Haloperoxidase (HPO, E.C.1.11.1.7) is a metal-containing enzyme oxidizing halonium species, which can be used in the synthesis of halogenated organic compounds, for instance in the production of antimicrobial agents, cosmetics, etc., in the presence of halides and $H_2O_2$. To isolate and evaluate a novel non-metal HPO using a culture-independent method, a cassette PCR library was constructed from marine seawater in Japan. We first isolated a novel HPO gene from Pseudomonas putida ATCC11172 by PCR for constructing the chimeric HPO library (HPO11172). HPO11172 showed each single open-reading frame of 828 base pairs coding for 276 amino acids, respectively, and showed 87% similarity with P. putida IF-3 sequences. Approximately 600 transformants screened for chimeric genes between P. putida ATCC11173 and HPO central fragments were able to identify 113 active clones. Among them, we finally isolated 20 novel HPO genes. Sequence analyses of the obtained 20 clones showed higher homology genes with P. putida or Sinorhizobium or Streptomyces strains. Although the HPO A9 clone showed the lowest homology with HPO11172, clones in group B, including CS19, showed a relatively higher homology of 80%, with 70% identy. E. coli cells expressing these HPO chimeric genes were able to successfully bioconvert chlorodimedone with KBr or KCl as substrate.
Khan, Shehzad Abid;Kim, Hyung Min;Baek, Ju Hye;Jung, Hye Su;Jeon, Che Ok
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제31권9호
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pp.1210-1217
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2021
Two gram-negative, catalase-positive, strictly aerobic, and white colony-forming bacteria, strains H242T and B156T, were isolated from soil in South Korea. Cells of strain H242T were oxidase-positive and non-motile short rods, while those of strain B156T were oxidase-negative and long non-motile rods. Ubiquinone-8 was identified as the sole isoprenoid quinone in both strains. C16:0, cyclo-C17:0, andsummed feature 3 (C16:1 ω7c and/or C16:1 ω6c) and phosphatidylethanolamine, phosphatidylglycerol, and diphosphatidylglycerol were identified in both strains as the major cellular fatty acids and polar lipids, respectively. The DNA G+C contents of strains H242T and B156T were 69.4 mol% and 69.3 mol%, respectively. Phylogenetic analyses based on 16S rRNA and 92 concatenated core gene sequences revealed that strains H242T and B156T formed distinct phylogenic lineages from other Ramlibacter type strains. The DNA-DNA hybridization (DDH) value between strains H242T and B156T was 24.6%. Strains H242T and B156T were most closely related to Ramlibacter ginsenosidimutans BXN5-27T and Ramlibacter monticola G-3-2T with 98.4% and 98.6% 16S rRNA gene sequence similarities, respectively. Digital DDH values between strain H242T and R. ginsenosidimutans and between strain B156T and R. monticola were 23.5% and 26.1%, respectively. Phenotypic, chemotaxonomic, and molecular analyses indicated that strains H242T and B156T represent two novel species of the genus Ramlibacter, for which the names Ramlibacter terrae sp. nov. and Ramlibacter montanisoli sp. nov., respectively, are proposed. The type strains of R. terrae and R. montanisoli are H242T (=KACC 21667T=JCM 33922T) and B156T (=KACC 21665T=JCM 33920T), respectively.
고추탄저병을 생물학적으로 방제할 수 있는 미생물을 얻기 위하여 고추탄저균 C. acutatum ACYSJ001의 성장을 억제하는 점액세균을 탐색하였다. Myxococcus속에 속하는 59균주와 Corallococcus 속에 속하는 34균주 등 총 93균주의 용균성 점액세균에 대해 고추탄저균인 C. acutatum ACYSJ001에 대한 성장 억제 활성을 조사한 결과, Corollococcus속에 속하는 대부분의 점액세균들이 C. acutatum ACYSJ001의 성장을 저해하지 않는 반면, Myxococcus속으로 동정된 10균주들은 C. acutatum ACYSJ001의 성장을 강하게 저해하는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 Myxococcus속에 속하는 여러 점액세균들이 고추탄저병을 억제하는 미생물로서 활용될 수 있는 가능성이 높으며, 또한 새로운 항진균물질 탐색을 위한 좋은 생물연구소재임을 보여주었다.
