본 실험은 인산염 분해균을 밀의 근권토양으로부터 분리 동정하고 인산염 분해균의 유기산 생성과 pH와의 관계를 조사하기 위해 실시하였다. 인산염 분해균은 36시간 배양후 선명한 투명대(clear zone)를 형성하였다. API 20E System과 BIOLOG$^{TM}$ analysis를 사용하여 동정한 결과 이 균주는 Entrobacter agglomerans로 동정되었다. Similarity와 distance는 각자 0.656과 4.790로 나타났다. Hydroxyapatite를 함유한 배지에서 E. agglomerans를 배양하는 동안 인산의 농도가 현저히 증가하였으며, pH와 인산의 농도와는 고도의 역상관($r^2=0.933$)을 보였다. HPLC로 분석한 결과 이 균주는 여러 가지 유기산을 생성하였으며 그 중 oxalic acid가 가장 많이 생성되었다. Acid phosphatase는 alkaline phosphatase에 비해서 10-15배의 활성을 보였으며, alkaline phosphatase는 배양 동안 거의 0에 가까운 활성을 보였다. E. agglomerans의 population은 배양 하루 동안 현저히 증가하였으나 그 후 급격히 감소하였다.
Baicalin은 Scutellaria baicalensis에서 분리되는 flavonoid의 일종으로, 다양한 생물학적 활성을 나타내는 물질로 알려져 있다. Baicalin은 항균, 항염증, 진통작용을 나타내며, nuclear factor-kappaB의 활성을 억제한다고 보고되었다. 최근에 다양한 flavonoid 들이 골조직 대사에 관여함이 밝혀졌으며, 본 연구에서는 baicalin이 골조직의 주요세포인 조골세포의 생성 및 활성에 미치는 영향을 관찰하기 위하여, 세포증식율, 세포생존율, 염기성 인산분해효소 활성 및 osteoprotegerin 생성량의 변화를 관찰하였다. 그 결과 baicalin은 조골세포의 세포 증식과 생존율에는 영향을 미치지 못하였으나, 염기성 인산분해효소의 활성과 osteoprotegerin의 생성량을 증가시켰다. 따라서 baicalin은 골조직에서 조절물질로 역할을 할 것으로 예견된다.
천문동 에탄올 추출물은 조골세포의 증식을 농도 및 시간 의존적으로 유의성 있게 증가시켰으며 조골세포 분화유도 및 석회화에 관여하는 염기성 인산분해효소 활성을 효과적으로 촉진시켰다. 또한 TRAP 양성인 다핵 파골세포수 및 TRAP 활성도를 감소시켰다. 결과적으로 천문동 에탄올 추출물은 조골세포의 활성 증가 및 파골세포의 활성 억제 등뼈의 대사에 영향을 미치므로 뼈의 대사와 관련된 치료제 및 골다공증 예방 건강 보조식품으로서 개발 가능성이 있으며, 이와 관련된 작용기전 및 활성성분의 분리, 정제에 대한 연구가 더욱 필요할 것으로 사료된다.
