• 한국수정란이식학회지
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• 제12권2호
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• pp.171-179
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• 1997

The objectives of the present study were improvements in the efficiency of developmental rates to morula and blastocyst stages to produce a large number of genetically identical nuclear transplant embryos. The oocytes collected from slaughterhouse ovaries were matured for 24 h and then enucleated and cultured to allow cytoplasmic maturation and gain activation competence. And then the donor embryos were treated for 12 h with 10 $\pi$g /ml nocodazole and 7.5 $\pi$g /ml cytochalasin B to synchronize the cell cycle stage at 26 h after the onset of culture. The blastomeres were transferred into the perivitelline space of the enucleated nocytes and blastomeres and oocytes were fused by electrofusion. The cloned embryos were then cultured in various conditions to allow further development. The age of the recipient(30 vs 40 h) had no significant effect on the fusion rates(82.4 vs 82.1%) and the developmental rates to morula /blastocyst(9.8 vs 11.0%). Effect of Nocodazole treatment on the donor cell cyle synchronization to improve the developmental rates of bovine nuclear transplant embryos was significantly higher than control group(21.4 vs 10.1%, p<0.05). Significant differences were in the percentage of fusion rates(72.9,77.1vs 61.9%) in three types of fusion medium(PBS(+), mannitol and sucrose, p<0.01). The developmental rates of bovine nuclear transplant embryos appeared to be highest in mSOF medium under 5% 0$_2$ condition, but no significant differences were found when compared with TCM199-BOEC and mSOF under two different oxygen ratio(5 and 20%).

• 한국가축번식학회지
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• 제20권4호
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• pp.467-472
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• 1997

본 연구는 체내생산 공핵배 핵이식의 최적 통전전압을 결정하기 위하여 그리고 공핵배의 질이 핵이식난자의 융합과 체외발달에 미치는 영향을 조사하기 위하여 수행되었다. 수핵난자는 체외성숙후 25∼27시간에 제핵하였고 난자의 추가성숙을 위해서 융합전에 18∼20시간 더 배양하였다. 상실배시기의 공핵배는 다배란 처녀우에서 채란한 후 질에 따라 양질과 저질로 구분하여 공시하였다. 공핵배의 핵이식은 체외성숙후 42∼44시간에 행하였고, 융합은 0.75kV/cm 또는 1.0kV/cm DC 전압으로 체외성숙 후 43∼45시간에 실시하였다. 융합율은 두 전안갑에 차이가 없었으나 난할율과 M＋B 발달율은 19.0%와 29.4%였다. 공핵배의 질은 융합율과 난할율에 크게 영향이 없었으나 저질공핵배의 핵이식으로 부터는 상실배의 발달이 없었다. 본 결과에서 체내생산 공핵배 핵이식의 최적전압은 1.0kV/cm DC이었으며 공핵배의 질은 핵이식배 발달에 영향하는 중요 요인 중에 하나이었다.

• 한국가축번식학회지
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• 제20권4호
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• pp.459-465
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• 1997

본 연구는 핵이식의 시기가 융합과 체외발달에 미치는 영향을 조사하고 체외수정 공핵배의 핵과 체외성숙난자간에 전기융합의 최적 통전전압과 통전시간을 결정하기 위하여 시도하였다. 수핵난자는 체외성숙후 25~27시간에 제핵하였고 난자의 추가성숙을 위하여 융합전에 18~20시간 더 배양하였다. 공핵체외수정란은 16~32세포기까지 BOEC와 공배양하였다. 공핵배의 할구 이식시간은 조기핵이식구에서는 체핵후 1~3시간, 자연핵이식구를 체핵후 16~18시간이었다. 융합은 체외성숙후 43~45시간에 행하였다. 융합율은 할구 이식시기에 따라 차이가 없었으나 난할율과 8~16세포기 발달은 자연핵이식구에서 높았다. 융합, 난할 및 상실배 배반포 발달율은 1.0kV/cm보다 0.75kV/cm전압에서 높았으며 0.7kV/cm에서 상실배 배반포율은 17.6%였다. 통전시간에 따라 융합율은 차이가 없었으나 50$\mu$sec와 70$\mu$sec에서 난할율과 상실배-배반포 발달율이 다소 높았다. 본 결과에서 핵이식의 최적시기는 수핵난자의 체외성숙후 42~44시간이었으며 최적 전기융합 조건은 50~70$\mu$sec의 1회 0.75kV/cm임을 알 수 있었다.