Microbially induced calcium carbonate precipitation (CCP) is a long-standing but re-emerging environmental engineering process for production of self-healing concrete, bioremediation, and long-term storage of CO2. CCP-capable bacteria, two Bacillus strains (JH3 and JH7) and one Sporosarcina strain (HYO08), were isolated from two samples of concrete and characterized phylogenetically. Calcium carbonate crystals precipitated by the three strains were morphologically distinct according to field emission scanning electron microscopy. Energy dispersive X-ray spectrometry mapping confirmed biomineralization via extracellular calcium carbonate production. The three strains differed in their physiological characteristics: growth at alkali pH and high NaCl concentrations, and urease activity. Sporosarcina sp. HYO08 and Bacillus sp. JH7 were more alkali- and halotolerant, respectively. Analysis of the community from the same concrete samples using barcoded pyrosequencing revealed that the relative abundance of Bacillus and Sporosarcina species was low, which indicated low culturability of other dominant bacteria. This study suggests that calcium carbonate crystals with different properties can be produced by various CCP-capable strains, and other novel isolates await discovery.
Biocontrol microbes have mainly been screened among large collections of microorganisms $via.$ nutrient-rich $in$$vitro$ assays to identify novel and effective isolates. However, thus far, isolates from only a few genera, mainly spore-forming bacilli, have been commercially developed. In order to isolate field-effective biocontrol microbes, we screened for more than 200 oligotrophic bacterial strains, isolated from rhizospheres of various soil samples in Korea, which induced systemic resistance against the soft-rot disease caused by $Pectobacterium$$carotovorum$ SCC1; we subsequently conducted in $planta$ bioassay screening. Two oligotrophic bacterial strains were selected for induced systemic disease resistance against the $Tobacco$$Mosaic$$Virus$ and the gray mold disease caused by $Botrytis$$cinerea$. The oligotrophic bacterial strains were identified as $Pseudomonas$$manteilii$ B001 and $Bacillus$$cereus$ C003 by biochemical analysis and the phylogenetic analysis of the 16S rRNA sequence. These bacterial strains did not exhibit any antifungal activities against plant pathogenic fungi but evidenced several other beneficial biocontrol traits, including phosphate solubilization and gelatin utilization. Collectively, our results indicate that the isolated oligotrophic bacterial strains possessing induced systemic disease resistance could provide useful tools as effective biopesticides and might be successfully used as cost-effective and preventive biocontrol agents in the field.
Kim, Eun Jin;Kang, Yeong Im;Bang, Tae Il;Lee, Myoung Han;Lee, Sang Won;Choi, In Soo;Song, Chang Seon;Lee, Joong Bok;Park, Seung Yong
대한수의학회지
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제56권2호
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pp.75-84
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2016
Probiotics that are able to provide beneficial effects on animal health have become important ingredients of dog foods. This study was conducted to characterize the probiotic potentials of two strains, Lactobacillus reuteri BCLR-42 and Lactobacillus plantarum BCLP-51, that were derived from feces of healthy dogs and evaluated based on tolerance to low pH and bile acid, antimicrobial activities, enzyme profiles, sensitivity to antibiotics, and innate immune enhancing potentials. Both strains showed survival of more than 90% at pH 3 and 0.2% bile acid and exhibited broad antimicrobial activities against indicator bacteria. Moreover, both strains showed high sensitivity to antibiotics, except vancomycin, metronidazole, and gentamicin. The alkaline phosphatase was negligible (score 0), whereas they showed strong beta galactosidase activity (score range 5 or 3, respectively). The phagocytosis and oxidative burst activities of canine granulocytes were significantly enhanced in response to both strains. These results show that both strains have the capability to act as probiotics and the potential for application as ingredients in dog foods.