포유류 배아의 착상기전을 규명할 목적의 일환으로 자궁내막조직의 탈락막 형성과 분화에 미치는 난소 스테로이드 호르몬의 영향과 인위적 자극등의 영향을 조사하였다. 가임신을 유도시킨 흰쥐와 정상임신군의 자궁내막조직을 착상부위와 비 착상부위로 분리하여 자궁내막조직의 분화에 지표가 되는 Alkaline phosphatase(ALPase)의 활성을 측정하였다. 가임신군에서 인위적 자극(trauma)을 가한 자궁이 자극을 받지않은(control) 자궁에 비해 Progesterone(P)만을, 또는 progesterone과 estradiol(E + P)을 동시 처리받은 실험군에서 ALPase 활성이 유의한 차이(p<0.01)로 높게 나타났다. 정상임신군에서는 착상시기인 임신 제6일군의 착상부위에서 I처리군과 P처리군의 ALPase활성이 비착상 부위에 비해 유의한 차이(P < 0.05)로 크게 나타나며, 특히 임신 제6일군에서는 착상, 비착상 부위의 P처리군의 활성이 Intact군보다 유의하게(P<0.05) 높아졌다. 정상임신 제 9일 Intact군의 ALPase활성은 임신 제3일, 6일의 Intact 군의 활성에 비하여 착상(3, 6일 :P<0.01), 비 착상부위 (3일 :P<0.05, 6일 :P<0.02)에서 다같이 유의한 차이로 높아졌다. 본 연구결과에서 배아가 분화, 발생해 감에따라 자궁내막조직 분화도 활발해지고, 착상부위 분화는 착상시기부터 현저해지며, 특히 P호르몬의 영향이 크다는 것과 배아 아닌 인위적 자극으로도 탈락막 형성 유도가 가능하다는 것을 확인할 수 있었다.
생물학적 선량평가를 위한 생화학적 지표 연구로서 흰쥐 혈액 내 효소활성도의 변화를 조사한 결과는 다음과 같다. 1) Alkaline phosphatase 활성도는 0.1, 0.25, 0.5, 2, 4Gy의 방사선 조사후 24시간까지 혈액내 활성도가 증가하였고 72시간 경과시에는 대조군과 비슷한 활성도를 보였다. Creatine kinase는 2, 4Gy 방사선 조사후 혈액내에서 활성도가 72시간까지 증가하였으나 0.1, 0.25Gy 방사선 조사시에는 커다란 변화를 보이지 않았다. 2) Malate dehydrogenase 활성도는 0.1, 025, 0.5Gy 방사선 조사시에는 커다란 변화가 없었으며 lactate dehydrogenase는 방사선 조사후 활성도가 감소하였다. 3) GOT의 활성도는 선량률 0.1Gy/min.로 0.1, 0.25, 0.5, 2, 4Gy 조사후에는 어떠한 변화도 없었으며 선량률 0.5 Gy/sec.로 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 5, 7 Gy로 조사후에는 증가현상을 보이고 있다. Acid phosphatase활성도는 상기의 어떠한 선량에서도 나타나지 않고 있다. 잠재적으로 이러한 효소들은 방사선 피폭의 지표물질로 사용될 수 있으며 생화학적 지식과 기술을 이용한 좀더 나은 지표물질을 찾기 위하여 계속적인 조사가 필요하다.
The effects of ginseng saponins, gypsophila saponin, sodium dodecyl sulfate(SDS), and Triton X-100 on membrane $K^+-dependent$ phosphatase activity which is lipid dependent and represents dephosphorylation step of the complete Na+, $K^+-ATPase$ reaction were investigated in this study to elucidate whether the effects of ginseng saponins are due to the detergent action, using sarcolemma enriched preparation isolated from dog ventricle. $Na^+$, $K^+-ATPase$ and $K^+-dependent$ phosphatase activities of cardiac sarcolemma were about $143\;{\mu}mol$ Pi/mg protein/hr and $34\;{\mu}mol$ p-nitrophenol/mg protein/hr, respectively. While ginseng saponins (triol>total>diol) inhibited $K^+-dependent$ phosphatase activity, gypsophila saponin, and low dose of SDS($0.4\;{\mu}g/{\mu}g$ protein), and Triton X-100 ($0.6\;{\mu}g/{\mu}g$ protein) increased the enzyme activity, indicating disruptive effect of detergents on membrane barriers. The activating effect of low doses of Triton X-100 on membrane $K^+-dependent$ phosphatase appeared at concentration decreasing light scattering. However, the inhibitory effect of ginseng saponin appeared before a decrease in light scattering. These results suggest that low concentrations of ginseng saponins inhibit the membrane $K^+-dependent$ phosphatase by interacting directly with enzyme before membrane disruption.
