토양에서 phenol 분해균주를 65주 분리, 동정하였다. 균주의 형태, 생화학 및 형질특성 46항목을 parameter로 하여 simple matching(Ssm)지수 산출방법으로 유사도지수를 구하고, 비가중평균결합법(unweight pair group method with arithmethic average)으로 dendeogram을 작성하였다. 분리균주는 70% 유사도에서 3개의 major cluster와 3개의 minor cluster로 분류되었으며, 우점종으로는 Azotobacter Peudomonas 및 Flavobacterium 속으로 나타났다.
Twelve bacterial strains capable of growing on phenol minimal medium were isolated from iron foundry activated sludge by enrichment culture, and amount them, one isolate which was the best in cell growth and phenol degradation was selected and identified as Acinetobacter junii POH. The optimal temperature, initial pH and phenol concentration in the above medium were 3$0^{\circ}C$, 7.5 and 1000 ppm, respectively. Cell growth of Acinetobacter junii POH dramatically increased 20 hrs cultivation-time and reached a almost stationary phsae 40 hrs cultivation-time then phenol was degraded about 98%. Cell growth was inhibited y phenol at concentrations over 1500 ppm. The isolate was resistant to several antibiotics as well as various heavy metal ions. The growth-limiting log P value of Acinetobacter junii POH on organic solvents was 2.9 in the LB medium. Therefore, it is suggested that Acinetobacter junii POH could be effectively used for the biological treatment of wastewater containing the presence of heavy metal ions and organic solvents.
The presence of phenols in treated palm oil mill effluent (POME) is an environmental concern due to their phytotoxicity and antimicrobial activity. In this study, phenol-degrading bacteria, Methylobacterium sp. NP3 and Acinetobacter sp. PK1 were immobilized on oil palm empty fruit bunches (EFBs) for removal of phenols in the treated POME. The bacterial exopolysaccharides (EPS) were responsible for cell adhesion to the EFBs during the immobilization process. These immobilized bacteria could effectively remove up to 5,000 mg/L phenol in a carbon free mineral medium (CFMM) with a greater degradation efficiency and rate than that with suspended bacteria. To increase the efficiency of the immobilized bacteria, three approaches, namely activation, acclimation, and combined activation and acclimation were applied. The most convenient and efficient strategy was found when the immobilized bacteria were activated in a CFMM containing phenol for 24 h before biotreatment of the treated POME. These activated immobilized bacteria were able to remove about 63.4% of 33 mg/L phenols in the treated POME, while non-activated and/or acclimated immobilized bacteria could degrade only 35.0%. The activated immobilized bacteria could be effectively reused for at least ten application cycles and stored for 4 weeks at $4^{\circ}C$ with the similar activities. In addition, the utilization of the abundant EFBs gives value-added to the palm oil mill wastes and is environmentally friendly thus making it is attractive for practical application.
In the screening of phenol-degrading bacteria, a strain showing good growth in media containing phenol was isolated by using enrichment culture from various sample and identified as genus Klebsiella pneumoniae. The optimal temperature and pH for cell growth of Klebsiella pneumoniae was $35^{\circ}C$ and 8.0, respectively. When phenol was added to the minimal media as a sole source of carbon and energy, the concentration of maximum and optimum for cell growth was 1,200ppm and 1,000ppm, respectively. It was observed that Klebsiella pneumoniae was able to degrade 98% of phenol (1,000ppm) after 40hr in culture. The isolated could utilize various kinds of aromatic compounds and showed good growth in presence of phenol, m-cresol and 3-methyl catechol.
For the biological treatment of industrial wastewater containing high concentration of phenol, isolation and characterization of phenol - degrading bacterium were carried out. A bacterial strain P2 capable of degrading phenol was isolated from contaminated soils by enrichment culture technique and identified as the genus Rhodococcus by morphological, cultural, biochemical characteristics, and Biolog system. The optimal medium composition and cultural conditions for the growth and degradation of phenol by Rhodococcus sp. P2 were 0.1% of (NH$_4$)$_2$SO$_4$, 0.2% of KH$_2$PO$_4$, 0.25% of Na$_2$HPO$_4$ㆍ12$H_2O$, 0.2% of MgSO$_4$ㆍ7$H_2O$, and 0.008% of CaC1$_2$ㆍ2$H_2O$ along with initial pH 8.5 at 3$0^{\circ}C$. Rhodococcus sp. P2 could grow with phenol as the sole carbon source up to 1,800 ppm in batch cultures, but did not grow in medium containing above 2,000 ppm of phenol. When 800 ppm phenol was given in the optimal media, Rhodococcus sp. P2 completely degraded it within 24 h. Meanwhile, 1,800 ppm of phenol was degraded within 9 days. Rhodococcus sp. P2 could utilize toluene, n-hexane, xylene and benzene as sole carbon source .
