The market for green vegetable juice (GVJ) is growing owing to the increasing demand for healthy food; however data on the safety and quality of GVJ are poorly reported. The objective of this study was to investigate the change in microbial community in GVJ during storage and its contamination by E. coli O157:H7. The microbial community was analyzed via culturable and non-culturable methods at 5, 10, and $25^{\circ}C$ for different storage times. In the non-culturable method, denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) was used. The initial bacterial concentration was $2.92{\times}10^5CFU/mL$, which exceeded the limit prescribed by the Korean Food Hygiene law. The results of the DGGE analysis indicated that the microbial community during storage was diverse and the spoilage lactic acid bacteria were prevalent at a later stage. Other bacteria such as Rahnella, Citrobacter, Pseudomonas, and Cyanobacteria were identified. Thus, the results strongly emphasize the need to pay attention to GVJ production safety, especially with respect to temperature control, in order to prevent the growth of foodborne pathogens such as E. coli O157:H7 and other spoilage bacteria.
Animal manure compost is a commonly used fertilizer in organic vegetable and fruit production in Korea. However, livestock manure compost produced from animal feces can contain a lot of the non-pathogenic and pathogenic bacteria. Of particular concern are bacteria causing human food-borne illness such as Escherichia coli O157:H7 and Listeria monocytogenes. The objective of this study was to investigate effect of temperature on survival of E. coli O157:H7 and L. monocytogenes in livestock manure compost. Commercial livestock manure compost (manure 60%, sawdust 40%) was inoculated with E. coli O157:H7 and L. monocytogenes. Compost was incubated at four different temperatures (10, 25, 35, and $55^{\circ}C$) for 20 weeks. Samples were taken every week during incubation depending on the given conditions. E. coli O157:H7 persisted for up to 1 day in livestock manure compost at $55^{\circ}C$, over 140 days at $10^{\circ}C$, 140 days at $25^{\circ}C$, and 120 days at $35^{\circ}C$, respectively. L. monocytogenes persisted for up to 1 day in livestock manure compost at $55^{\circ}C$ and 140 days at $10^{\circ}C$, 70 days at $25^{\circ}C$, and 40 days at $35^{\circ}C$, respectively. The results indicated that E. coli O157:H7 and L. monocytogenes persisted longer under low temperature condition. E. coli O157:H7 survived longer than L. monocytogenes at three different temperatures (10, 25, and $35^{\circ}C$). The results are being used to develop guidelines on the management of manure to reduce the risks of E. coli O157:H7 and L. monocytogenes transmission to foods produced in the presence of animal waste.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.45
no.4
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pp.577-584
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2016
The objectives of this study were I) to compare the acid resistance (AR) of seven non-O157 Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) serogroups, including O26, O45, O103, O111, O121, O145, and O157:H7 STEC isolated from various sources, in 400 mM acetic acid solution (AAS) at pH 3.2 and $30^{\circ}C$ for 25 min with or without glutamic acid and II) to determine strain survival upon exposure to simulated gastric fluid (SGF, pH 1.5) at $37^{\circ}C$ for 2 h after acid adaptation in apple, pineapple, orange, and strawberry juices at pH 3.8, $4^{\circ}C$ and $20^{\circ}C$. Results show that the O111 serogroup strains had the strongest AR (0.12 log reduction CFU/mL) which was very similar to that of O157:H7 STEC (P>0.05), compared to other serogroups in AAS without glutamic acid, whereas O26 serogroup strains showed the most sensitive AR. However, there was no significant (P>0.05) difference of AR among seven serogroups in AAS with glutamic acid. In the SGF study, 05-6545 (O45:H2), 08023 (O121:H19), and 03-4669 (O145:NM) strains adapted in fruit juices at $4^{\circ}C$ and $20^{\circ}C$ displayed enhanced survival with exposure to SGF for 60 min compared to 06E0218 (O157:H7) strains (P<0.05). In addition, 4 STEC strains adapted in pineapple juice at $4^{\circ}C$ showed enhanced survival with exposure to SGF for 60 min compared to those strains acid-adapted in the other fruit juices. Generally, adaptation at $4^{\circ}C$ in fruit juices resulted in significantly enhanced survival levels compared to acid-adapted at $20^{\circ}C$ and non-adapted conditions. The AR caused by adaptation in fruit juices at low temperature may thus increase survival of non-O157 STEC strain in acidic environments such as the gastrointestinal tract. These results suggest that more careful strategies should be provided to protect against risk of foodborne illness by non-O157 STEC.