토양에 존재하고 있는 새롭고, 특이한 활성을 갖는 B.t를 분리하기 위하여 춘잠 및 추잠기에 양잠농가의 토양을 채취하여 B.t의 분포를 조사하였다. 총 300개의 채취된 토양시료중에서 포자와 내독소 단백질을 생산하는 82개의 B.t를 분리했다. 분리된 B.t의 독성별 분석에서 봄에는 주로 나비목(Bombyx mori)에 독성을 띄는 균주(67%)가, 가을에는 나비목과 파리목(Culex pipiens)에 동시에 독성을 띄는 균주(67%)가 많이 분리되었다. 한편 딱정벌레목(Sitophilus oryzae)에 독성을 나타내는 것은 찾지 못했다. 또한, 내독소 단백질은 생산하지만, 독성을 띄지 않는 균주들도 봄에는 6%, 가을에는 27%의 비율로 분리되어 자연상태에서 흔히 존재함을 알 수 있었다.
Hwang, Il Ki;Kim, Seung-Oh;Hwang, Mi Sook;Park, Eun-Jeong;Ha, Dong-Soo;Lee, Sang-Rae
ALGAE
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제33권1호
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pp.49-54
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2018
Red algal mitochondrial genomes (mtDNAs) can provide useful information on species identification. mtDNAs of Pyropia / Porphyra (Bangiales, Rhodophyta) have shown diverse variation in their size and gene structure. In particular, the introns and intronic open reading frames found in the ribosomal RNA large subunit gene (rnl) and cytochrome c oxidase subunit 1 gene (cox1) significantly vary the mitochondrial genome size in Pyropia / Porphyra species. In this study, we examined the exon / intron structure of rnl and cox1 genes of Pyropia yezoensis at the intraspecific level. The combined data of rnl and cox1 genes exhibited 12 genotypes for 40 P. yezoensis strains, based on the existence of introns. These genotypes were more effective to identify P. yezoensis strains in comparison to the traditional DNA barcode cox1 marker (5 haplotypes). Therefore, the variation in gene structure of rnl and cox1 can be a novel molecular marker to discriminate the strains of Pyropia species.
A novel psychrotolerant Psychrobacillus strain PB01, isolated from an Antarctic iceberg, was comparatively analyzed with five related strains. The complete genome of strain PB01 consists of a single circular chromosome (4.3 Mb) and a plasmid (19 Kb). As potential low-temperature adaptation strategies, strain PB01 has four genes encoding cold-shock proteins, two genes encoding DEAD-box RNA helicases, and eight genes encoding transporters for glycine betaine, which can serve as a cryoprotectant, on the genome. The pan-genome structure of the six Psychrobacillus strains suggests that strain PB01 might have evolved to adapt to extreme environments by changing its genome content to gain higher capacity for DNA repair, translation, and membrane transport. Notably, strain PB01 possesses a complete TCA cycle consisting of eight enzymes as well as three additional Helicobacter pylori-type enzymes: ferredoxin-dependent 2-oxoglutarate synthase, succinyl-CoA/acetoacetyl-CoA transferase, and malate/quinone oxidoreductase. The co-existence of the genes for TCA cycle enzymes has also been identified in the other five Psychrobacillus strains.
A number of health benefits have been claimed for probiotic bacteria such as Bifidobacterium (B) spp. Lactobacillus(L) acidophilus, and Lactococcus(Lc) cremoris. Viability of probiotic bacteria is important in order to provide health benefits. Only a limited culture media for the test purpose of probiotic bacteria are commercially available (MRS broth), but the media for large-scale propagation of viable cells which are able to be used as food additive are not available. The manufacture of a low priced and preferred novel medium for probiotic bacteria was therefore, attempted using whey protein concentrate(WPC) and Makgeolli sludge as a starting material. The effect of WPC and Makgeolli sludge on the growth of four strains (B. bifidum 15696, B. longum 15707, L. acidophilus CH-2, and Lc. cremoris 20076) was investigated. Medium prepared such as WPC, Makgeolli sludge, and WPC+Makgeolli sludge(WPCMs). It was observed that the growth of 4 strains (B. bifidum 15696, B. longum 15707, L. acidophilus CH-2, and Lc. cremoris 20076) was stimulated by Makgeolli sludge, WPC, WPCMs. Especially, Viable cell number of 4 strains in the WPCMs were higher than that of the single media. These result suggest the possibility that Makgeolli and WPC, acts as a growth factor for the growth of probiotic bacteria.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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