패류의 방어시스템에서 순환 haemocytes는 중요하다. 참굴, Crassostrea gigas haemocytes의 형태적 특징을 이해하기 위해서 광학현미경적 특징과 전자현미경적 특징을 관찰하였다. 그 결과 4종류의 haemoctyes type을 확인하였다: type Ⅰ small hyalinocytes, type Ⅱ large hyalinocytes, type Ⅲ large granulocytes, type Ⅳ small granulocytes. 또한, 면역세포학적 방법으로 haemocytes의 alkaline phosphatase (ALP), acid phosphatase (ACP), peroxidase (POD), α-naphthyl acetate esterase, β-glucuronidase, PAS, sudan black B와 oil red O의 활성을 조사하였다. 그 결과, 조사한 모든 효소의 활성이 granulocytes에서 hyalinocytes에 비하여 높게 나타났다.Haemoctyes와 Vibrio FKC를 incubation 후 식균지수와 식균율을 조사하였다. 그 결과, 식균지수와 식균율은 배양 15분째부터 증가하여 120분까지 높게 나타났다. 또한, ALP, ACP, α-naphthyl acetate esterase와 β-glcuronidase의 효소활성도 대조구에 비하여 높게 나타나 이와 같은 효소는 참굴의 식작용에 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다.
Carthamus tinctorius L. and Eucommia umoides Oliver are often used in traditional herbal medicines for reducing damage to the liver, kidney, bone and muscle. In the present study, we investigated cell viability and alkaline phosphatase activity in the human osteoblast-like MG-63 cell line with methanol extracts of Carthami Semen (CS) and Eucommiae Cortex (EC) alone or in a mixture (CS+EC). Osteoblast cell viability was evaluated using the MTS assay and alkaline phosphatase activity assays. The cell viability and alkaline phosphatase activity significantly increased in MG-63 osteoblast cells treated with the CS+EC mixture. These findings suggest the CS+EC mixture may have beneficial effects on bone health through the proliferation of osteoblast cells.
The present investigation has been undertaken to understand the mechanism of implantation process, by demonstrating the role of ovarian steroids in connection with phosphatase activity in the differentiation of uterine endometrium for implantation. The results obtained are as followings: The differentiation of the uterine endometrial tissue was closely influenced by the ovarian steroid hormones; at first, 17${\beta}$-estradiol initiated the differentiation of the uterine luminal and glandular epithelial cells, and then progesterone induced differentiation of stromal cells, and thereby two steroids maintain decidualization of the uterine tissues. We observed that the phosphatase activities seem to be dependent upon the ovarian steroids; that is the activity showed higher level in progesterone treated group than in estradiol treated one, and the highest activity was found in the group treated with both estradiol and progesterone. Acid phosphatase showed the highest activity whereas alkaline phosphatase showed the lowest in the rat uterine endometrium during early pregnancy.
In this study, the pathway and date of migrating Primordial germ cells (PGCs) were observed light microscopically and ultrastructural changes of them during migration were observed by electron microscopic examination. For these purpose, alkaline phosphatase reactions were used for identifying the PGCs and acid phosphatase reactions were used for observing their degenerating activities. Also, effects of actinomycin D on the migration of PGCs were examined. According to these results, at the 9th gestation day, PGCs were observed in the endodermal cells of yolk sac, at the 11th gestation day, they were seen in the hindgut and then entered into the dorsal mesentery by the 13th gestation day. At the 14th gestation day, they were located in the genital ridges. When PGCs were located in the hindgut and genital ridges, the positive reactions of alkaline phosphatase were dominated, but acid phosphatase reactions were limited in all stage except they were in dorsal mesentery. However, these reactions were lessened in case of actinomycin D treatment. By electron microscopic examination, PGCs had pseudopodia, tail process, trailing cytoplasm and nuage as the ultrastructural characteristics. In addition, these morphological features were damaged by actinomycin D treatment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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