A fungus with high phosphate solubilizing activites was isolated from soil using potato dextrose agar-calcium phosphate medium and identified to Penicillium sp. PS-113, based on the morphological characteristics of conidiophore and conidia; flask shape of phialide, simple branching type of conidiophore, and columnar shape of conidial head, in malt extract agar and potato dextrose agar media. The optimum temperature ad initial pH to solubilize rock phosphate in potato dextrose broth-rock phosphate medium were 30$^{\circ}C$ and pH 8.0, respectively. In these conditions phosphate solubilizing activities of Penicillium sp. PS-113 against four types of insoluble phosphate like tricalcium-phosphate, aluminium phosphate, hydroxyapatite and rock phosphate were quantitatively determined. As results, this fungus highly produced free phosphates to the culture broth with the concentrations of 1,283 ppm against tricalcium-phosphate, 585 ppm against rock phosphate, 528 ppm against aluminium phosphate, and 242 ppm against hydroxyapatite, respectively.
A fungus, Penicillium sp. PS-113, isolated from soil showed the high phosphate-solubilizing activity in patato dextrose broth-rock phosphate to produce free phosphates to the culture broth with the concentrations of 585 ppm against rock phosphate. In this medium, the optimum temperature and initial pH to solubilize rock phosphate were 30$^{\circ}C$ and pH 7.5, respectively. In order to make the mass production of the conidia from this fungus, we cultured in on various solid-based media like barley, corn, wheat, rice, rice bran, and compost. As a result, the fungus highly produced conidia ranging from 2.1 to $5.1{\times}10_9$ conidia/g${\cdot}$media on these solid media except compost-based medium, which was 0 times less than others. Effects of inoculation of the phosphate solubilizing fungus as a biofertilizer were studied in perlite-based pot cropped with Zea mays Suwon 19. Inoculation of Penicillium sp. PS-113 increased in plant height (1.4 times), plant weight (5.2~8.1 times) and root length (1.1~1.2 times) at 60-day cultivation, compared to Hogland solution either without $NH_4H_2PO_4$ or displace $NH_4H_2PO_4$ to powdered rock phosphate, a phosphorus source for plant growth.
PDA-calcium phosphate 평판배지를 이용하여 경상남북도 일대의 토양으로부터 인산가용화능이 우수한 사상균을 분리하고 배양특성을 조사하였다. 최종적으로 분리한 인산가용화능이 우수한 사상균 PS-104 균주를 선발하여 형태적 특성을 조사한 결과 이 균주의 분생자는 비가지형으로 끝이 돌출되어 있으며, 균사가 격막으로 형성되는 등의 특징을 갖는 Aspergillus sp. PS-104 균주로 동정되었다. 이 균주의 인광석 분해능이 최대가 되는 최적 배양온도와 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 pH 7.0이었다. 이와 같은 배양조건에서 tricalcium phosphate, aluminium phosphate, hydroxyapatite, 인광석 등의 난용성 인산염에 대한 이 균주의 인산가용화능을 살펴보면 최대 인산가용화능은 tricalcium-phosphate 처리구(1,900 ppm)에서, 최소 인산가용화능은 hydroxyapatite 처리구(320 ppm)에서 확인되었다. 또한 이 균주의 인산가용화능은 질소원으로 첨가한 ammonium 염보다 nitrate 염에서 높게 나타났다.
인산가용화균 Aspergillus sp. PS-104를 생물비료화하기 위하여 이 균주의 액침배양 시 mycelial pellet 형성을 억제하는 배양조건(배지 종류, 초기접종량)과 배지 첨가물(점토광물, 계면활성제, PEG 200)의 종류에 대하여 조사하였다. 그 결과 이 균주는 배지 종류를 달리하여 배양했을 때 SDB=YPD>PDB 순으로 pellet 크기가 감소하였다. 또한 이 균주는 $1{\times}10^{3}{\sim}1{\times}10^{7}$ conidia/ml 범위의 초기접종농도에서는 농도가 높을수록 pellet의 크기가 감소하였다. 또한 bentonite를 제외한 점토광물인 zeolite, diatomite, 황토, kaoline과 talc를 0.1% 농도로 배지에 첨가하였을 경우 pellet 크기가 대조군에 비해서 1/6${\sim}$1/4로 감소하였다 계면활성제인 Tween 80과 Triton X-100 및 PEG 200을 0.1% 농도로 첨가하였을 경우 pellet의 크기가 감소하였고, SDS를 첨가한 경우에는 균의 성장이 완전히 저해되었다.
