목질진흙버섯의 균사생육에 적합한 배지로는 MYA(malt yeast agar)와 SMS(soybean flour malt extract sugar)이며, MYA를 기본배지로 사용하였다. 균사생육은 $30^{\circ}C$의 온도와 pH는 5.0에서 생장이 양호하였다. 영양원으로는 malt extract 2%, yeast extract 0.2%와 $KH_{2}PO_{4}$ 0.1% 상태에서 균사생장 및 밀도가 양호하였다. C/N비는 10 : 1의 비율이 가장 적합하였다. 삼각플라스크배양을 위해서는 용기부피 300 ml Shake flask에 100 ml의 배양액을 넣고 $5{\sim}6$개 균사체 절편을 접종하여 20일간 배양하면 높은 고립상의 균체를 양호하게 증식시킬 수 있었다. 대량 액체종균 배양을 위해 접종원을 균질기로 분쇄하여 통기량 2.0 vvm의 조건에서 12일 배양하면 높은 균사의 생장을 보였고 접종에도 수월하였다.
고춧가루가 국균(麴菌)의 각종(各種) 효소생산(酵素生産) 및 균체생육(菌體生育)에 미치는 영향을 규명할 목적(目的)으로 Aspergillus oryzae A (단모균)와 Aspergillus oryzae G(장모균) 균주를 고춧가루를 첨가한 밀기울 배지 및 Czapek-Dox 액체배지에 배양하여 그 효소력(酵素力), 건조균체중량 pH. 적정산도 등을 측정한 결과는 다음과 같다. 1. 밀기울 고체배지에 $0.05{\sim}30%$ 농도(濃度)의 고춧가루를 첨가한 구에서는 무염기질(無鹽基質)에서의 중성 및 알카리 protease의 활성이 대조구(밀기울 단독 배양구)에 비하여 높았으나 Aspergillus oryzae G의 경우는 고춧가루 첨가시 무염기질(無鹽基質)에서의 산성 protease의 생성이 오히려 저하 되었다. 2. $0.05{\sim}10%$의 고춧가루 첨가시는 내염(耐鹽)기질에서의 중성 및 알카리 protease의 활성이 대조구에 비하여 높았다. 3. 고춧가루 첨가(添加)는 amylase활성(活性)에 별(別)로 효과(效果)가 없었다. 4. Cellulase활성은 밀기울 단독구에 비하여 고춧가루 첨가구(添加區)에서 전반적(全般的)으로 높은 경향을 보였다. 5. Czapek-Dox액체배지상(液體培地上)에서 각균(各菌)의 건조균체중량(乾燥菌體重量)은 고춧가루 첨가농도(添加濃度)가 증가함에 따라 증가하는 경향을 보였고 단모균은 장모균에 비해 그 증가 현상이 현저하였다. 6. 고춧가루는 Czapek-Dox 첨가배지((添加培地)의 pH를 저하(低下)시키는 경향을 나타내었다. 7. 고춧가루 첨가농도(添加濃度)가 증가함에 따라 Czapek-Dox 액체배지의 적정산도는 증가현상을 나타내었으며 장모균에 비하여 단모균의 경우 적정산도의 증가현상이 현저했다.
오대산의 1,100 m 부근에 자생하는 사스래나무에서 차가버섯을 채집하였다. 나무의 흉고직경은 $10{\sim}50$ cm이었으며, 차가버섯 균핵의 크기는 $8{\times}5{\sim}20{\times}16$ cm이었다. 시험 균주들과 NCBI에 등록되어 있는 Inonotus obliquus 균주 간의 유연관계가 아주 가까운 것으로 확인되었다. 그리고 NCBI 등록균주들을 제외한 10가지 균주 모두 ITS 분석에서 높은 상동성을 보였다. 균사생장력은 균주간에 큰 차이를 보였다. KFRI 744가 가장 빠른 생장력을 보였으며, KFRI 739가 가장 낮은 생장력을 보였다. 그리고 KFRI 744와 739 간에는 거의 두 배 가까운 생장력의 차이가 발생한 반면에 KFRI 735와 738 간에는 차이가 거의 없었다. 중량감소율은 KFRI 744가 가장 높았으며, KFRI 741이 가장 낮았다. 대부분의 대치배양 조합에서 대치선이 형성되었지만 KFRI 740과 741, KFRI 742와 743 조합에서는 대치선이 형성되지 않았다.