Pure culture experiments were conducted to assess the bacteriostatic and bactericidal effects of phlorotannins (PT) isolated from Ascophyllum nodosum (brown seaweed) on Escherichia coli O157:H7. In Exp. 1, one non-O157:H7 strain (25922) and three strains of E. coli O157:H7 (3081, EDL933 and E318N) were cultured in M9 medium with PT included at 0 (control), 25, 50 or $100{\mu}g/ml$ (n = 3). Bacterial growth was monitored by $OD_{600}$ at 0, 4, 6, 12 and 24 h, and by dilution plating at 0, 4, 6 and 24 h. All strains were inhibited (p<0.001) by PT to varying degrees. At 50 or $100{\mu}g/ml$, PT prevented growth of all four strains. At $25{\mu}g\;PT/ml$, growth of 25922, 3081, E318N and EDL933 was inhibited for 6, 12 and 24 h, respectively, but 25922 and 3081 resumed growth by 12 and 24 h. Direct plating confirmed bactericidal effects of PT on all four strains at $100{\mu}g/ml$, and on EDL933 and E318N at $50{\mu}g/ml$. In Exp. 2, strains 25922 and 3081 were incubated with no tannins or with $50{\mu}g/ml$ of PT, purified condensed tannins (CT) from Quebracho (Schinopsis balansaei), or purified tannic acid from Rhus semialata (Anacardiaceae) as hydrolysable tannins (HT). Strain 3081 was unaffected by HT or CT, but was completely inhibited (p<0.001) by PT at 4, 6 and 24 h. Strain 25922 was unaffected by HT, slightly inhibited by CT, and almost eradicated by PT at 4 and 6 h. Transmission electron microscopy revealed tannin-mediated alterations to bacterial cell walls. Phlorotannins from A. nodosum exhibit growth-inhibiting and bactericidal effects in vitro against the strains of E. coli O157:H7 investigated. Anti-E. coli efficacy of A. nodosum PT is superior to that of terrestrial tannins purified from Quebracho and from Rhus semialata.
To control pathogenic E. coli in biofilm, bacteriophages were isolated from environmental samples. Seventeen isolates had depolymerase activities by translucent zones at the rims of plaques. To determine biofilm-forming ability, an abiotic plastic surface of polystyrene was used; E. coli O103 showed the highest biofilm formation at 30℃ after 24 h. Moreover, biofilm by E. coli O103 on the biotic surface of lettuce was observed by a scanning electron microscope. The bacteriophage cocktail of ΦNOECP40 and ΦNOECP44 showing depolymerase activities was prepared to eliminate the E. coli inbiofilm. By organic acids, reduction of E. coli in biofilm was insignificant and almost undetectable. However, the abundance of E. coli in biofilm was reduced by 3 log CFU/mL from 7.3 log CFU/mL after 60 min with the bacteriophage cocktail. Therefore, we suggest that bacteriophages with depolymerase could be utilized to effectively control pathogenic E. coli in biofilm.
For the rapid detection of various pathogenic microorganisms from food sample, various kinds of kits have been developed and commercially available in the markets. With the advantages of speed, accuracy and easiness, the market of these kits has gradually increased for the QC and QA field of food company as well as testing facilities or laboratories. In this study, the characteristics such as the detection limit and the sensitivity of immunochromatographic type of rapid detection kit (Donga Co, Korea, D-kit) for E. coli 0157:H7 developed by monoclonal antibody were examined and also the possibility of application of the kit to food samples was evaluated. The reference kits used for comparison study were Reveal E. coli 0157:H7 (Neogen Co., USA, R-kit) and VIP EHEC kit (Biocontrol Inc., USA, V-kit) occupying major market share. In the detection limit test with the E. coli 0157:H7 reference, both R-kit and D-kit showed a distinct positive reaction in $10^4$/ml and weak positive reaction in $10^3$/ml, whereas V-kit showed a same reaction in 105/ml. Also, it was identified that the culture treated with heat showed more sensitivity than no heat treated culture. The sensitivity test was conducted against 22 isolates of E. coli 0157:H7, 7 strains of non-O157:H7 verotoxin-producing E. coli, 40 strains of E. coli with different O and H antigen type, and 38 strains of non-E. coli Enterobacteriaceae, and all of the test strains except three were showed exactly three were showed exactly the same reaction against three kinds of the tested kits. All the three kinds of kits showed a positive reaction against E. coli O157:H19, E. coli O148:H18 and Salmonella galinarium. We suppose that there might be a similarity in serological property between these three strains and O157:H7. From the test results, it can be concluded that there is (was) no difference between the D-kit developed in this study and R-kit or V-kit based on the detection limit and sensitivity.