토양에서 분리된 인산가용화 사상균 Penicillium sp. GL-101 균주를 PDB-인광석 배지에서 액침배양했을 때 유리인산을 배양액속에 다량 방출함으로써 높은 인산가용화능을 보였다. 일반적으로 미생물에 의한 인산가용화 기작은 산성화, 킬레이트 대사산물의 생성, 산화환원 활성 등이 알려져 있는데 본 연구에서는 GL-101 균주의 유리인산 생성기작을 밝히기 위하여 균체를 PDB-인광석 배지에 키우면서 유리인산 생성능을 분광학적인 방법으로 정량분석하였다. 또한 균체의 액침배양중의 pH 변화를 측정한 결과 pH의 급격한 감소 즉 배지의 산성화가 주된 인산가용화 기작임을 확인하였다 즉 이 균주는 배양 4일이 경과하면 pH가 4.0 이하로 떨어지며, 특히 1.0%(w/v)의 황토를 첨가할 경우 pH가 3.2까지 떨어졌다. 이때 pH 감소에 영향을 주는 주 원인물질을 HPLC로 분석한 결과 citric acid 임을 확인하였다. 또한 이 균주는 균체의 생장중에 배지속으로 phosphatase를 생성 ${\cdot}$ 분비하였으며, 특히 황토를 1.0% 첨가했을 때 최대 1.3 unit의 효소활성을 보였다. 그러나 이 균주는 2-ketogluconic acid와 같은 킬레이트 물질은 거의 생성하지 않았기 때문에 이와 같은 기작에 의한 유리인산 생성은 거의 없을 것으로 생각된다. 따라서 Penicillium sp. GL-101 균주의 유리인산 생성기작은 citric acid 생성에 의한 산성화 및 phosphatase 활성의 두 가지 기작에 의한 것으로 결론지었다.
PDA-calcium phosphate 평판배지를 이용하여 경남북 일대의 토양으로부터 인산가용화능이 우수한 1,000여종의 세균과 200여종의 사상균을 분리하였다. 이중에서 인산가용화능이 가장 우수한 사상균 GL-101 균주를 선발하여 MEA와 PDA 배지에서 배양하면서 분생자병과 분생자의 형태적 특성을 조사한 결과 플라스크형의 phialide, 분생자병의 branching type이 simple type이며, conidial head가 columnar shape 등의 특징을 갖는 Penicillium sp. GL-101로 동정되었다. 이 균주의 인광석 분해능이 최대가 되는 최적 배양온도와 초발 pH는 각각 $25^{\circ}C$와 pH 7.5이었다. 이와같은 배양조건에서 tricalcium-phosphate, aluminium phosphate, hydroxyapatite, 인광석 등의 난용성 인산염에 대한 이 균주의 인산가용화능을 살펴보면 배양 8일째에 최대값을 보였으며, tricalcium-phosphate에 대해서는 1,152 ppm, 인광석에 대해서는 565 ppm, aluminium phosphate에 대해서는 292 ppm, hydroxyapatite에 대해서는 217 ppm의 유리인산을 생성하였다.
