본 실험은 여우구슬의 기내 부정근 유도 및 증식조건의 확립을 목적으로 수행되었다. 우선 여우구슬의 기내 발아체로부터 부위를 달리하여 부정근을 유도한 결과 줄기부위는 뿌리보다 양호한 부정근의 유도를 보였다. 또한 유도된 부정근을 이용하여 옥신의 종류(IAA, IBA, NAA와 2.4-D)에 따른 부정근 유도율을 조사한 결과 IBA와 NAA는 IAA와 2.4-D보다 높은 유도율을 보였다. IBA의 농도에 따른 유도율과 증식효율은 IBA가 0.5 mg/L첨가되었을 때 가장 높은 유도 및 증식효율을 보였다. 최적의 액체배지조건을 확인하고자 IBA의 농도는 0.5 mg/L로 첨가하고 sucrose의 농도를 달리하여 실험한 결과 sucrose는 30 g/L 첨가 되었을 때 가장 높은 생중량과 건중량을 나타냈다. 액체배양된 여우구슬의 부정근을 각각 MS, 1/2MS, 1/3MS배지에 30 g/L sucrose, 0.5 mg/L IBA가 첨가된 5 L 용량의 생물반응기에 4주간 배양한 결과 1/2MS 배지에서 양호한 생장을 보였다. 본 실험에서는 여우구슬의 종자발아체를 이용하여 부정근의 유도 및 증식조건에 필요한 기내배양조건과 2차적으로 유도된 부정근을 이용하여 플라스크와 생물반응기 배양을 통한 효율적인 증식조건을 확립하였다.
We report the construction of two Bacillus subtilis expression vectors, pBNS1/pBNS2. Both vectors are based on the strong promoter P43 and the ampicillin resistance gene expression cassette. Additionally, a fragment with the Shine-Dalgarno sequence and a multiple cloning site (BamHI, SalI, SacI, XhoI, PstI, SphI) were inserted. The coding region for the amyQ (encoding an amylase) signal peptide was fused to the promoter P43 of pBNS1 to construct the secreted expression vector pBNS2. The applicability of vectors was tested by first generating the expression vectors pBNS1-GFP/pBNS2-GFP and then detecting for green fluorescent protein gene expression. Next, the mannanase gene from B. pumilus Nsic-2 was fused to vector pBNS2 and we measured the mannanase activity in the supernatant. The mannanase total enzyme activity was 8.65 U/ml, which was 6 times higher than that of the parent strain. Our work provides a feasible way to achieve an effective transformation system for gene expression in B. subtilis and is the first report to achieve B. pumilus mannanase secretory expression in B. subtilis.
뼈의 보존 상태를 화학적으로 평가하기 위하여 조선시대 인골 10점을 대상으로 감쇠전반사법을 활용한 적외선 분광분석(FTIR-ATR)을 실시하였다. FTIR-ATR 스펙트럼을 통해 결정화 지수(crystallinity index; CI), 탄산염간의 비(C/C), 탄산염과 인산염의 비(C/P)를 계산한 결과 CI는 $4.25{\pm}0.78$, C/C는 $0.91{\pm}0.04$, C/P 는 $0.19{\pm}0.06$으로 확인되었다. 화학적 평가 결과 조직학 지수가 높을수록 CI와 C/P 값이 증가하며, C/C는 감소하는 것을 확인하였다. 반면 뼈에서 추출한 DNA 분석 가능 여부는 C/C가 낮고 C/P가 높을수록 분석이 가능 하였다. 이를 통해 FTIR을 이용한 화학적 평가와 조직 분석 결과가 출토 인골의 보존 상태를 종합적으로 파악하기 위한 기준으로 적용이 가능할 것으로 판단된다.