A bacterium which is resistant to both mercury and cadmium, and also capable of utilizing phenol as a carbon and energy source, was isolated from the Kumho River sediments near Kangchang Bridge, Taegu, Korea. The isolate was labeled Pseudomonas sp. KM10 and characterized. The bacteria grew in 4 mM $CdCl_2$and in $70{\mu}M$$HgCl_2$. The bacteria efficiently removed over 90% of 1 g/l phenol within 30 h. In the presence of 1.250 g/l phenol, the growth of the microorganism was slightly retarded and the microorganism could not tolerate 1.5 g/l phenol. Curing of plasmid from the bacteria was carried out to generate a plasmidless strain. Subsequent experiments localized the genes for phenol degradation in plasmid and the genes for mercury resistance and cadmium resistance on the chromosome. Dot hybridization and Southern hybridization under low stringent conditions were performed to identify the DNA homology. These results showed significant homologies between the some sequence of the chromosome of Pseudomonas sp. KM10 and merR of Shigella flexneri R 100, and between the some sequence of the chromosome of Pseudomonas sp. KM10 and cadA of Staphylococcus aureus pI258. The mechanism of cadmium resistance was efflux, similar to that of S. aureus pI258 cadA, and the mechanism of mercury resistance was volatilization, similar to that of S. flexneri R100 mer.
Influence factors and efficiency characteristics for treatment of wastewater containing phenol were studied with using Pseudomonas sp. B3. It took 130 hours to remove phenol, when only activated sludge of terminal disposal palnt of sewage was innoculated in batch culture, but it was required just 36 hours, when bacteria degrading phenol and activated sludge were simultaneously innoculated. If only phenol an carbon source was used, it necessary 36 hours for biodegradation of phenol, while glucose was added to medium, it took 73 hours. It was revealed as excellent effluent and SVI, when the F/M ratio, COD and phenol concentration were 53mg/l and 1.2mg/l, respectively, and optimum F/M ratio was revealed 0.31. The reactor were seriously shocked as reducing hydraulic retention time at constant phenol concentration more than increasing phenol concentration at constant hydraulic retention time, when volumetric loading rate was increased to $0.8kg\;phenol/m^3{\codt}d$ from $1.6kg\;phenol/m^3{\codt}d$. And also the effluent phenol concentration was 34mg/l after starting 12 hours of shocking and reactor was recovered as steady state after 65 hours of changing in the former test. Although the effluent phenol concentration was maximum value with 12mg/l after starting 20 hours of shocking and reactor was recovered as steady state after 54 hours of changing in the later test.
Thirty-seven carbofuran-degrading bacteria were isolated from agricultural soils, and their genetic and phenotypic characteristics were investigated. The isolates were able to utilize carbofuran as a sole source of carbon and energy. Analysis of the 16S rRNA gene sequence indicated that the isolates were related to members of the genera Rhodococcus, Sphingomonas, and Sphingobium, including new types of carbofuran-degrading bacteria, Bosea and Microbacterium. Among the 37 isolates, 15 different chromosomal DNA patterns were obtained by polymerase chain reaction (PCR) amplification of repetitive extragenic palindromic (REP) sequences. Five of the 15 representative isolates were able to degrade carbofuran phenol, fenoxycarb, and carbaryl, in addition to carbofuran. Ten of the 15 representative isolates had 1 to 8 plasmids. Among the 10 plasmid-containing isolates, plasmid-cured strains were obtained from 5 strains. The cured strains could not degrade carbofuran and other pesticides anymore, suggesting that the carbofuran degradative genes were on the plasmid DNAs in these strains. When analyzed with PCR amplification and dot-blot hybridization using the primers targeting for the previously reported carbofuran hydrolase gene (mcd), all of the isolates did not show any positive signals, suggesting that their carbofuran hydrolase genes had no significant sequence homology with the mcd gene.
A new method was developed for the rapid analysis of diverse bacterial species in the natural environment. Our method is based on PCR-single-strands-conformation polymorphism (PCR-SSCP) and selective isolation technique of single-stranded DNA. Variable V3 fragments of 16S rDNA were amplified by PCR with bacterial 16S rDNA primers, where one of the primers was biotinylated at the 5'-end. The biotinylated strands of the PCR products were selectively isolated by using streptavidin paramagnetic particles and a magnetic stand, to prevent SSCP analysis producing heteroduplexes from heterogeneous DNA samples. The selected strands were separated by electrophoresis on a polyacrylamide gel, and detected by silver staining. Analysis of PCR products from 8 bacterial strains demonstrated their characteristic DNA band patterns. In addition, changes in the structure of the bacterial community and species diversity in the microcosm treated with phenol could be monitored. After 3 weeks of incubation, phenol and its intermediate, 2-hydroxy-muconic-semialdehyde, were degraded by indigenous bacteria. These dominating bacterial populations were identified as strong bands on an SSCP gel. Therefore, this study provides useful tools for microbial community analysis of natural habitats.
In order to fad the most fitted biodegradation model, biodegradation kinetics model to the initial phenol and p-cresot concentrations were investigated and had been fitted by the linear regression. Bacteria capable of degrading p-cresol were isolated from soil by enrichment culture technique. Among them, strain Ml capable of degradillg p.rcresol has also degraded phenal and was identified as the genus Micrococcus from the results from of taxonomical studies. The optimal tonditlons for the biodegradation of phenal and p-cresol by Micrococcus sp. Ml were $NH_4NO_3$ 0.05%, pH 7.0, 3$0^{\circ}C$, respectively, and medium volume 100m1/250m1 shaking flask. iwicrococcus sp. Ml was able to grow on phenal concentration up to 14mM and p-cresol concelltration up to 0.8mM. With increasing substrate concentraction, the lag period increased, but the maximum specific growth rates decreased. The yield coefficient decreased with increasing substrate concentation. The biodegradation kinetics of phenol and p-cresol were best described by Monod with growth model for every experimented concentration. In cultivation of mixed substrate, p-cresol was degraded first and phenol was second. This result implies that p-cresol and phenol was not degraded simultaneously.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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