유리인산 생산균을 생물비료화 하기 위한 노력의 일환으로 인산가용화능이 우수한 Aspergillus sp. PS-104 균주를 액침배양하면서 pellet 형성에 미치는 황토의 영향을 조사하였다 Aspergillus sp. PS-104의 분생포자를 황토를 포함하는 PDB 배지에 접종하여 50 rpm의 낮은 속도로 교반하여 배양하면 무정형의 불규칙적인 pellet을 형성하는 반면에 150 rpm의 높은 속도로 배양하면 구형의 규칙적인 pellet을 형성하였다. 또한 0$\sim$1.0% (W/V) 범위의 황토 첨가시에는 황토의 농도가 높을수록 pellet의 크기가 작게 형성되었으며, 1.0% 황토 농도에서 $1.0\pm0.1$ mm의 가장 작은 pellet이 형성되었다. 이 결과는 황토를 첨가하지 않는 경우에 비하여 약 4배 작아진 것이다. 그러나 황토 농도가 1.5% 이상 되면 무정형의 큰 pellet이 형성되었다. 또한 황토의 주성분인 $SiO_2$, $Fe_2O_3$, $Al_2O_3$, $CaCO_3$, $CaSO_4$ and $MgCO_3$ 분말을 각각 0$\sim$1.0% 농도로 배지에 첨가하여 pellet 형성에 미치는 영향을 조사한 결과 $Al_2O_3$를 제외하고는 첨가물의 농도가 높을수록 작은 크기의 pellet이 형성되었으며, $MgCO_3$ 를 첨가했을 때 가장 작은 크기의 pellet을 형성하였다.
Penicillium oxalicum strain CBPS-3F-Tsa, an efficient phosphate solubilizing fungus, was evaluated for its production of organic acid in vitro and effect of inoculation on the growth promotion of Maize under greenhouse conditions. The fungus solubilized 129.1, 118.8, and 54.1 mg P/1 of tricalcium phosphate [$Ca_{3}(PO_{4})_{2}$], aluminum phosphate ($A1PO_{4}$),and ferric phosphate ($FePO_{4}$), respectively, after 72 h of incubation. Malic acid, gluconic acid, and oxalic acid were detected in the flasks supplemented with various phosphate sources [240, 146, 145 mM/1 $A1PO_{4},\;FePO_{4},\;and\;Ca_{3}(PO_{4})_{2}$, respectively] together with a large amount of malic acid followed by the other two. The effects of inoculation of P. oxalicum CBPS-3F-Tsa on maize plants were studied under pot culture conditions. P. oxalicum CBPS-3F-Tsa was inoculated to maize plants alone or together with inorganic phosphates in the form of fused phosphates (FP) and rock phosphates (RP). Inoculation of P. oxalicum CBPS-3F-Tsa increased the plant growth and N and P accumulation in plants, compared with control plants, and also had positive effects when applied with RP. The results of this study show that the fungus P. oxalicum strain CBPS-3F-Tsa could solubilize different insoluble phosphates by producing organic acids, particularly malic acid, and also improved the efficiency of RP applied to maize plants.
인산가용화균 Aspergillus sp. PS-104의 포자를 6개월 이상 장기보존함과 동시에 균의 생활력 유지를 위하여 다양한 농도의 유기물을 첨가하여 $25^{\circ}C$에서 보관한 후 2주, 4주, 2개월, 4개월, 6개월 간격으로 시료를 채취하여 PDA 평판배지에서의 균수를 측정하였다. 그 결과에 의하면 PEG 200의 경우 6개월 저장시 0.1%의 첨가구에서 대조구에 비해 10배 이상 균의 생활력이 증가하였다. Glycerol의 경우 $0.01{\sim}5.0%$의 첨가구에서 $1.5{\sim}2$배 균의 생활력이 증가하였다.
인산가용화균 Penicillium sp. PS-113 의 포자를 액상비료로 제제화 할 때 분산력 개선 및 균의 장기보존을 위해 다양한 농도의 Trio와 Trio에 각종 첨가제를 첨가하여 $4^{\circ}C$와 $25^{\circ}C$에서 보관한 후 2주, 4주, 2개월, 4 개월 간격으로 시료를 채취하여 PDA 평판배지에서의 균수를 측정하였다. 그 결과에 의하면 0.1% Trio(v/v)에서 포자의 분산력과 생존률이 가장 좋았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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