Rashidan, Kianoush Khajeh;Nassoury, Nasha;Tazi, Samia;Giannopoulos, Paresa N.;Guertin, Claude
BMB Reports
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제36권5호
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pp.475-487
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2003
A gene that encodes a homologue to baculoviral p74, an envelope-associated viral structural protein, has been identified and sequenced on the genome of Choristoneura fumiferana granulovirus (ChfuGV). A part of the ChfuGV p74 gene was located on an 8.9 kb BamHI subgenomic fragment using different sets of degenerated primers. These were designed using the results of the protein sequencing of a major 74 kDa structural protein that is associated with the occlusion-derived virus (ODV). The gene has a 1992 nucleotide (nt) open-reading frame (ORF) that encodes a protein with 663 amino acids with a predicted molecular mass of 74,812 Da. Comparative studies revealed the presence of two major conserved regions in the ChfuGV p74 protein. This study also shows that all of the p74 proteins contain two putative transmembrane domains at their C-terminal segments. At the nucleotide sequence level, two late promoter motifs (TAAG and GTAAG) were located upstream of the first ATG of the p74 gene. The gene contained a canonical poly(A) signal, AATAAA, at its 3' non-translated region. A phylogenetic tree for baculoviral p74 was constructed using a maximum parsimony analysis. The phylogenetic estimation demonstrated that ChfuGV p74 is related the closest to those of Cydia pomonella granulovirus (CpGV) and Phthorimaea operculella granulovirus (PhopGV).
E.coli의 cytidine deaminase(cytidine/2'-deoxy-cytidine aminohydrolas` EC 3.5.4.5)를 코딩하는 cdd 유전자를 E.coli cdd- pyr- 결손 변이주를 cloning host로 하여 southern blotting과 colony hybridization을 통하여 클로닝하였다. cdd 유전자가 단편인, cdd 유전자의 transcription initiation 부위의 23개 nucleotide를 합성한 후 probe로 사용하여 Southern hybridization에 의해 회수된 cdd 유전자를 함유한 단편을 얻었으며, 이를 pBR322에 삽입한 후 형질전환하여 colony hybridization한 결과 cdd+ cell을 얻었다. 삽입된 DNA 단편의 size는 27kb이었으며 이를 결실 및 subcloning을 연속 수행한 결과 2.1kb의 SalI/ DraI fragment(pTK605)에 cdd 유전자가 location 되어 있음을 알게 되었다. Mini cell 실험결과 합성된 cytidine deaminase의 활성이 pBR322에서 증폭시킴으로서 37배 정도 배가되었으며, pBR322에 비해 pUC vector계에서 다시 활성이 7배 정도 증가됨을 알 수 있었다.
Kim, Jung-Mee;Younmie Jin;Hyun, Chang-Gu;Kim, Jong-Hee;Lee, Hong-Sub;Kang, Dae-Kyung;Kang, Dae-Jung;Kim, Tae-Yong;Suh, Joo-Won
Journal of Microbiology
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제40권3호
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pp.211-218
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2002
A 4.8-kb DNA fragment encoding the P-450 type hydroxylase and ferredoxin genes was cloned from Pseudonocardia autotrophica IFO 12743 that can convert vitamin D$\_$3/ into its hydroxylated active forms. In order to isolate the P-450 gene cluster in this organism, we designed PCR primers on the basis of the regions of an oxygen binding site and a heme ligand pocket that are general characteristics of the P-450 hydroxylase. Sequencing analysis of the BamHI fragment revealed the presence of four complete and one incomplete ORFs, named PauA, PauB, PauC, and PauD, respectively. As a result of computer-based analyses, PauA and PauB have homology with enoyl-CoA hydratase from several organisms and the positive regulators belonging to the tetR family, respectively. PauC and PauD show similarity with SuaB/C proteins and ferredoxins, respectively, which are composed of P-450 monooxygenase systems for metabolizing two sulfonylurea herbicides in Streptomyces griseolus PauC shows the highest similarity with another CytP-450$\_$Sca2/ protein that is responsible for production of a specific HMG-CoA reductase inhibitor, pravastatin, in S. carbophilus. Cultures of Steptomyces lividans transformant, containing the P-450 gene cluster on the pWHM3 plasmid, was unable to convert vitamin D$\_$3/ to its hydroxylated forms.
