ-hydroxybutyric acid. The phosphatidic acid, the product of PLD, was separated in TLC and measured densitometrically. The kinetic parameters were estimated for each substrate and the effects of pH, SDS, Ca2+ and other metal ions were examined. Vmax values found were 3.75, 2.36, 5.59, 1.63, 2.30 nmol/min/μg protein for phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, phosphatidylserine, phosphatidylethanol, and phosphatidylburytic acid, respectively. These results indicate a broad specificity of cabbage PLD toward phospholipids with different head groups. Particularly phosphatidylserine was most easily hydrolyzed by PLD and its activity did not depend on Ca2+.
Effects of exogenous glycerophospholipids on oleate-dependent phospholipase D (PLD) activity were studied in lymphocytic mouse leukemia L1210 cells and in solubilized microsomal phospholipase D of rat brain. Among the phospholipids tested phosphatidic acid had the most stimulatory effects on both PLD activities up to about 3 folds. Lysophosphatidic acid also showed promoting effect on microsomal PLD activity but much less on L1210 cells compared to that of phosphatidic acid. While phosphatidylethanolamine increased PLD activity slightly, phosphatidylinositides were nearly ineffective in the tested sources. The stimulatory effect of phosphatidic acid observed can be utilized to improve the in vitro assay system for oleate-dependent PLD in mammalian sources.
Decay of the spin label attached to cytochrome c or to stearic acid has been measured by electron paramagnetic resonance (EPR) spectroscopy to monitor membrane oxidation induced by cytochrome c-membrane interaction. Binding of cytochrome c sequestered the acidic phospholipids and membrane oxidation was efficient in the order linoleic oleic>stearic acid for a fatty acid chain in the acidic phospholipids. The spin label on cyt c was destroyed at pH 7 whereas that on stearic acid embedded in the membrane was destroyed at pH 4, presumably due to different modes of cyt c-membrane interaction depending on pH. Interestingly, cyt c also interacts with phosphatidylethanolamine, an electrically neutral phospholipid, to cause rapid membrane oxidation. Both EPR and fluorescence measurements indicated that electrostatic interaction is at least partially responsible for the process.
쥐 뇌의 microsome으로 부터 ${\Delta}^{5}-3{\beta}$-hydroxy steroid acyl 전이효소(${\Delta}^{5}-3{\beta}$-OH-SAT)를 detergent를 이용하여 용해한 뒤에 인산지방질 liposome에서 재구성하여 처리하지 않은 microsome의 ${\Delta}^{5}-3{\beta}$-OH-SAT의 활성도와 비교하였다. 용해에 사용한 detergent중에는 deoxycholic acid가 Tween 80이나 Triton X-100 보다 우수한 ${\Delta}^{5}-3{\beta}$-OH-SAT 활성도를 나타냈으며, liposome 생성에 사용한 인산지방질중에서는 난황 및 대두 phosphatidyl-choline이 가장 높은 활성도를 보였으며 그 다음이 phosphatidylethanolamine이었고 phosphatidylserine과 phosphatidic acid는 재구성하지 않은 용해된 효소보다 ${\Delta}^{5}-3{\beta}$-OH-SAT 활성도가 낮았다. 따라서 인산지방질의 head group의 4차 암모늄기나 amine기는 ${\Delta}^{5}-3{\beta}$-OH-SAT의 재구성활성을 촉진시키고 COOH기가 amine기와 함께 존재하거나 amine기가 없으면 이 효소의 활성이 저해됨을 알 수 있었다.
밤을 $20^{\circ}C$에서 9주동안, $1^{\circ}C$에서 15주동안 저장하면서 저장중 지방질의 변화를 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 밤의 총지질중에는 중성지질이 43.4%, 당지질이 26.5%, 인지질이 30.1% 함유되었으며 밤의 저장 동안에 이들의 함량이 증가되었다. 중성지질의 구성지질성분으로는 triglyceride (TG), 1,2-diglyceride (1,2-DG), 1,3diglyceride (1,3-DG), sterolester (SE), sterol (S) 및 free fatty acid(FFA) 등 6종이었으며, 당지질의 구성지질성분으로는 digalactosyldiglyceride (DGDG), monogalactosyl diglyceride (MGDG), sterylglycoside (SG) 및 acylsterylglycoside (ASG) 등 4종이었고 인지질의 주요 구성지질로는 phosphatidylcholine (PC), phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylinositol (PI) 등이었다. 저장중의 지질의 변화를 보면 중성지질의 함량은 저장 5주후에 감소되었고, 당지질은 7주까지는 증가되다가 그 이후 감소되었으며 인지질은 $20^{\circ}C$ 및 $1^{\circ}C$ 양온도구에서 저장기간동안 가장 많이 증가되었다. 그리고 TG, SE, S, DGDG, MGDG의 함량은 $20^{\circ}C$ 및 $1^{\circ}C$ 양온도구에서 저장기간에 따라 증가되었다. 총지질, 중성지질, 당지질 및 인지질, 그리고 TG, DG, ASG, PC 및 PE의 주요 지방산으로는 linoleic acid, oleic acid, palmitic acid 및 linolenic acid 등이었으며 저장기간에 따라서는 $20^{\circ}C$ 및 $1^{\circ}C$ 양온도에서 linoleic acid는 증가하는 반면에, oleic acid 는 감소하였다.