곡물을 이용하여 영지버섯의 균사성장에 적합한 고체배양 조건실험을 실시하였다. 냉침에 의한 곡물의 수분함량 변화는, 단엽콩이 11시간, 메주콩이 10시간, 검정콩이 12시간만에 hydration time에 도달하였고, 균사성장이 가능한 수분함량을 나타내었다. 그 외 곡물인 보리, 수수, 율무, 밀, 현미는 각 5시간, 2.5시간, 4시간, 12시간, 10시간만에 hydration time에 도달하였으나 버섯 균사체가 성장하기에는 부족한 수분함량을 보였다. 냉침에 의한 곡물의 수분함량 변화는, 콩의 경우 침지 120분${\sim}$150분만에 65%정도의 수분함량에 도달하였으며, 보리가 17분, 수수가 30분, 현미가 40분, 율무가 60분, 밀이 120분만에 65%의 수분함량이 되어, 모두 균사배양에 적합한 수분함량에 도달하였다. 따라서 곡물을 이용한 담자균의 균사배양을 위해서는 온침에 의한 수분함량 조절이 더욱 적합하였다. 또한 종 시료의 경우는 침지과정과 살균을 병행하여 고체배양하는 것이 가능하였는데, 콩 무게의 1.1배로 수분을 첨가할 때에 배양기 바닥에 수분이 거의 남지 않아 균사배양에 적합하였다. 각 고체재료의 수분함량에 따른 균사성장속도 및 균사체량(glucosamine 함량) 측정에서는 시료의 종류에 관계없이 수분함량이 65%일 때 균사성장속도 및 균사체량 측면에서 가장 양호한 결과를 나타내었다. 각 고체재료의 종류에 따른 균사성장속도는 보리 > 밀 > 율무=수수 > 현미 > 콩의 순이었으며, 각 고체재료의 종류에 따른 glucosamine의 함량은 밀 > 보리 > 현미 > 율무 > 수수 > 콩의 순서로 나타났다.
본 연구에서는 울릉도에서 수집한 자생 버섯 균주 5종의 평판배지 배양 특성과 액체배양에서의 특성을 확인하여 자생 균류의 이용을 위한 기초 정보를 확보하였다. 5종의 야생 균주의 최적 배양온도는 25-30℃이고, pH는 4.0-5.0의 산성임을 확인하였다. 특히P. brumalis는 35℃에서 생장 속도가 가장 빠른 것으로 보아 고온성 버섯으로 판단된다. 실험에 사용한 상용 배지 중 최적 배지는 F. punctata의 경우 MEPA 배지, P. ulleungus는 MMNA 배지, G. subnudus는 MEA 배지, T. kmetii는 MMNA 배지, 마지막으로P. brumalis는 모든 배지에서 빠른 생장 속도를 보였으며 6종류의 배지 중 MEA 배지는 모든 균주의 균사 밀도가 낮아 배양이 적합하지 않은 조성임을 확인하였다. P. brumalis는 5종의 균주중 가장 빠른 생육 속도를 보였으며, 반면에P. ulleungus는 가장 저조한 생장을 보여 같은 속(genus)의 종이지만, 생육특성의 차이가 극명함을 보였다. 액체배양을 통해 배양 기간에 따른 배양여액의 건조 중량을 비교한 결과 배양 기간이 길수록 건조량이 감소하는 양상을 보였으며, 특히 6개월 이전까지 큰 폭으로 감소하였다. 이 결과로 정치배양 조건에서의 액체배양은 한달 이상의 배양 시간이 주어져야만 배지 성분을 충분히 이용할 수 있다는 것을 확인하였다. 본 실험의 결과로 5종의 균주에 대한 최적 배양조건을 확립하고 향후 응용 연구에 기초 자료로 활용할 수 있을 것으로 기대한다.
한국 및 일본산 잣버섯 수집균주(21균주)를 소나무 톱밥배지에서 배양하여 그 재배 특성 (균사체 배양기간, 자실체 발생기간, 버섯의 생산량, 자실체의 색상과 형태)을 조사하였다. 잣버섯의 균사체 배양기간은 40~65일, 자실체 발생기간은 6~22일로 나타났다. 자실체 생산성을 조사한 결과, 톱밥배지 600 g당 생중량과 자실체 발생 수는 각각 약 48.3 g과 8.7개였으며, 자실체의 색과 형태는 균주별로 다양하게 관찰되었다. 균긁기 처리군은 미처리군(대조군)에 비해 자실체 발생기간이 길었으며, 생중량과 갓 직경은 감소하였다. 잣버섯의 재배 특성을 비교한 결과, 소나무 톱밥 재배용으로 3균주(KFRI 1199, 1302, 1331)가 가장 적합한 것으로 평가되었다.