DMT Freight is judged that economic performance is good because can increase cargoes than existing freight. However, the existing freight cars, each with a different balance to the body structure is bogie because the vibrations may occur. Thus, by minimizing vibration over the existing freight securing the safety of the driving if you will not have major problems in cargoes. In this study, multi-body dynamic analysis tool, VI-Rail using the actually Gyeongbu Railroad line and an empty, full freight condition include curve radius, track irregularity, cent. DMT freight of the derailed wagons were assessed for safety analysis. Full and empty freight conditions for parity in the Gyeongbu Railroad line(Dongdaegoo ${\leftrightarrow}$Gyungsan) derailment safety analysis, such as derailment safety coefficient and the radius wheel road decrement, echoing the curve and the orbit is affected by the irregularity was found. Full freight condition than the empty conditions showed a significant derailment safety. Overall, the limits of derailment coefficient (Q/P=0.8) and wheel road decrement limits (${\Delta}P/P=0.6$) is less safe with me confirmed that the derailment safety.
본 연구는 중금속 추출 공정에 쓰이는 사차 암모늄 염인 Aliquat 336을 포함하는 콜로이드 액상 에이프런 (colloidal liquid aphrons, CLAs)을 지용성 계면활성제와 수용성 계면활성제를 사용하여 제조하였고 연속상에서 농축된 CLAs의 안정성을 표면으로 떠오르는 유기 용매의 양을 시간에 따라 측정하여 평가하였다. 다양한 조건에서 CLAs의 안정성을 비교하기 위해서 반감기가 도입되었다. 전해질의 첨가나 pH의 변화와 같은 연속상의 상태 변화는 CLAs의 파괴(break-up) 속도에 상당히 영향을 미치는데 이 파괴 속도가 급격히 변화하는 임계 응집 농도가 존재한다. pH의 변화에 따른 임계 응집 농도를 측정하였고 이온의 세기, 수용성 계면활성제 Sodium Dodecyl Sulfonate (SDBS)의 농도에 대한 CLAs의 안정성에 대한 영향을 고찰하였다.
Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are well known environmental carcinogens. PAH metabolites, especially BaP-7,8- dihydrodiol, 9,10 epoxide, initiate carcinogenesis via high specificity binding to DNA to form DNA adducts. The Korean red ginseng (KRG) from Panax ginseng has been suggested to protect against damages due to PAH exposure but the mechanism is unknown. Therefore, we investigated effects of KRG on PAH exposure using toxicokinetic methods and changes of PAH-induced oxidative damage during a 2 week-clinical trial (n=21 healthy young female, $23.71{\pm}2.43$ years). To analyze antioxidative effects of KRG, we measured changes in the levels of urinary malondialdehyde (MDA) before and after KRG treatment. We observed a significant positive association between levels of urinary MDA and 1-hydroxypyrene, a biomarker of PAH exposures (slope=1.47, p=0.03) and confirmed oxidative stress induced by PAH exposures. A reverse significant correlation between KRG treatment and level of urinary MDA was observed (p=0.03). In summary, results of our clinical trial study suggest that KRG plays a significant role in antioxidative as well as toxicokinetic pathways against PAHs exposure.
An acid forest surface soil as a land farming medium was treated with a water plant alum sludge at 0 to 18%. Indian mustard was grown in the treated soil in a greenhouse for 5 weeks and watered with pH 4 tap water adjusted with a mixed acid (1HNO$_3$: 2H$_2$SO$_4$) during plant growth. Changes in soil property, leachate chemistry, plant growth, and plant uptake of elements by the sludge treatment were determined. The alum sludge treatment increased buffer capacity to acidity, hydraulic conductivity, water holding capacity, and phosphate adsorption of the soil and decreased bulk density and mobility of small particles. The sludge treatment reduced leaching of Al, Mg, K, Na, and root elongation. Plant did uptake less amount of the cations and P but more Ca with the sludge treatment.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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