n-3계 EPA와 DHA의 함유 비율이 높은 정어리유와 n-6계 linoleic acid 함유 비율이 높은 홍화유의 혼합 급여가 고지질식이 흰쥐의 뇌, 심장 및 비장의 지방산 대사에 미치는 영향을 구명하기 위해 Sprague Dawley계 숫 흰쥐에게 버터 식이를 대조군으로 하고 정어리유 및 홍화유의 혼합 비율을 달리한 유지를 급여하여 4주간 실험 사육한 후 지방산 조성을 분석 검토한 결고, 뇌 지질중 인지질의 지방산 조성은 EPA 및 DHA의 함유 비율이 높았으며, 특히 phosphatidylethanolamine에서는 DHA의 함유 비율이 월등히 높았고, cardioliipin에서는 arachidonic acid의 함유 비율이 높았다. 심장 인지질의 지방산 조성에서 PUFA의 함유 비율은 5군(4% 정어리유|4% 홍화유)에서 가장 높았고, 특히 DHA 함유 비율은 4군(6% 정어리유+2% 홍화유), 5군에서 높았으며, 비장 지질의 조성 지방산중 EPA 및 DHA의 함유 비율은 3군(8% 정어리유)에서 높았다.
전보(문, 1993)에 이어 은어의 중성 및 인지질의 class별 조성과 각각의 구성 지방산을 분석${\cdot}$비교 한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 은어의 전 부위의 중성지질은 triglyceride가 주성분으로서 $94.8{\sim}99.5\%$를 차지하였으며, 다른 부위에 비하여 내장부위의 조성비가 가장 높았고, 머리부위가 가장 낮았다. 2. 은어의 인지질은 전 부위에서 phosphatidylcholine 및 phosphatidylethanolamine이 주성분이었으며, 이들 성분은 머리와 근육부위에 많은 양이 함유되어 있었다 내장에 cardiolipin, phosphatidylethanolamine, lyso-phosphatidylcholine이 주성분이었다. 3. 중성지질의 주요 지방산은 16:0, 88:1n-9, 16:1n-7, 18:2n-6, 18:0 및 14:0이었고, 크기와 부위에 따른 차이는 미미했다. 이들 중 16:1n-7 및 14:0의 조성비는 인지질에 비해 특히 높은 반면, polyene산의 조성비는 낮았다. 4. 인지질의 주요 지방산은 16:0, 18:1n-9, 22:6n-3, 18:0 및 18:2n-6 등이었다. 이들 중 22:6n-3 조성비는 머리 및 근육에서 특히 높아, 중성지질의 경우에 비해 6배 정도 높은 함량이었다. 은어의 크기에 따른 중성 및 인지질의 구성지방산 조성의 차이는 거의 없었다.
Poly(ethylene glycol)-phosphatidylethanolamine conjugate (PEG-PE) has been used in preparing longcirculating liposomes. As a substitute for PEG-PE which can also be used in the long-circulating liposome formualtions, but can be prepared more readily with a lower cost, PEG-Phe-Chol was synthesized from PEG, phenylalanine, and cholesterol. The addition of the PEG derivative to distearoylphosphatidylcholine (DSPC) led to the formation of mixed micelles as well as liposomes when the derivative content was 10 mol% or greater. On the other hand, the addition of just 5 mol% PEG-Phe-Chol to dioleoylphosphatidylethanolamine (DOPE) generated mixed micelles as well as liposomes, but the formation of mixed micelles was completely inhibited by the addition of cholesterol. The leakage of entrapped calcein out of DOPE/cholesterol (7/3) liposomes containing 5 mol% PEG-Phe-Chol was about 45% during the incubation time for 24 h in 50% rabbit plasma, which was similar to that of the same liposomes containing 5 mol% PEG-dipalmitoylphosphatidylethanolamine (DPPE) under the identical conditions.
A calcium-independent phospholipase $A_2$ ($iPLA_2$) was identified from the cytosolic fraction of rat liver cells. On gel filtration chromatography, the $iPLA_2$ activity was eluted as broad peaks of 150 to 500 kDa. The enzyme was maximally active at pH 7.5, retained 75% of its original activity after heating at $50^{\circ}C$ for 5 h, and was inhibited by $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$, and $Zn^{2+}$ ions, but was not affected by $Na^+$ and $K^+$ ions. The enzymatic activity was increased up to 150% by 1 to 4 mM DTT and was inhibited up to 25% by 0.1 to 1 mM PMSF. The $iPLA_2$ activity had preference for the head group of phospholipids, where phosphatidylethanolamine was preferred to phosphatidylcholine. The results suggest that the $iPLA_2$ may be a novel enzyme distinct from the previously reported $iPLA_2s$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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