The effects of different concentrations of three amino acids as carbon and or nitrogen sources on mycelial dry weights, changes in pH values of synthetic medium, ammonia secretion and extracellular protease activity by three zoosporic fungi, pathogens of fish and shellfish, were studied. As compared with the control, the addition of isoleucine and aspartic acid as nitrogen sources were generally stimulative for mycelial dry weight production whereas phenylalanine was inhibitory irrespective to the tested fungal species. When amino acids served as carbon and nitrogen sources, the mycelial dry weights of the three fungi were increased (mostly non-significantly) relative to untreated control but weights were decreased as the concentrations of the three amino acids raised. The addition of individual amino acids as carbon and nitrogen sources to the medium significantly increased pH values of the medium comparable to the control. The addition of each of the three amino acids as carbon and nitrogen sources to the medium significantly induced ammonia secretion by the three species of zoosporic fungi. Ammonia secretion in synthetic medium amended with amino acids as nitrogen source raised by the three zoosporic fungi relative to untreated control except in case of Achlya racemosa treated with isoleucine. Extracellular protease activity was almost promoted in case of Achlya proliferoides and Saprolegnia furcata cultures treated with isoleucine and aspartic acid individually in presence of glucose and vice versa in case of phenylalanine. However, extracellular protease activity of A. racemosa decreased compared with the control at various concentrations of isoleucine and both phenylalanine and aspartic acid assumed inconsistent effects. Extracellular protease activity of the three zoosporic fungi in the medium devoid of glucose varied depending upon zoosporic fungal species, the tested amino acid and the applied concentrations. The values of protease activity were approximately less two folds than that obtained in presence of glucose.
1. Cassava 전분(澱粉)을 이용(利用)하여 곰팡이를 $28^{\circ}C$에서 96시간(時間) 액체정치(液體定置) 배양(培養)한 바 배지중(培地中)의 Cassava 전분함량(澱粉含量)이 6%, 72시간(時間)일 때에 균체량(菌體量)이 가장 많았다. 2. Cassava 전분(澱粉)이 6% 함유(含有)된 배지(培地)에서 곰팡이를 배양(培養)하여 얻은 균체단백질량(菌體蛋白質量)은 Rhizopus는 48시간(時間) 배양(培養)하였을때 가장 많았고, Aspergillus niger 및 Aspergillus fumigatus에서는 72시간(時間) 배양(培養)했을 때 균체단백질량(菌體蛋白質量)이 많았다. 3. Cassava 전분량(澱粉量)을 4%, 6% 및 8%되게 변화(變化)시킨 배지(培地)에서 분리균(分離菌)을 접종(接種)하여 96시간(時間) 배양(培養)하면서 24시간(時間)마다 배양여액(培養濾液) 중(中)의 m-amylase의 활성(活性)을 측정(測定)한 바 8% 농도(濃度)에서 Aspergillus niger 및 Aspergillus fumigatus는 72시간(時間)일 때 높은 D.P 값을 얻었고. Rhizopus 는 144시간(時間)일 때 D.P 값이 높았다.
Sikhae is a Korean traditional beverage of saccharified rice. Its factory waste(SFW) is usually thrown away instead of being used. We developed a cheap substrate of SFW for use in liquid spawn that is known for its higher fruit body yields than grain spawn in sawdust cultivation. Mycelia of Lentinula edodes ASI 3046, which is regarded as the most suitable strain for sawdust cultivation, were cultured on six kinds of previous known media and SFW. As the seven kinds of media were applied, a Sikhae Factory Waste(SFW) was most excellent in growth. The dried mycelial weight in SFW was almost four times as much as that in the other media. In the flask culture, optimum culture conditions for the mycelial growth were obtained after 13 days of cultivation at media volume of 100 ml, 100 rpm, initial pH 4.5, and $25^{\circ}C$. The best mycelial growth was observed when $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ and D-sucrose were added as a supplement in SFW. SWM must be a remarkable medium for L. edodes because of its simple preparation and low cost.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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