In this study, the optimization of fabrication conditions was accomplished to make immuno-strip biosensor by the combination of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and immuno-chromatographic strip techniques for the detection of Escherichia coli O157 : H7. Optimal fabrication conditions of capture antibody concentration, detection antibody concentration, and additive composition of running buffer solution were determined. Optimal concentration was determined as 1.0 mg/mL for both of capture antibody and detection antibody. A composition of 0.5% Tween20 and 3% BSA were selected as optimal additive for buffer solution to prevent non-specific binding.
Escherichia coli O157:H7 is a food-borne pathogen that causes bloody diarrhea, hemorrhagic colitis, and hemolytic uremic syndrome (HUS). We compared three selective media and evaluated the performance of immunomagnetic separation (IMS) for the detection of low levels of E. coli O157:H7 in ground beef and radish sprouts with different levels of background flora. Bulk food samples (500 g for each trial) were artificially inoculated with nalidixic acid-resistant E. coli O157:H7 at the lowest dose that would generate 20 partial-positive samples of 25 g each. All samples were homogenized in mTSB (225 mL) and incubated overnight at $37^{\circ}C$. IMS was performed using the enriched mTSB samples (1 mL) along with conventional spreads plated onto three different selective media: Sorbitol MacConkey agar (SMAC), Sorbitol MacConkey agar with cefixime and tellulite (CT-SMAC), and Sorbitol MacConkey agar with nalidixic acid (NAL-SMAC) as the gold standard. Two suspicious colonies from each medium were selected and confirmed usinga serological test after transfer to tryptic soy broth with yeast extract (TSAYE). CT-SMAC was better than SMAC for detecting E. coli O157:H7 in all food types. Although there was no statistical difference in the number of positive samples when using IMS vs. non-IMS techniques, more positive samples were detected when IMS was used in both ground beef and radish sprouts. It appears that the improvement was more significant in radish sprouts, which had a higher level of background flora than ground beef. The results also suggest that the combination of CT-SMAC and IMS is sufficient to recover low levels of E. coli O157:H7 in high background flora food samples.
Park, Su-Jong;Park, Jun-Beom;Kang, Ji-Hoon;Song, Kyung Bin
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.46
no.10
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pp.1265-1269
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2017
This study was performed to evaluate the effects of combined treatment of clove bud essential oil (CBEO) and mild heat (MH) on inactivation of Escherichia coli O157:H7 inoculated onto red oak leaves. Combined treatment of 0.2% CBEO with MH at $50^{\circ}C$ exhibited the highest inhibitory effect against E. coli O157:H7 among treatments, resulting in 1.45 log reduction compared with water washing treatment. In addition, inhibitory effect of the combined treatment was maintained during storage of red oak leaves at $4^{\circ}C$ for 9 days, showing 1.67~2.25 log reductions compared with non-treated samples. Thus, these results indicate that combined treatment with CBEO/MH can be used to ensure the microbiological safety of fresh leaf vegetables such as red oak leaves during storage.
A lactic acid bacterium producing an antimicrobial substance against Escherichia coli O157:H7 was isolated from raw milk and identified as Lactobacillus amylovorus ME-1. In addition to E. coli O157 :H7, the antimicrobial substance also inhibited the growth of Bacillus cereus, Listeria monocytogenes, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyrogenes, and Yersinia enterocolitica. The antimicrobial substance was stable at pH 2-12 and $121^{\circ}C$ for 15 min and insensitive to proteinase K, protease, amylase, and catalase. Purification of the antimicrobial substance was conducted through methanol and acetonitrile/ethylacetate extraction, ultrafiltration with a 500 Da cutoff, thin layer chromatography (TLC) with silicagel 60, and high performance liquid chromatography (HPLC) with a $C_{18}$ reverse phase column. The ${\lambda}_{max}$ of the purified antimicrobial substance was determined as 192 nm by ultra violet (UV) scanning, while the molecular weight was estimated as 453 Da based on the mass spectrum. Accordingly, the current results suggest that the antimicrobial substance from the L. amylovorus ME-1 was not a bacteriocin, but rather a new non-proteinaceous substance distinct from acidophilin, acidolin, diacetyl, and reuterin.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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